微藻培养的工艺流程

微藻培养的工艺流程一、主要培养种类及其生物学牟氏角毛藻

（1）分类地位属硅藻门，中心纲，盒形藻目，角毛藻科，角毛藻属。

（2）形态特征牟氏角毛藻细胞小，细胞壁薄。大多数单个细胞，也有2~3个细胞相连组成群体。壳面椭圆形至圆形，中央略凸起或少数平坦。壳环面呈长方形至四角形。角毛细而长，末端尖，自细胞壁四角生出，几乎与纵轴平行。色素体1个，呈片状，黄褐色。

（3）生态条件最适温度为25~35℃最适盐度范围为22‰~26‰最适光照强度约在10000~15000勒克斯之间。最适pH为8.0~8.92.中肋骨条藻分类地位中肋骨条藻在分类上属于硅藻门，中心纲，圆筛藻目，骨条藻科，骨条藻属。形态特征细胞为透镜形或圆柱形，细胞直径为6～7μm，壳面圆而突起，周缘着生一圈的细长刺，与相邻细胞的对应刺相接组成链状群体，刺的数目差别很大，一般8～30条，细胞色素体一般为2个，位于壳面，各向一面弯曲，细胞核在细胞中央。

(3)生态条件

中肋骨条藻的生长繁殖最适盐度范围为15‰～30‰，最适温度范围为20～30℃，最适光照强度约在5000~10000勒克斯之间，适宜的pH

范围为7.5～8.5。3.蛋白核小球藻(

1)分类地位：小球藻在分类上属绿藻门，绿藻纲，绿球藻目，卵孢藻科，小球藻属。(

2)形态特征：小球藻细胞球形或广椭圆形。细胞内具有杯状色素体，杯状色素体中含有一个球形的蛋白核。细胞中央有1个细胞核，细胞直径3～5μm，在人工培养的情况下，由于环境条件的差异，细胞可缩小或变大。

(3)生态条件：小球藻在10～36℃温度范围内都能比较迅速的繁殖，最适宜温度在25℃左右。在适温条件下生长的最适光照强度在10000勒克斯左右。适宜的pH约为6～8。

