中药鸡血藤的镇痛实验研究

文档可自由编辑打印10/10文档可自由编辑打印文档可自由编辑打印中药鸡血藤的镇痛实验研究作者：许蓬娟，辛晓林，艾洪滨【摘要】采用小鼠热板法、小鼠醋酸扭体法和小鼠热水缩尾法观察25%、50%和100%三种浓度的鸡血藤水煎液的镇痛作用。结果发现三种浓度的鸡血藤水煎液均可使热板所致小鼠舔足的痛阈值明显提高（P＜0.05），痛阈提高率最高达112.17%；可使醋酸所致小鼠扭体潜伏期明显延长（P＜0.01），扭体次数明显减少（P＜0.01），抑制率最高达64.74%；可使热水所致小鼠缩尾潜伏期明显延长（P＜0.01），痛阈提高率最高达81.79%。从而证实鸡血藤水煎液具有镇痛作用。【关键词】鸡血藤；中药；水煎液；镇痛作用；小鼠Abstract：TheanalgesiceffectofwaterdecoctionofCaulisspatholobiwasobservedbymicewrithingtest,micetail-immersiontestandhot-platetest,withthreeconcentrations(25%,50%and100%).ItwasfoundthatgivenwaterdecoctionofCaulisspatholobi,mice′spainthresholdwasobviouslyenhanced(P＜0.05),themaximumofanalgesicratiowas112.17%;mice′swrithinglatencywasremarkablyprolonged(P＜0.01),writhingresponsesdecreasedmarkedly(P＜0.01),themaximumofinhibitoryratiowas67.74%;tail-curllatencyinmicetail-immersiontestwasobservablyprolonged(P＜0.01)andthemaximumofanalgesicratiowas81.79%.ItprovethatwaterdecoctionofCaulisspatholobihasanalgesiceffect.Keywords：Caulisspatholobi;Chinesetraditionalmedicine;Waterdecoction;Analgesiceffect;Mouse1引言鸡血藤(Caulisspatholobi)为豆科密花豆属植物密花豆的干燥藤茎，其性温，味苦、甘，具有补血、活血、通络之功效，用于治疗月经不调、血虚萎黄、舒筋活血、麻木瘫痪等症［1］。现代医学研究表明，鸡血藤具有消炎，优化血液系统［2-3］，提高免疫力［4］，降血压，抗心律失常［5］，抗病毒活性［6］等作用。但关于其镇痛作用的研究尚未见报道。本实验采用3种动物疼痛模型对鸡血藤水煎液的镇痛作用进行了初步研究，为其进一步开发和临床应用提供理论依据。2材料与方法2.1材料2.1.1鸡血藤水煎液的制备将9g鸡血藤用600ml蒸馏水浸泡12h，武火煮至沸腾，后用文火煮25min，倒出药液并过滤；向药渣中加200ml蒸馏水进行第二煎：武火煮至沸腾，后用文火煮25min，倒出药液并过滤；向第二煎的药渣中再加200ml蒸馏水进行第三煎：武火煮至沸腾，后用文火煮25min，将药液倒出并过滤；合并三次所得的滤液浓缩至9ml，设此时浓度为100%，实验时用生理盐水稀释。2.1.20.6%醋酸溶液由乙酸（冰醋酸）稀释而成。本实验所用试剂均为国产分析纯。2.1.3实验动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄兼用。2.1.4仪器电子天平；HS-4(B)型恒温浴槽；RB-200智能热板仪；君斯达运动秒表；KDM型调温电热套2.2实验方法2.2.1热板法疼痛模型的制备及给药方案［7-8］选用雌性小鼠，将小鼠放在50℃的热板上，测定每鼠的痛阈（即痛反应潜伏期，指小鼠从足接触热板到舔足所用时间）。