9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性参考范文

第PAGE第5页9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性收稿日期：2013-09-24基金项目：国家自然科学基金（编号： ；江西省高等学科技落地计划（编号： KJLD1302；江西省教育厅科技计划（编号：GJJ1328。通信作者：王文君，博士，教授，研究方向为食品化学与分子营养学。E-mail。黄酮类化合物是一类广泛存在于植物体内具有基本骨架的化合物， 已发现的黄酮类化合物有 9000多种[1] 它是生物体内除蛋白质和核酸以外的一类重要生物分子，尤其是一类重要的信息分子，具有多种多样的生物功能。现代研究证明黄酮类化合物具有扩血管、降血脂、抗凝血、抗炎、抗肿瘤、镇痛以及非酶糖基化等广泛药理活性[2] ，因此成为目前重点研究的植物化学成分之一。糖尿病是一种慢性代谢性疾病，是由于胰岛素缺乏或相对缺乏而形成持续性高血糖症。这种持续性的高血糖症可以导致一些组织器官的代谢异常，产生功能障碍及形态的异常，从而引发众多慢性并发症。目前认为在高血糖的情况下，机体组织的许多重要蛋白质发生非酶糖基化反应是糖尿病慢性并发症的主要发病机制之一 [3-4] 。非酶糖化反应是蛋白质和葡糖在体内发生酶促反应形成 Schiff 碱和Amadori产物等早期产物，进经过氧化、重排、交联等过程，形成不可逆的非酶糖基化终末产物（dnds AGE）的一系列复杂反应。有效控制高血糖，寻找干预非酶糖基化过程的措施，减少糖基化终末产物的形成是防治糖尿病慢性并发症和其他老年性疾病的一个可行且有效的方法。抑制蛋白质非酶糖基化已成为药物开发的一个重要靶点 [5-7] 。医学药物学研究证实氨基胍可以有效抑制蛋白质的糖基化反应 [7]。黄酮类化合对人体具有多种潜在的生物活性，如抗癌、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗炎、抗衰老、增强免疫力、防治心脑血管系统疾病和呼吸系统疾病等，且对AGEs的生成也有一定抑制作用。青钱柳（Cyclocaryapaliurus 、银杏（Ginkgobiloba 、绿茶（Camellia sinensis 芦荟（Aloevera var. chinensis 荷叶（Foliumnelumbinis 、蛇接骨草（Gynuraprocumbens、菝葜（Smilaxchina 鱼腥草（Houttuyniacordata 、三叶草（Trifoliumrepens ）等9种植物都属于自然中常见的实用性较强的天然植物，有些还是药食同源植物。本研究探讨了 9种植物粗黄酮的体外降脂活性和其对非酶糖基化的抑制用，以期为其药用价值的开发利用提供科学依据。材料与方法试验材料青钱柳、银杏、绿茶、芦荟、鱼腥草、荷叶、蛇接骨草、菝葜、三叶草，都来源于江西农业大学植物园。主要试剂氢氧化铝、聚乙烯醇、三油酸甘油酯、乙二醛均购自天津永大化学剂，胰脂肪酶、氨基胍和标准牛血清白蛋白购自 Sigma 公司。主要仪器电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司） 旋转蒸发器（上海亚荣生物化仪器厂）型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）SP-754PC型分光光度计（上海光谱仪器有限公司） ；960 型荧光分光光计（上海精密科学仪器有限公司） ；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-6电热恒温水浴锅（国华电器有限公司） 。试验方法黄酮的提取植物烘干至恒重后粉碎过 70 目筛，称取 100g 用石油醚按料液比 1g ∶10mL浸提过夜脱脂脱色，蒸干备用。准确称取处理后样品50g，超声辅助 乙醇浸提（料液比 1g ∶10℃，min，0，真空过滤后，将滤液进行真空浓缩至约 0m，得总黄酮粗提取物。用 乙醇将粗提黄酮定容至 100mL容量瓶得样品总黄酮溶液，再从100mL中取5mL溶液用乙醇定容至 50mL容量瓶中为备用液。