4.亚心形扁藻（1）分类地位扁藻属绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，扁藻属。（2）形态特征亚心形扁藻的藻体一般扁压，细胞前面观广卵形，前端较宽阔，顶端前部凹陷。鞭毛4条由凹陷处生出。细胞内有一个大型、杯状、绿色的色素体，后端有一个呈内上开口的杯状蛋白核，有一个到数个红色眼点比较稳定地位于蛋白核附近、细胞中间略前。原生质体里有一个细胞核。细胞外有一层薄薄的纤维质细胞壁。细胞长11~16μm，宽7~9μm，厚3.5~5μm。能快速活泼游动。（3）生态条件：最适盐度在30‰~40‰之间。最适温度范围在20~28℃之间。最适光照强度约在5000~10000勒克斯之间。最适pH范围约在7.5~8.5之间。5.湛江等鞭金藻（1）分类地位湛江等鞭金藻在分类上属于金藻门，普林藻纲，等鞭藻目，等鞭藻科，等鞭藻属。（2）形态特征：细胞卵形或球形，大小为6~7μm×5~6μm。细胞表面具有几层体鳞片，在细胞前端表面有一些小鳞片。鞭毛2条，等长，由细胞前端生出，二条鞭毛之间有一条附鞭。鞭毛基部有液泡。二片周边色素体呈金黄色，每个色素体内含一个无淀粉鞘而仅一层膜包围的蛋白核。一到几个白糖素颗粒位于细胞中部或前端。（3）生态条件：最适盐度约在22.7‰~35.8‰之间最适温度范围在25~32℃之间最适光照强度约在5000~11000勒克斯之间最适pH范围约在7.5~8.5之间6.绿色巴夫藻（1）分类地位绿色巴夫藻在分类上属于金藻门，普林藻纲，巴夫藻目，巴夫藻科，巴夫藻属。（2）形态特征：绿色巴夫藻无细胞壁。正面观圆形，侧面观椭圆形至倒卵形。大小为6μm×4.8μm×4.0μm。细胞中上部生出2条不等长的鞭毛和一条附鞭。长鞭毛上有许多小的圆形鳞片覆盖，长度是细胞体长的1.5~2倍，短鞭毛光滑，不发达，仅0.3μm，向后弯曲成钩形，位于二鞭毛之间。一个色素体裂成二大片围绕着细胞。细胞核在细胞上部。无蛋白核和眼点。群体细胞成淡黄绿色至绿色。有微弱趋光性。（3）生态条件：最适盐度约在10‰~40‰之间最适温度范围为15~30℃最适光照强度约在4000~10000勒克斯之间pH5~9范围内都可生长二、微藻培培养需要的的培养设施施1、一级保保种室环境条件：：低温弱光照洁净2、二级培培养室透明尼龙袋袋、白色塑塑料桶、水水泵一台、、小型鼓风风机等。3、三级培培养车间在在生生产中配有有培养池、、砂滤装置置、消毒池池、鼓风机机等。4、供气系系统一一般育苗苗场都设有有供气系统统，统一使使用。5、采收工工具在在生产中常常用的有：：水泵一台台、收藻架架、500目收藻袋袋、500L塑料桶桶等。三、微藻培培养的工艺艺流程保种——消消毒——培培养液制备备——接种种——培养管理理——采收收——清洗洗工具和设设施（一）保种种1.液体保保种法将要保藏的的藻种接种种于配制好好的液体培培养基中，，放置在低低温（10℃左右，，不同藻种种略有差异异）、弱光光条件下保保藏。2.固体体培养基保保种法用接种环将将藻液接种种至固体培培养基，将将接种完毕毕的固体培培养基置于于该藻种适适宜的条件件下培养，，待藻细胞胞生长繁殖殖达到较高高密度，在在平板上可可见明显的的条状或块块状的藻细细胞群，再再移至低温温、弱光条条件下保存存。3.固定化化保种法将藻液与褐褐藻酸钠凝凝胶溶液充充分搅匀后后制成胶-藻混悬液液，将悬液液滴入CaCl2溶液中，约约30min后形成成固化的褐褐藻酸钙胶胶珠，置于于培养液保保存。（二）消毒毒主要利用物物理消毒法法和化学消消毒法。（1）物理理消毒法包包括：加热热消毒法和和紫外线消消毒法（2）化学学消毒法包包括：酒精精、高锰酸酸钾、石炭炭酸、盐酸酸、漂白粉粉、洗液等等常用化学学药品消毒毒1、容器与与工具的消消毒（1）水管，，水泵用碘碘液浸泡消消毒，使用用之前用清清水冲洗干净净。（2）藻袋袋用盐酸侵侵泡，使用用之前用清清水冲洗干干净，然后晾晒干干方可使用用。（3）所有有有关的玻玻璃器皿（（试管、三三角瓶等））必须高压灭菌才才可以使用用。（4）一级级藻类所有有的有关用用具必须经经高压灭菌菌后才能使用。