选择痛反应潜伏期在5～30s的小鼠为合格鼠，剔除过敏（＜5s）或反应迟钝（＞30s）的个体。24h后进行实验，取合格小鼠32只，随机分为4组，即生理盐水组和3个浓度（25%、50%和100%）的给药组，每组8只小鼠。将小鼠置于50℃的热板上，首先测定4个实验组的基础痛阈，给药前测两次（间隔10min），取其平均值，然后给生理盐水组用0.2ml生理盐水灌胃，3组给药组分别用0.2ml的25%、50%和100%的鸡血藤水煎液灌胃，测定各组30min，60min，90min，120min痛阈的变化，超过60s无反应者，痛阈按60s计。实验数据用x±s表示，各浓度组与生理盐水组间的比较采用t检验，各浓度组间用SPSS13.0分析软件进行数据分析，痛阈提高的百分率=（给药后的痛阈-基础痛阈）/基础痛阈×100%。2.2.2醋酸扭体法疼痛模型的制备及给药方案［7,9］取32只小鼠，雌雄兼用，随机分为4组，即生理盐水组和3个浓度（25%、50%和100%）的给药组，每组8只小鼠。生理盐水组用0.2ml生理盐水灌胃，3组给药组分别用0.2ml的25%、50%和100%的鸡血藤水煎液灌胃，60min后进行实验，4组小鼠均腹腔注射0.6%的醋酸0.2ml，记录各组小鼠的扭体潜伏期（即从注射醋酸至扭体的时间）及在15min内扭体的次数，若15min内未扭体，潜伏期按15min记录。实验数据用x±s表示，各浓度组与生理盐水组之间的比较采用t检验，各浓度组间用SPSS13.0分析软件进行数据分析，抑制率=（生理盐水组扭体均数-给药组扭体均数）/生理盐水组扭体均数×100%。2.2.3热水缩尾法疼痛模型的制备及给药方案［7］取小鼠，雌雄兼用，将小鼠尾尖端3cm浸入48℃恒温水浴锅中，记录其缩尾的潜伏期为痛阈指标，测两次（间隔10min），求其平均值，取潜伏期是5～30s的为合格鼠，剔除过敏（＜5s）或反应迟钝（＞30s）的个体。24h后进行实验，取合格小鼠32只，随机分为4组，即生理盐水组和3个浓度（25%、50%和100%）的给药组，每组8只小鼠。将小鼠尾尖端3cm浸入48℃的恒温水浴锅中，首先测定4个实验组的基础痛阈，给药前测两次（间隔10min），取其平均值，然后给生理盐水组0.2ml的生理盐水灌胃，3组给药组分别用0.2ml的25%、50%和100%的鸡血藤水煎液灌胃，测定各组30min，60min，90min，120min小鼠的缩尾潜伏期的变化，超过60s无反应者，痛阈按60s计。数据用x±s表示，各浓度组与生理盐水组之间的比较用t检验，各浓度组间用SPSS13.0分析软件进行数据分析，痛阈提高率=（给药后痛阈-基础痛阈）/基础痛阈×100%3实验结果3.1对热板所致的小鼠舔足的镇痛作用由表1和表2可见，鸡血藤水煎液可提高热板实验中小鼠舔足的痛阈且存在一定的剂量效应（P＜0.05）。与生理盐水相比，三个浓度组给药后的痛阈明显增长（P＜0.05）；与给药前相比，各浓度组的痛阈提高率明显。表1鸡血藤水煎液在小鼠热板实验中的作用3.2对醋酸所致的小鼠扭体反应的镇痛作用由表3可见，鸡血藤水煎液可使醋酸所致小鼠扭体反应的潜伏期延长，15min内扭体次数减少。与生理盐水组相比，三浓度组的潜伏期显著增长，15min内扭体次数显著减少，且P＜0.01；同时三浓度组的抑制率明显。表3鸡血藤水煎液在小鼠扭体反应实验中的作用(n=8,x±s)Table3EffectsofCaulisspatholobionturningbodyinducedbyaceticacidinmice(n=8,x±s)实验组潜伏期/s扭体次数/15min抑制率（%）生理盐水组185.50±31.0843.25±1.5325%鸡血藤水煎液361.82±81.75*18.75±3.38**56.6550%鸡血藤水煎液347.14±41.31**19.62±4.60**54.64100%鸡血藤水煎液411.03±44.75**15.25±3.13**64.74*P＜0.05、**P＜0.01与生理盐水组相比3.3对热水所致的小鼠缩尾的镇痛作用由表4和表5可见，鸡血藤水煎液可提高热水缩尾实验中小鼠缩尾的痛阈，至120min痛阈提高率增加，即镇痛持续时间长。