体外降脂试验降脂试验根据霍世欣等的方法[8]0.05mol/L液滴定。通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶活性的差异，可得提取物对脂肪酶的抑制率，体现降脂活性的大小，并与含量进行相关性比较。 抑制率抑制脂肪酶活性/脂肪酶活性×（1）脂肪酶活性测定法：取 100mL 三角瓶，加入 5mL0.025mol/L 酸缓冲液（pH值7.4）和4 mL聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液（ 0.22g/mL聚乙烯醇，油酸甘油酯 1mL 混合，高速搅拌均匀，得乳白色乳化液）作为底物，置于 7℃水浴中反应 0min 。加入1mL 脂肪酶（2mg/m，准确反应15min 后，加乙醇终止反应。加酚酞 2 ～3 滴，用mol/LNaOH 标准溶液滴定至微红色，平行试验 3次。空白试验的酶液在反应终止后加入。糖基化试验在蛋白质非酶糖基化反应体系中加入粗提黄酮进行药物干预试验，分别于 1、、6、9、12、15d 用荧光分光度计测定荧值，绘制动态曲线，加氨基胍作阳性对照，加水作阴性对照，进行抑制能力分析；以氨基胍作参比，计算粗提物对非酶糖基化终末产物的抑制率，并与含量进行相关性分析。具体试验过程如下：（反应液配制：根据文献[9]的方法稍加修改，将乙二醛（12、牛血清白蛋白（20mg/mLEDTA1mol/LpH7.4的磷酸缓冲液（0.2mol/L中混合而成，备用。（蛋白质非酶糖基化的药物干预试验：根据文献[10]修改，将提取液1浓度为1与PBS1mL90℃下混合，40min（以去除乙醇）后加入反应液1mL，分别于37℃水浴避光孵育、、、、12、15d，重复3次。氨基胍10.1mg/mL）与反应液做阳性对照，蒸馏水1mL与反应液作空白对照。（抑制率的测定：根据糖基化终产物有自发荧光的特性，采用荧365，发射波长440nm[11]，狭缝10，灵敏度1。I=（B-A）/A×（）式中：I为抑制率，A为空白对照荧光强度， B为样品荧光强度2结果与分析2.1 体外降脂试验测定结果蛇接骨草提取物的体外降脂效果最好，抑制率达到荷叶，抑制率仅为30.64，两者差异极显著（P绿茶>>银杏>菝葜青钱柳>鱼腥草。种植物粗黄酮降脂效果样品抑制率（青钱柳36.74±9.77Bbc 银杏47.51±6.85Bb 芦荟66.73±12.7Aa 荷叶30.64±8.06Bc 蛇接骨草72.57±4.68Aa 菝葜41.10±14.06Bbc 鱼腥草32.39±3.24Bc 三叶草64.75±4.10Aa 绿茶66.51±1.61Aa 注：同列数据后不同大写字母表示差异极显著 （P 往人们对糖尿病的治疗重点放在对血糖的控制上，但随着研究的深入，蛋白质非酶糖基化反应与糖尿病并发症的关系日益受到人们的重视。体内蛋白质的非酶糖基化反应与很多并发症的病理机制有关，如糖尿病酮症酸毒、糖尿病眼病、糖尿病性肾病等。蛋白质非酶糖基化并不会因为血糖到控制而停止，依然会造成糖尿病慢性并发症的发生和发展，即所谓的“高血糖记忆”状态。通过阻断非酶糖化反应从而防治上述疾病的发生展是近年来药物治疗学领域研究的新方向 [14]。黄酮具有多种生物活性，如抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂等。本研究对9种天然植物的黄酮提取物进行了体外降脂和非酶糖基化的研究。发现蛇接骨草、绿茶、三叶草的体外降脂作用比较明显；而非酶糖基化的研究表明芦荟对非酶糖基化的抑制率较高，且各种植物黄酮提取物对非酶糖基化的抑制率都随着时间的延长而增强，与文献 [15] 报道一致。尽管体外试验表明 9 种植物的黄酮具有体外降脂和对非酶糖基化抑制作用，但黄酮对 AGEs的抑制作用机制目前研究的不是很清楚，还有待进步研究。4结论第PAGE第7页试验中9种植物的黄酮提取物均对脂肪酶有一定的抑制作用，绿茶、蛇接骨草、三叶草对脂肪酶抑制率均在 以上，其余的多在 间。这些植物提取物的抗氧化作用机制可能是因为黄酮类化合物能减少自由基的产生和清除自由基，从而抑制脂质氧化。