2、培养用用水的消毒毒在微藻培养养中水的处处理方法有有下列几种种：（1）加热热消毒法；；仅适用于于一级培养养和二级培培养（2）过滤滤除菌法；；常和漂白白粉消毒法法一起使用用，适用于三级培培养（3）漂白白粉消毒法法；适用于于二级培养养和三级培培养3.重点点介绍三级级培养用水水的消毒：：生产上常用用的具体做做法是，用用市售的强强氯精以1—2g∕∕t处理消消毒12小小时，加入入硫代硫酸酸钠3—5g∕t，，1小时后即即可使用。。消毒用的的强氯精最最好用小包包装（1——2kg∕包包），因为为大包强氯氯精一次性性使用不完完，容易吸吸水，降低有有效氯而失失效。凡是用含有有有效氯消消毒的水体体，加入硫硫代硫酸钠钠后，都可以以用硫酸——碘化钾——淀粉配制制的溶液进进行检测，如果果含有余氯氯水会变蓝蓝，无余氯氯水则不会会变色。（三）培养养液制备1、培养液液的选择不同的培养养液配方所所含的营养养素不完全全相同。同一种微藻藻在不同的的培养液中中生长效果果不同。应应根据实际条件件选择最适适微藻生长长的培养液液配方。2、培养液液的制备微藻的培养养液是在消消毒淡水中中加入各种种营养盐配制而成。。首先按配配方先后称称量各种营营养物质，，可逐一溶解或或一起溶解解，遇到难难溶的含金金属的物质质可以加热溶解解，配方中中的维生素素一般等水水温降至60℃后再加，以以免分解失失效。（四）接种种接种就是把把藻种接到到新配好的的培养液中中的整个操操作过程。。接种过程程虽很简单单，但应注注意藻种的的质量、接接种藻液的的数量和接接种的时间间三个问题题。1、藻种种的质量藻种的质量量对培养结结果影响很很大，一般般应选取无敌害生物物污染、生生活力强、、生长旺盛盛的藻种来来接种培养。外外观藻液的的颜色正常常，且无大大量沉淀，，无明显附壁现现象发生。。2、藻种的的数量接种量和接接种密度对对提高产量量甚为重要要。接种量是指藻种种的绝对数数量；接种种密度是指指藻种接种种后的密度。接接种量，总总的原则是是“宜大不不宜小”。。室内利用三角烧烧瓶、细口口玻璃瓶等等进行藻种种培养时，，接种的藻液量量与新配制制的培养液液量的比例例为1：2—4二级培养和和三级培养养由于培养养容器容量量大，接种种量可根据具体体情况灵活活掌握，但但最少不低低于1：50。（一般我们们三级接种种是1：20）3、接种的的时间一般来说，，接种时间间最好是在在上午8——10时，，不宜在晚上。。因为不少少藻类晚上上藻细胞下下沉，而白白天藻细胞有趋趋光上浮的的习性，尤尤其是具有有运动能力力的种类更明显显。上午8—10时时一般是藻藻细胞上浮浮明显的时候，此此时接种可可以吸取上上浮的且运运动能力强强的藻细胞做藻藻种，弃去去底部沉淀淀的藻细胞胞，起着择择优的作用。（五）培养养过程中的的日常管理理及其注意意事项封闭式的培培养系统管管理方便，，且培养效效率高，无无污染，无二二氧化碳的的丢失，生生产周期可可延长，占占地面积小。露天开放的的培养系统统，其培养养条件不易易控制，全全年的培养时时间、温度度、光照和和污染等使使得藻类的的生长和质量都都受到一定定的影响。。要定期对对藻类的生生长情况进行观观察和检测测，找出影影响藻类生生长的原因因，采取相应的的措施使培培养工作顺顺利进行。。1、搅拌和和充气在开放式培培养微藻时时，搅拌和和充气是十十分必要的，，当当藻藻细细胞胞密密度度高高时时更更应应该该如如此此。。与与静静止止培培养养相相比，，搅搅拌拌充充气气有有很很多多优优点点，，如如防防止止微微藻藻细细胞胞沉沉降降，，减少少附附壁壁或或沉沉底底；；使使培培养养液液中中营营养养物物质质分分布布均均匀匀，，防止止代代谢谢产产物物在在局局部部浓浓度度过过高高；；能能使使培培养养液液温温度度上上下一一致致；；有有效效的的降降低低气气体体传传导导阻阻力力，，有有利利于于光光合合作作用放放出出氧氧气气和和补补充充二二氧氧化化碳碳；；防防止止水水表表面面产产生生菌菌膜膜大规规模模生生产产时时，，都都是是用用鼓鼓风风机机充充气气，，如如果果碰碰到到停停电，，应应立立即即关关掉掉充充气气阀阀，，防防止止空空气气倒倒流流，，把把藻藻液液吸吸入充充气气管管内内。。2、、养养料料和和水水分分的的补补给给在连连续续培培养养过过程程中中，，要要不不断断的的补补给给养养料料。。