与生理盐水组相比，三浓度组给药后的痛阈明显延长（P＜0.05），其中，表4鸡血藤水煎液在小鼠热水缩尾实验中的作用表5鸡血藤水煎液在小鼠热水缩尾实验中的痛阈提高率25%和50%浓度组P＜0.01，即差异具有极显著性意义；与给药前相比，三浓度组的痛阈提高率明显。4讨论疼痛是由于痛觉感受器受到刺激而产生兴奋，冲动经传入神经纤维到达大脑某些神经细胞，或中枢通路的某一水平受损时所产生的一种不舒适的感觉［10］。在生活中疼痛常给患者带来生理和心理的折磨，它能改变人的精神-心理状态，使情绪极不稳定。同时会打乱机体内分泌系统、心血管系统和呼吸系统的正常运行，使胃肠功能紊乱，降低人们的生活质量［11］。因此缓解和减轻疼痛成为现代医学研究者广泛关注的问题。本研究采用了热板法，醋酸扭体法和热水缩尾法三种疼痛模型来研究鸡血藤的镇痛作用。鸡血藤化学成分复杂，现已确定含有芒柄花苷、樱黄素、儿茶素、胡萝卜苷等近20种成分［12］，大量实验证明鸡血藤能扩张血管、抗病毒活性、降血脂［13］，临床上用以治疗再生障碍性贫血［14］、风湿性关节炎［15］等，但在镇痛方面尚未见相关报道。本研究采用三种小鼠疼痛模型对鸡血藤镇痛作用进行初步研究，结果表明鸡血藤有很好的镇痛作用，且其发挥药效时间短，作用持续时间长，存在一定的剂量效应。药理学的有关研究发现，鸡血藤含有白芷内酯和某些黄酮类（具体含量未知），其中白芷内酯有中枢抑制、解痉作用及毒性［16］，黄酮类有镇痛作用，分析鸡血藤镇痛作用可能与此两种物质有关，作用位置可能在中枢，但不排除还有其它物质参与作用。本实验只对鸡血藤水煎液的镇痛作用进行了初步的研究，采用水煎液形式是由于水煎液成分与临床用药相似，但成分复杂，较难掌握剂量，在以后的工作中应对鸡血藤各化学成分进行进一步的鉴定、分离和纯化，确定鸡血藤镇痛的有效成分，进一步探讨其镇痛机制及其在体内的代谢规律，为鸡血藤的进一步开发和临床应用提供更多的理论依据。【参考文献】［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典一部［M］.北京:化学工业出版社,2000:151.［2］罗霞,陈冬辉,余梦瑶，等.鸡血藤煎剂对小鼠红细胞增殖的影响［J］.中国中药杂志,2005：30(6):477-479.［3］陈宜鸿,刘萍,张志萍，等.鸡血藤对小鼠粒单系红细胞的影响［J］.中国中药杂志,1999,34(5):305-307.［4］胡利平,樊良卿,杨锋，等.鸡血藤对小鼠LAK、NK细胞的影响［J］.浙江中医学院学报,1997,21(6):29-30.［5］江涛,唐春萍,李娟好，等.鸡血藤对大鼠主动脉环收缩反应的影响［J］.广东药学院学报,1996,12(1):33-35.［6］孟正木,小野克彦,中根英雄，等.八种中草药的抗病毒活性研究［J］.中国药科大学学报,1995,26(1):33-36.［7］徐叔云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学［M］.3版.北京:人民卫生出版社,2001：882-888.［8］陈奇主编.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社,1996：361.［9］陈超,郑卫红,熊素兵，等.细辛与Verapamil镇痛作用的实验研究［J］.中国药理学通报,2003,19(3):337-339.［10］姜亚芳,余丽君主编.病理生理学［M］.北京：中国协和医科大学出版社,2001：83.［11］周志刚,张斯.疼痛医学的新进展［J］.河南外科学杂志,2003，9(6):46-48.［12］崔艳君,刘屏,陈若芸.鸡血藤有效成分研究［J］.中国中药杂志,