从非酶糖基化试验中可以看到，观察1～15d随着时间的延长，各样品的荧光强度逐步增高，提示各提取物的抑制能力增强。且观察15d酮提取物均对蛋白非酶糖基化反应具有一定的抑制作用，其中以芦荟的抑制作用最强，抑制率均达到以上。希望以上资料对你有所帮助，附励志名言3条：1、理想的路总是为有信心的人预备着。2、最可怕的敌人，就是没有坚强的信念。——罗曼·罗兰人生就像爬坡，要一步一步来。——丁玲卫生管理制度1 总则1.1 为了加强公司的环境卫生管理，创造一个整洁、文明、温馨的购物、办公环境，根据《公共场所卫生管理条例》的要求，特制定本制度。1.2 集团公司的卫生管理部门设在企管部，并负责将集团公司的卫生区域详细划分到各部室，各分公司所辖区域卫生由分公司客服部负责划分，确保无遗漏。2 卫生标准2.1 室内卫生标准2.1.1 地面、墙面：无灰尘、无纸屑、无痰迹、无泡泡糖等粘合物、无积水，墙角无灰吊、无蜘蛛网。2.1.2 门、窗、玻璃、镜子、柱子、电梯、楼梯、灯具等，做到明亮、无灰尘、无污迹、无粘合物，特别是玻璃，要求两面明亮。2.1.3 柜台、货架：清洁干净，货架、柜台底层及周围无乱堆乱放现象、无灰尘、无粘合物，货架顶部、背部和底部干净，不存放杂物和私人物品。2.1.4 购物车（筐）、直接接触食品的售货工具（包括刀、叉等）：做到内外洁净，无污垢和粘合物等。购物车（筐）要求每天营业前简单清理，周五全面清理消毒；售货工具要求每天消毒，并做好记录。2.1.5 商品及包装：商品及外包装清洁无灰尘（外包装破损的或破旧的不得陈列）。2.1.6 收款台、服务台、办公橱、存包柜：保持清洁、无灰尘，台面和侧面无灰尘、无灰吊和蜘蛛网。桌面上不得乱贴、乱画、乱堆放物品，用具摆放有序且干净，除当班的购物小票收款联外，其它单据不得存放在桌面上。2.1.7 垃圾桶：桶内外干净，要求营业时间随时清理，不得溢出，每天下班前彻底清理，不得留有垃圾过夜。2.1.8 窗帘：定期进行清理，要求干净、无污渍。2.1.9 吊饰：屋顶的吊饰要求无灰尘、无蜘蛛网，短期内不适用的吊饰及时清理彻底。2.1.10 内、外仓库：半年彻底清理一次，无垃圾、无积尘、无蜘蛛网等。2.1.11 室内其他附属物及工作用具均以整洁为准，要求无灰尘、无粘合物等污垢。2.2 室外卫生标准2.2.1 门前卫生：地面每天班前清理，平时每一小时清理一次，每周四营业结束后有条件的用水冲洗地面（冬季可根据情况适当清理），墙面干净且无乱贴乱画。2.2.2 院落卫生：院内地面卫生全天保洁，果皮箱、消防器械、护栏及配电箱等设施每周清理干净。垃圾池周边卫生清理彻底，不得有垃圾溢出。2.2.3 绿化区卫生：做到无杂物、无纸屑、无塑料袋等垃圾。3 清理程序3.1 室内和门前院落等区域卫生：每天营业前提前10分钟把所管辖区域内卫生清理完毕，营业期间随时保洁。下班后5-10分钟清理桌面及卫生区域。3.2 绿化区卫生：每周彻底清理一遍，随时保持清洁无垃圾。4 管理考核4.1 实行百分制考核，每月一次（四个分公司由客服部分别考核、集团职能部室由企管部统一考核）。不符合卫生标准的，超市内每处扣0.5分，超市外每处扣1分。4.2 集团坚持定期检查和不定期抽查的方式监督各分公司、部门的卫生工作。每周五为卫生检查日，集团检查结果考核至各分公司，各分公司客服部的检查结果考核至各部门。4.3 集团公司每年不定期组织卫生大检查活动，活动期间的考核以通知为准。9种植物粗提总黄酮的体外降脂及抑制非酶糖基化的活性收稿日期：2013-09-24基金项目：国家自然科学基金（编号： ；江西省高等学科技落地计划（编号： KJLD1302；江西省教育厅科技计划（编号：GJJ1328。通信作者：王文君，博士，教授，研究方向为食品化学与分子营养学。E-mail。黄酮类化合物是一类广泛存在于植物体内具有基本骨架的化合物， 已发现的黄酮类化合物有 9000多种[1] 它是生物体内除蛋白质和核酸以外的一类重要生物分子，尤其是一类重要的信息分子，具有多种多样的生物功能。现代研究证明黄酮类化合物具有扩血管、降血脂、抗凝血、抗炎、抗肿瘤、镇痛以及非酶糖基化等广泛药理活性[2] ，因此成为目前重点研究的植物化学成分之一。糖尿病是一种慢性代谢性疾病，是由于胰岛素缺乏或相对缺乏而形成持续性高血糖症。