实验七-石蜡切片法2课件

实验八石蜡切片法——染色、封藏实验八石蜡切片法——染色、封藏实验七--石蜡切片法2课件切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，然后使带水的载片经历脱水→透明等步骤最后用树胶封片。实验原理切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘染色原理－－物理作用渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合；吸收作用：又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后也呈红色，即使组织干燥后，其红颜色不变；吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不容易吸附。染色原理－－物理作用渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织染色原理－－化学作用化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲和力很大，易于着色。染色原理－－化学作用化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分常用染色剂分类按染料的化学性质可分为：碱性染料、酸性染料、直接染料、媒染染料、中性染料；根据染料的来源可分为：天然染料（此类染色剂是从动、植物体中提取的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝等）和合成染料（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。根据染料的用途可分为：细胞核染色剂（用于细胞核的染色剂有天然染色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、细胞质染色剂（用于细胞质的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G、酸性品红、苦味酸和水溶性苯胺蓝等）和脂质染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂中的苏丹III、苏丹Iv、硫酸尼罗蓝及油红等）。常用染色剂分类按染料的化学性质可分为：碱性染料、酸性染一、实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；学习和掌握番红-固绿及苏木精-伊红双重染色方法。一、实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；二、实验材料及用品实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝脏的切片实验用具：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。实验药品：梯度酒精、½二甲苯+½100%酒精、二甲苯、苏木精染色液、1%伊红水溶液、1%番红水溶液、1%固绿95%酒精溶液、加拿大树胶。二、实验材料及用品实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝三、实验步骤（1）番红-固绿二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+½100%酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水1%番红水溶液水洗50%80%70%95%1%固绿95%酒精溶液95%100%½二甲苯+½100%酒精二甲苯树胶封藏脱蜡复水染色脱水对染脱水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下5min5min5min1.5-2h三、实验步骤（1）番红-固绿二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+三、实验步骤（2）苏木精-伊红（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+½100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水苏木精染色液水洗氨水中“蓝化”1%伊红水溶液蒸馏水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL½二甲苯+½100%AL二甲苯树胶封藏脱蜡复水染色对染脱水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，换几次3min过一下5min5min5min5min5min20min5min，换几次三、实验步骤（2）苏木精-伊红（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ染色时注意的几个问题应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法；材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必须相同；作二重染色时，应先染碱性染料，后染酸性染料；染色宁可深一点，不要浅一点；作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净；制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。染色时注意的几个问题应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染封片注意事项切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干，则可再滴加少许二甲苯；封片时万一树胶量过少，可在盖玻片有空隙的地方，再滴注少量树胶使其慢慢布满盖玻片。封片注意事项切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干四、实验结果一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，颜色鲜艳且分明、封片时没有气泡、树胶不外溢、镜检时细胞结构清晰。苏木精-伊红（简称H·E）染色中：苏木精使细胞核显深紫色，伊红使细胞质显粉红色；番红-固绿染色中：番红可将木质化细胞壁红色，角质化细胞壁粉红色，栓化细胞壁黄褐色，染色体、核仁、中心体染红色；固绿将纤维素细胞壁染成绿色，细胞质染成淡绿色。四、实验结果一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，五、作业实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻片上写上材料名称及自己的姓名和日期；实验报告（姓名和日期）。五、作业实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻片上写上材料名实验八石蜡切片法——染色、封藏实验八石蜡切片法——染色、封藏实验七--石蜡切片法2课件切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，然后使带水的载片经历脱水→透明等步骤最后用树胶封片。实验原理切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘染色原理－－物理作用渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合；吸收作用：又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后也呈红色，即使组织干燥后，其红颜色不变；吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不容易吸附。染色原理－－物理作用渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织染色原理－－化学作用化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲和力很大，易于着色。染色原理－－化学作用化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分常用染色剂分类按染料的化学性质可分为：碱性染料、酸性染料、直接染料、媒染染料、中性染料；根据染料的来源可分为：天然染料（此类染色剂是从动、植物体中提取的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝等）和合成染料（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。根据染料的用途可分为：细胞核染色剂（用于细胞核的染色剂有天然染色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、细胞质染色剂（用于细胞质的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G、酸性品红、苦味酸和水溶性苯胺蓝等）和脂质染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂中的苏丹III、苏丹Iv、硫酸尼罗蓝及油红等）。常用染色剂分类按染料的化学性质可分为：碱性染料、酸性染一、实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；学习和掌握番红-固绿及苏木精-伊红双重染色方法。一、实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；二、实验材料及用品实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝脏的切片实验用具：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。实验药品：梯度酒精、½二甲苯+½100%酒精、二甲苯、苏木精染色液、1%伊红水溶液、1%番红水溶液、1%固绿95%酒精溶液、加拿大树胶。二、实验材料及用品实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝三、实验步骤（1）番红-固绿二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+½100%酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水1%番红水溶液水洗50%80%70%95%1%固绿95%酒精溶液95%100%½二甲苯+½100%酒精二甲苯树胶封藏脱蜡复水染色脱水对染脱水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下5min5min5min1.5-2h三、实验步骤（1）番红-固绿二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+三、实验步骤（2）苏木精-伊红（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ½二甲苯+½100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水苏木精染色液水洗氨水中“蓝化”1%伊红水溶液蒸馏水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL½二甲苯+½100%AL二甲苯树胶封藏脱蜡复水染色对染脱水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，换几次3min过一下5min5min5min5min5min20min5min，换几次三、实验步骤（2）苏木精-伊红（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ染色时注意的几个问题应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法；材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必须相同；作二重染色时，应先染碱性染料，后染酸性染料；染色宁可深一点，不要浅一点；作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净；制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。染色时注意的几个问题应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染封片注意事项切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干，则可再滴加少许二甲苯；封片时万一树胶量过少，可在盖玻片有空隙的地方，再滴注少量树胶使其慢慢布满盖玻片。封片注意事项切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干四、实验结果一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，颜