最最基基本本的原原则则是是根根据据培培养养物物个个体体的的数数量量以以及及繁繁殖殖速速度度来来决决定。。个个体体数数量量少少、、繁繁殖殖速速度度不不大大时时，，少少补补给给或或不不补补给，，反反之之则则多多补补给给。。补补给给时时间间间间隔隔短短，，每每次次的的量量可可少些些，，否否则则多多些些。。多多次次少少量量补补给给的的方方法法要要比比一一次次补补给的的方方法法效效果果好好，，藻藻体体也也易易于于吸吸收收和和利利用用养养料料。。藻藻体生生长长的的速速度度与与水水温温、、光光照照等等有有关关系系，，在在水水温温低低、、光照照弱弱时时，，生生长长较较慢慢，，应应减减少少补补给给和和不不补补给给，，反反之之则多多补补给给。。3、、注注意意酸酸碱碱度度的的变变化化在藻藻细细胞胞大大量量繁繁殖殖和和快快速速生生长长时时，，二二氧氧化化碳碳被被吸吸收利利用用，，导导致致藻藻液液pH上上升升；；同同时时，，由由于于藻藻细细胞胞对对某某些离离子子的的吸吸收收较较快快，，也也会会引引起起培培养养液液pH变变化化。。如如果果酸碱碱度度的的变变化化超超过过藻藻细细胞胞的的适适应应范范围围，，会会对对藻藻类类的的生长长繁繁殖殖产产生生不不利利的的影影响响。。4、、调调节节光光照照除室室内内利利用用人人工工光光源源进进行行藻藻种种培培养养外外，，大大多多数数微微藻培培养养都都是是利利用用太太阳阳光光源源。。极极端端易易变变是是太太阳阳光光源源的的特点点，，所所以以在在培培养养过过程程中中，，必必须须根根据据天天气气情情况况，，不不断调调节节光光照照强强度度，，尽尽可可能能地地适适合合藻藻类类生生长长。。室室外外培培养池一般应有有棚式顶架，，用活动帆布布或者黑薄膜膜调节光照强度。。5、调节温度度对开放式培养养系统来说无无法控制温度度，通常只能能顺从自然温度度的变化。在在夏季培养时时，对开放式式大池遮阴并通风风，既可以避避免强光直射射，也能起到到降温的效果。6、防虫和防防雨晚上，有条件件的室外开放放式培养的池池子须加盖纱纱窗布，防止蚊蚊子进入产卵卵及其他昆虫虫进入，早上上把盖打开。如果果无法加盖，，可在每天早早晨把浮在水水面上的蚊子卵以以及其他入侵侵的昆虫用捞捞网捞掉。刮刮大风时应尽可能能避免大量泥泥土和杂物吹吹入培养池。。7、生长情况况的观察和检检查藻类生长情况况的好坏，是是培养成败的的标准。因此，加强对藻藻类生长情况况的观察和检检查十分重要要。在日常培养工工作中，每天天上、下午必必须定时做一一次全面观察，必必要时可借助助显微镜检查查，掌握藻类类的生长情况。（六）采收目前常用的浮浮游微藻的收收获方法一般般采用水泵直直接抽取藻液液经加密的过过滤袋过滤，，收集浓缩藻藻液。1、采收前的的准备采收前将所有有要用的东西西（水泵、收收藻架、收藻藻袋、打包桶桶以及装藻的的桶等）消毒毒，然后用淡淡水反复冲洗洗干净。2、采收时应应注意的几个个问题（1）一台水水泵连接的收收藻袋不能少少于3个，否否则压力太大大，会将袋子子涨破。（2）收藻时时，不能将整整池藻液抽干干，要留下池池底5—10公分排掉，，因为池底的的藻液中一般般沉积了大量量的死亡藻细细胞，质量较较差。（3）收藻时时应停气，防防止悬浮物和和其他一些杂杂物抽入收藻袋，，影响藻液质质量。（七）清洗工工具和设施藻液采收完毕毕后，应对使使用过的工具具和设备设施进行全面清清洗，以备消消毒。另外，，在高温季节节如果不及时清洗洗藻池，残留留的藻液很快快就会粘附在在池壁上，导致后后面很难清洗洗干净。附：三级藻培养过过程中的具体体操作规范及及注意事项一、操作规范范：１、清洗藻池池、洗气管（（气石、铅坠坠），具体方方法同上；２、配制消毒毒溶液，按技技术员要求对对藻池、气管管等设施进行行消毒，具体体方法同上。。３、进水，同同育苗池进水水方法；４、按技术员员要求对水体体进行消毒；；５、打开气阀阀、调气，气气量大小按技技术员要求；；６、按技术员员要求投放培培藻营养盐；；７、将二级藻藻种外包装冲冲洗干净；８、打开藻种种袋，将藻种种投放到培藻藻池中。二、注意事项项：１、操作人员员与藻池、用用具接触部分分如手、脚应应进行彻底消消毒。２、幼体过料料当天要备好好收集好的藻藻液；培藻前前，培藻操操作人员按育育苗技术员要要求，提前安安排培藻准备备工作，并至至少提前二天天通知二级育育藻，准备藻藻种。