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文档简介

实验四叶绿体色素的提取、分离和性质测定

一、实验目的

了解叶绿体色素提取分离的原理，以及它们的光学特性在光合作用中的意义。

二、实验原理

叶绿体色素主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。四种色素为脂溶性色素，可用有机溶剂丙酮提取。可根据它们在不同有机溶剂中的溶解度不同以及吸附剂上的吸附能力不同而分离。

叶绿素具有荧光现象、在强光照射下易受破坏、具有铜代反应、皂化反应等特性。叶绿素与类胡萝卜素的吸收光谱不同。三、器材与试剂

天平、研钵、剪刀、量筒、漏斗、烧杯、试管、试管架、酒精灯、试管夹、分液漏斗、分光镜、移液枪

植物叶片、丙酮、石英砂、碳酸钙、盐酸、醋酸铜、乙醚、KOH、甲醇、四氯化碳、无水硫酸钠、层析滤纸、毛细滴管

四、方法与步骤(P46-48)

1.叶绿体色素的提取

称取新鲜叶片5g，剪碎后放入研钵中加丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮30mL，以漏斗过滤之，即为色素提取液。放于暗处备用。

2.叶绿体色素的分离(纸层析法)

3.叶绿体色素的理化性质

（1）叶绿素的荧光现象

眼睛光源眼睛光源透射光反射光（2）光对叶绿素的破坏作用

分别取色素丙酮提取液约2ml于2支试管中，一支放于暗处，另一支放在强光下，经2-3h后，观察两支试管中溶液的颜色有何不同。

（3）铜在叶绿素分子中的替代作用

取色素丙酮提取液约3ml于试管中，一滴一滴加浓盐酸，直至溶液出现褐色。然后加醋酸铜晶体少许，用酒精灯慢慢加热试管并观察溶液颜色的变化。（4）黄色素与绿色素的分离

取色素丙酮提取液10ml，加到盛有20ml乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿分液漏斗边缘加入30ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止片刻，溶液即分为两层。色素已全部转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液2次。然后于色素乙醚溶液中加入5ml30%KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静置约10min，再加蒸馏水约10ml,用力摇动后静置分离，则得到黄色素层和绿色素层，分别收集于试管中。（5）色素溶液吸收光谱的观察

①调节分光镜，观察白炽灯光的光谱；

②色素丙酮提取液

③被光破坏的色素丙酮溶液

④铜代叶绿素溶液

⑤皂化叶绿素甲醇溶液

⑥黄色素乙醚溶液五、实验报告

1、对上述实验结果进行分析和解释。

2、回答P48问题2。

下周实验叶绿素a和b含量的测定P50-52

每小组自备一种阳生植物和一种阴生植物的新鲜叶片若干。

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