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文档简介

EcoRI酶切鉴定组分体系质粒DNA3gl水4plbuffer1.5glBSA0.5ulEcoRI1ul10m体系，于水浴中切割3小时，然后电泳，点样5pl。通常质粒DNA出现三个条带，由前到后的顺序为闭环质粒、线性质粒和开环质粒。BamHI和HindIII双酶切体系鉴定使用pMD-18T载体连接的目的片段，酶切鉴定时选用BamHI和HindIII双酶切体系鉴定：（见下表）依DNA量定体系5gl10gl10"10gl重组DNA26.534BSA0.30.50.2—BamHI0.410.50.5HindIII0.410.50.5Buffer(10X)0.5111H2O1.4—4.84「反应条件37°C水浴，3hr，电泳检测若质粒DNA不能被限制酶所切割，这几乎总是由于从细菌沉淀或从核酸沉淀中去除所有上清时注意得不够，可用酚:氯仿对solution进行抽提，以去除少量制备中的杂质，若问题依然存在，可用离心，柱层析纯化DNA。XbalI和SalI双酶切体系鉴定依DNA量定体系20pl10gl10gl火菌去离子水8.54.3—10Xbuffer211BSA(10ug/ul)0.20.10.1DNA(1ug/ul)8.347.9XbaI(10U/ul)0.50.30.5SalI(10U/ul)0.50.30.5反应条件37C，1~3hr，电泳检测HindII单酶切依DNA量定体系30gl火菌去离子水410Xbuffer3DNA(1ug/ul)20HindIII3反应条件37C，1〜3hr，电泳检测NotI和SalI双酶切体系鉴定依DNA量定体系20pl10gl10gl10gl30gl40pl火菌去离子水8.54.3—262.410XbufferD211134BSA(10皿l)0.20.10.10.20.60.6DNA(1ug/ul)8.347.961830NotI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5SalI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5

依DNA量定体系20pl10gl火菌去离子水--10Xbuffer21DNA(1ug/ul)178.5NheI10.5反应条件37C,1~3hr，电泳检测反应条件

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