这种持续性的高血糖症可以导致一些组织器官的代谢异常，产生功能障碍及形态的异常，从而引发众多慢性并发症。目前认为在高血糖的情况下，机体组织的许多重要蛋白质发生非酶糖基化反应是糖尿病慢性并发症的主要发病机制之一 [3-4] 。非酶糖化反应是蛋白质和葡糖在体内发生酶促反应形成 Schiff 碱和Amadori产物等早期产物，进经过氧化、重排、交联等过程，形成不可逆的非酶糖基化终末产物（dnds AGE）的一系列复杂反应。有效控制高血糖，寻找干预非酶糖基化过程的措施，减少糖基化终末产物的形成是防治糖尿病慢性并发症和其他老年性疾病的一个可行且有效的方法。抑制蛋白质非酶糖基化已成为药物开发的一个重要靶点 [5-7] 。医学药物学研究证实氨基胍可以有效抑制蛋白质的糖基化反应 [7]。黄酮类化合对人体具有多种潜在的生物活性，如抗癌、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗炎、抗衰老、增强免疫力、防治心脑血管系统疾病和呼吸系统疾病等，且对AGEs的生成也有一定抑制作用。青钱柳（Cyclocaryapaliurus 、银杏（Ginkgobiloba 、绿茶（Camellia sinensis 芦荟（Aloevera var. chinensis 荷叶（Foliumnelumbinis 、蛇接骨草（Gynuraprocumbens、菝葜（Smilaxchina 鱼腥草（Houttuyniacordata 、三叶草（Trifoliumrepens ）等9种植物都属于自然中常见的实用性较强的天然植物，有些还是药食同源植物。本研究探讨了 9种植物粗黄酮的体外降脂活性和其对非酶糖基化的抑制用，以期为其药用价值的开发利用提供科学依据。材料与方法试验材料青钱柳、银杏、绿茶、芦荟、鱼腥草、荷叶、蛇接骨草、菝葜、三叶草，都来源于江西农业大学植物园。主要试剂氢氧化铝、聚乙烯醇、三油酸甘油酯、乙二醛均购自天津永大化学剂，胰脂肪酶、氨基胍和标准牛血清白蛋白购自 Sigma 公司。主要仪器电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司） 旋转蒸发器（上海亚荣生物化仪器厂）型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）SP-754PC型分光光度计（上海光谱仪器有限公司） ；960 型荧光分光光计（上海精密科学仪器有限公司） ；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-6电热恒温水浴锅（国华电器有限公司） 。试验方法黄酮的提取植物烘干至恒重后粉碎过 70 目筛，称取 100g 用石油醚按料液比 1g ∶10mL浸提过夜脱脂脱色，蒸干备用。准确称取处理后样品50g，超声辅助 乙醇浸提（料液比 1g ∶10℃，min，0，真空过滤后，将滤液进行真空浓缩至约 0m，得总黄酮粗提取物。用 乙醇将粗提黄酮定容至 100mL容量瓶得样品总黄酮溶液，再从100mL中取5mL溶液用乙醇定容至 50mL容量瓶中为备用液。体外降脂试验降脂试验根据霍世欣等的方法[8]0.05mol/L液滴定。通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶活性的差异，可得提取物对脂肪酶的抑制率，体现降脂活性的大小，并与含量进行相关性比较。 抑制率抑制脂肪酶活性/脂肪酶活性×（1）脂肪酶活性测定法：取 100mL 三角瓶，加入 5mL0.025mol/L 酸缓冲液（pH值7.4）和4 mL聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液（ 0.22g/mL聚乙烯醇，油酸甘油酯 1mL 混合，高速搅拌均匀，得乳白色乳化液）作为底物，置于 7℃水浴中反应 0min 。加入1mL 脂肪酶（2mg/m，准确反应15min 后，加乙醇终止反应。加酚酞 2 ～3 滴，用mol/LNaOH 标准溶液滴定至微红色，平行试验 3次。空白试验的酶液在反应终止后加入。