３、培藻过程程中视日照情情况决定是否否需要打开照照明灯。收藻的操作规规范及注意事事项一、操作规范范：1、准备收藻藻工具，如水水泵水管、收收藻袋、收藻藻架等；２、对收藻工工具进行清洗洗消毒；３、按程序安安装好收藻设设施；４、启动抽藻藻水泵，将刚刚开始抽起的的藻水从各个个排排水口排掉，，关闭水泵开开关；５、将收藻袋袋绑在收藻架架的各个出水水口上，启动动抽藻水泵泵，开始收藻藻；６、收集袋满满时，调节收收藻架上的主主开关，依次次收藻（关闭闭分开关－取取下藻袋－倒倒入收集盆中中－翻袋－用用藻水洗净－－翻回－绑回回架上－开启启分开关）；；７、用２０００目的捞网清清除藻盆中的的杂物；８、用瓢将收收集盆中的藻藻液按技术员员要求数量装装入袋中或桶桶中；二、注意事项项：１、收藻按不不同品种采用用不同的方法法收藻，如角角毛藻用水泵泵抽集到藻袋袋；２、收藻前检检查藻类是否否老化或坏死死，如有老化化或坏死的要要排掉；３、按育苗技技术员要求投投藻时间，提提前十分钟完完成收藻工作作。4、冲洗装藻藻袋外表，将将收藻袋中的的藻倒入桶中中；（收藻时时，如装在桶桶中，提入车车间时应对桶桶外进行冲清清）5、按育苗技技术员要求的的培藻天数、、数量连续培培藻。9、静夜夜四无无邻，，荒居居旧业业贫。。。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、雨中黄叶叶树，灯下下白头人。。。13:31:2913:31:2913:3112/29/20221:31:29PM11、以以我我独独沈沈久久，，愧愧君君相相见见频频。。。。12月月-2213:31:2913:31Dec-2229-Dec-2212、故人江江海别，，几度隔隔山川。。。13:31:2913:31:2913:31Thursday,December29,202213、乍见翻疑梦梦，相悲各问问年。。12月-2212月-2213:31:2913:31:29December29,202214、他乡生生白发，，旧国见见青山。。。29十十二月20221:31:29下午午13:31:3012月-2215、比不了得得就不比，，得不到的的就不要。。。。十二月221:31下下午12月-2213:31December29,202216、行动出成果果，工作出财财富。。2022/12/2913:31:3013:31:3029December202217、做前，能能够环视四四周；做时时，你只能能或者最好好沿着以脚脚为起点的的射线向前前。。1:31:30下下午1:31下下午13:31:3012月-229、没没有有失失败败，，只只有有暂暂时时停停止止成成功功！！。。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很多事情情努力了未未必有结果果，但是不不努力却什什么改变也也没有。。。13:31:3013:31:3013:3112/29/20221:31:30PM11、成功就就是日复复一日那那一点点点小小努努力的积积累。。。12月-2213:31:3013:31Dec-2229-Dec-2212、世世间间成成事事，，不不求求其其绝绝对对圆圆满满，，留留一一份份不不足足，，可可得得无无限限完完美美。。。。13:31:3013:31:3013:31Thursday,December29,202213、不不知知香香积积寺寺，，数数里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2213:31:3013:31:30December29,202214、意志坚强强的人能把把世界放在在手中像泥泥块一样任任意揉捏。。29十二二月20221:31:30下下午13:31:3012月-2215、楚塞塞三湘湘接，，荆门门九派派通。。。。十二月月221:31下下午午12月月-2213:31December29,202216、少少年年十十五五二二十十时时，，步步行行夺夺得得胡胡马马骑骑。。。。2022/12/2913:31:3013:31:3029December202217、空山新新雨后，