肝炎病毒核酸检测及临床诊疗最新进展

肝炎病毒核酸检测及临床诊疗

最新进展汇报人：目录Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势目录Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势国际需求2008年美国肝病协会CHB防治指南：持久消除HBV是乙肝的治疗终点，HBVDNA病毒载量尽可能小于或等于10IU/ml。国际需求欧洲肝病研究学会EASL2010年指南指出：将HBVDNA病毒载量尽可能控制在10-15IU/ml，能有效防止疾病的复发。欧洲肝病研究学会EASL2011指南指出：丙肝患者治疗的目标需HCVRNA病毒载量低于50IU/ml。（一）核苷(酸)类似物治疗慢性乙肝路线图

治疗第12周评估原发性治疗失败HBV-DNA水平较基线水平下降幅度<1log/ml开始治疗HBV-DNA基线水平监测病毒学完全应答HBV-DNA<60IU/ml继续治疗监测HBV-DNA/6个月病毒学部分应答HBV-DNA:60~2000IU/ml增加药物治疗监测HBV-DNA/3个月病毒学不充分应答HBV-DNA>2000IU/ml增加/更换有效的药物治疗监测HBV-DNA/6个月治疗第24周评估抗病毒疗效的早期预测因子60IU/ml如何检测？国际治疗路线*由美国坦福大学医学中心Keeffe教授（专家组）提供国内行业指导原则国家SFDA技术审评中心“863”课题《HBVDNA定量试剂技术审评指导原则》中指出：HBVDNA建议最低检测限应≤30IU/mL。DNA提取纯化方法不建议采用煮沸法进行DNA提取。国内行业标准内标全程参与！核酸上样量≥20ul！国内现状加热煮沸高速离心过柱吸附

陈旧的技术繁琐的过程国内现状国内HBVDNA检测方法多为煮沸法，试剂灵敏度均为500IU/ml或1000IU/ml。国内大部分HCVRNA检测方法多为柱提法，试剂灵敏度≥1000IU/ml。令人揪心的性能专家呼吁五种乙型肝炎病毒核酸荧光定量检测试剂盒的比较,中华传染病杂志，2009年第3期——吴星,黄维金,周诚,庄辉等(中国药品生物制品检定所,北京大学医学部)国家“十一五”科技重大专项“乙型和丙型病毒性肝炎诊断及临床监测的研究”——鲁凤民教授北京大学肝炎试剂研究中心专家呼吁：高精度，超敏感的核酸诊断试剂的开发是目前肝炎诊疗中的关键步骤！何去何从面对当前肝病毒核酸检测技术的现状，我们真没有办法了吗？解决方案Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势临床核酸提取技术的发展：煮沸法酚氯仿法旋转离心柱法玻璃粉吸附法二氧化硅吸附法磁珠法国内主流方法国际主流方法核酸检测发展要求核酸检测发展要求高精度高品质高科技磁珠法技术磁珠（电子显微镜）磁珠分离器磁珠法----核酸诊断领域新方向。技术原理DNA磁珠与DNA的结合----通过超顺磁性颗粒富集核酸，实现样品高纯度、高灵敏度的检测。原理技术性能磁珠法提取核酸效率高，纯度高，特异性好。采用最新一代的磁珠提取核酸技术，无需加热、无需高速离心、灵敏度极高，能够很好的满足临床诊疗的需求。抗干扰能力强，能胜任高血脂、强溶血以及药物治疗标本的检测，是临床疾病检测的有力手段。极易实现自动化。

灵敏度可达10IU/ml，是国产主流试剂的50-100倍；准确定量线性范围为20IU/ml～2.0×109IU/ml

可检测HBVA、B、C、D、E、F、G、H共8个基因型。设置了监控内标IC,有效避免假阴性。设置内参比荧光ROX，定量更准确。以湖南圣湘乙肝磁珠法为例临床验证和对比临床验证和对比以湖南圣湘乙肝磁珠法为例*9例定值在12~50IU/ml之间圣湘磁珠法技术在灵敏度方面存在明显优势，与进口试剂具有很好的一致性，能够很好的胜任临床药物疗效的观察和治疗终点的确定。Sansure-HBV：圣湘HBV磁珠法Roche-HBV：罗氏

AmpliPrep-CobasTaqManHBVTestX-HBV：国内一家上市公司的HBV产品（浓缩煮沸法）发展趋势Part1肝病PCR检测国内外需求及现状Part2肝病PCR检测最新解决方案Part3肝病PCR检测的发展趋势发展趋势（25×33+288÷3）×15=？简单化的要求发展趋势

一步法技术：最简便的PCR技术一步操作即可实现核酸提取。发展趋势

一步法技术优势：快速，处理96个样本仅需30min。成本低，仅需一套移液器即可实现病毒检测。操作步骤少，减少误差发生率，提高准确性。极易掌握，对操作人员要求低，方便科室的人员安排。发展趋势准确化的要求----内标监测系统，假阴性的克星。内标的作用内标参与核酸提取与扩增，通过检测内标是否正常来监测核酸提取和核酸扩增的有效性，试验结果是否有效，避免PCR假阴性。FAM:525nmHEX:555nm目的基因内标

真阴性

HEX曲线

FAM曲线设置了参比荧光ROX，用于校正枪的误差、耗材质量（如管盖厚度、透光性能不一