糖基化试验在蛋白质非酶糖基化反应体系中加入粗提黄酮进行药物干预试验，分别于 1、、6、9、12、15d 用荧光分光度计测定荧值，绘制动态曲线，加氨基胍作阳性对照，加水作阴性对照，进行抑制能力分析；以氨基胍作参比，计算粗提物对非酶糖基化终末产物的抑制率，并与含量进行相关性分析。具体试验过程如下：（反应液配制：根据文献[9]的方法稍加修改，将乙二醛（12、牛血清白蛋白（20mg/mLEDTA1mol/LpH7.4的磷酸缓冲液（0.2mol/L中混合而成，备用。（蛋白质非酶糖基化的药物干预试验：根据文献[10]修改，将提取液1浓度为1与PBS1mL90℃下混合，40min（以去除乙醇）后加入反应液1mL，分别于37℃水浴避光孵育、、、、12、15d，重复3次。氨基胍10.1mg/mL）与反应液做阳性对照，蒸馏水1mL与反应液作空白对照。（抑制率的测定：根据糖基化终产物有自发荧光的特性，采用荧365，发射波长440nm[11]，狭缝10，灵敏度1。I=（B-A）/A×（）式中：I为抑制率，A为空白对照荧光强度， B为样品荧光强度2结果与分析2.1 体外降脂试验测定结果蛇接骨草提取物的体外降脂效果最好，抑制率达到荷叶，抑制率仅为30.64，两者差异极显著（P绿茶>>银杏>菝葜青钱柳>鱼腥草。种植物粗黄酮降脂效果样品抑制率（青钱柳36.74±9.77Bbc 银杏47.51±6.85Bb 芦荟66.73±12.7Aa 荷叶30.64±8.06Bc 蛇接骨草72.57±4.68Aa 菝葜41.10±14.06Bbc 鱼腥草32.39±3.24Bc 三叶草64.75±4.10Aa 绿茶66.51±1.61Aa 注：同列数据后不同大写字母表示差异极显著 （P 往人们对糖尿病的治疗重点放在对血糖的控制上，但随着研究的深入，蛋白质非酶糖基化反应与糖尿病并发症的关系日益受到人们的重视。体内蛋白质的非酶糖基化反应与很多并发症的病理机制有关，如糖尿病酮症酸毒、糖尿病眼病、糖尿病性肾病等。蛋白质非酶糖基化并不会因为血糖到控制而停止，依然会造成糖尿病慢性并发症的发生和发展，即所谓的“高血糖记忆”状态。通过阻断非酶糖化反应从而防治上述疾病的发生展是近年来药物治疗学领域研究的新方向 [14]。黄酮具有多种生物活性，如抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂等。本研究对9种天然植物的黄酮提取物进行了体外降脂和非酶糖基化的研究。发现蛇接骨草、绿茶、三叶草的体外降脂作用比较明显；而非酶糖基化的研究表明芦荟对非酶糖基化的抑制率较高，且各种植物黄酮提取物对非酶糖基化的抑制率都随着时间的延长而增强，与文献 [15] 报道一致。尽管体外试验表明 9 种植物的黄酮具有体外降脂和对非酶糖基化抑制作用，但黄酮对 AGEs的抑制作用机制目前研究的不是很清楚，还有待进步研究。4结论试验中9种植物的黄酮提取物均对脂肪酶有一定的抑制作用，绿茶、蛇接骨草、三叶草对脂肪酶抑制率均在 以上，其余的多在 间。这些植物提取物的抗氧化作用机制可能是因为黄酮类化合物能减少自由基的产生和清除自由基，从而抑制脂质氧化。从非酶糖基化试验中可以看到，观察1～15d随着时间的延长，各样品的荧光强度逐步增高，提示各提取物的抑制能力增强。且观察15d酮提取物均对蛋白非酶糖基化反应具有一定的抑制作用，其中以芦荟的抑制作用最强，抑制率均达到以上。希望以上资料对你有所帮助，附励志名言3条：1、理想的路总是为有信心的人预备着。2、最可怕的敌人，就是没有坚强的信念。——罗曼·罗兰人生就像爬坡，要一步一步来。——丁玲卫生管理制度1 总则1.1 为了加强公司的环境卫生管理，创造一个整洁、文明、温馨的购物、办公环境，根据《公共场所卫生管理条例》的要求，特制定本制度。1.2 集团公司的卫生管理部门设在企管部，并负责将集团公司的卫生区域详细划分到各部室，各分公司所辖区域卫生由分公司客服部负责划分，确保无遗漏。2 卫生标准2.1 室内卫生标准2.1.1 地面、墙面：无灰尘、无纸屑、无痰迹、无泡泡糖等粘合物、无积水，墙角无灰吊、无蜘蛛网。2.1.2 门、窗、玻璃、镜子、柱子、电梯、楼梯、灯具等，做到明亮、无灰尘、无污迹、无粘合物，特别是玻璃，要求两面明亮。2.1.3 柜台、货架：清洁干净，货架、柜台底层及周围无乱堆乱放