霍乱弧菌实验室检测课件整理

霍乱弧菌的实验室检测霍乱弧菌的实验室检测1目的:提高检出率减少漏检以及误判的发生手段检测人员是否有足够的责任心?检测试剂准备是否齐全且符合要求?是否严格按照检测流程进行操作?目的:提高检出率减少漏检以及误判的发2雪沉概述什么是霍乱?霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌(V.cho/erae)引起的急性肠道传染病,发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的甲类传染病。古典生物型01群稻叶型lna埃尔托生物型彦岛型Hkc霍乱弧菌框乱病原菌0139群(Benga非o1群Ao2o200群腹泻病原菌雪沉概述3病原体O1群,O139群霍乱弧菌发病特征:剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20-50%(重症病人达70100%)培养特性:营养要求不高,兼性厌氧,37℃生长,怕酸嗜碱,pH:7.4-9.6快速生检验依据:WS289-2019《霍乱诊断标准》霍乱防治手册(2019年第五版)病原体4乱的实验室验测一样品的采集和运输不同样品的病原分离流程及技术要点>粪便水体>水产品,食品等一平板分离及可疑菌落挑取一菌落鉴定常用快速检测方法胶体金检测条荧光PCR检测检测工作中应关注的事项乱的实验室验测5样品的采桌运物采集:病例:粪便、肛拭子、呕吐物未使用抗生素之前健康”人:粪便、肛拭子其他传播环节的标本:食物、水、环境类样品监测:水样,水产品等运输:般要求在3小时内室温(20-25℃)条件下送达实验室检测C-B运输培养基(pH8.4);(或文腊二氏保存液)碱性蛋白胨水(pH8.49.2):不是最佳的,尤其6小时内还不能进行培养时,尽量采用CB运输培养基。样品的采桌运物6分离流及技术要点粪便的采集与保存运送以采集病人自然排除的新鲜粪便为主,水样便采取1~3mL,成形便采取指甲大小的粪量,亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3~5cm处采取,采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水(PH8.6-9.2)同时划线分离选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板),如不能在6小时内送达实验室检测的样品,应插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基(或文腊二氏保存液)中送检。标本与保存液比例约为1:5分离培养要点(两管三板法):挑取粪便,直接接种于碱性蛋白胨水(第一管)中,同时划线分离选择性平板(庆大/四号/TCBS平板,第一板)。第一管碱性蛋白胨水在37℃增菌6-8小时,沾取菌膜下表层液体,划线分离选择性平板(庆大/四号/TCBS平板,第二板)0.1~0.2mi表层培养物,接种碱性蛋白陈水(第二管)。·同时吸取第二管碱性蛋白胨水增菌18小时后划线分离选择性平板(庆大/四号TCBS平板,第三板)分离流及技术要点7k水分流要点A水体的采集与保存运送水体的采集一般用无菌的500m水样瓶采集相对静止的表层水(深度为30cm以內)500ml,密封加盖后于室温(2025℃)3小时内送达实验室检测。·分离培养要点(十倍浓缩碱胨水增菌培养法):取450m水样,用1M氬氧化钠调整至pH8.49.2。然后加10倍浓缩碱性胨水50ml。再加入1%亚碲酸钾0.25~0.5m和1000单位/m青霉素lml37℃培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板)分离培养,同时吸0.1~0.2m表层培养物转种于碱性胨水管中作二次增菌,37℃培养6~&h再划线接种于选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板)。k水分流要点A8k水产品分流况要点口水产品的采集与保存运送通常选取活的或者新鲜的水生动物为采集对象,有时也应考虑冰冻的水生动物,有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处置涂抹采集:使用无菌棉签涂抹5只以上水水生动物表面、腮部及泄殖腔,直接接种到20ml碱性蛋白胨水作为增菌液处理。整体或局部采集在实验室应以无菌操作将其解剖,取鳃部和肠内容物25克剪碎后,置灭菌均质杯或均质袋中,加入225mL倍体积的碱性蛋白胨水增菌;但小贝壳类动物,则用锤子将外壳击碎,整体放入100m三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白陈水增菌;甲壳类动物除含肉质部分外,其余部分(包括鳃、肠、足、表层外壳等整体放入100ml三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白胨水增菌分离培养(两管两板法):接种后的碱性蛋白胨水37℃培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板).同时吸0.1~0.2m表层培养物转种于陈水管中作二次增菌,37℃培种于选择性培养k水产品分流况要点口9图9-71霍乱弧菌在碱性蛋白胨水培养基(pH2)中生长,液体呈均匀混浊,有菌膜(6~8h)左侧为阴性对照。图9-71霍乱弧菌在碱性蛋白胨水培养基10霍乱弧菌实验室检测课件整理11霍乱弧菌实验室检测课件整理12霍乱弧菌实验室检测课件整理13霍乱弧菌实验室检测课件整理14霍乱弧菌实验室检测课件整理15霍乱弧菌实验室检测课件整理16霍乱弧菌实验室检测课件整理17霍乱弧菌实验室检测课件整理18霍乱弧菌实验室检测课件整理19霍乱弧菌实验室检测课件整理20霍乱弧菌实验室检测课件整理21霍乱弧菌实验室检测课件整理22霍乱弧菌的实验室检测霍乱弧菌的实验室检测23目的:提高检出率减少漏检以及误判的发生手段检测人员是否有足够的责任心?检测试剂准备是否齐全且符合要求?是否严格按照检测流程进行操作?目的:提高检出率减少漏检以及误判的发24雪沉概述什么是霍乱?霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌(V.cho/erae)引起的急性肠道传染病,发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的甲类传染病。古典生物型01群稻叶型lna埃尔托生物型彦岛型Hkc霍乱弧菌框乱病原菌0139群(Benga非o1群Ao2o200群腹泻病原菌雪沉概述25病原体O1群,O139群霍乱弧菌发病特征:剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20-50%(重症病人达70100%)培养特性:营养要求不高,兼性厌氧,37℃生长,怕酸嗜碱,pH:7.4-9.6快速生检验依据:WS289-2019《霍乱诊断标准》霍乱防治手册(2019年第五版)病原体26乱的实验室验测一样品的采集和运输不同样品的病原分离流程及技术要点>粪便水体>水产品,食品等一平板分离及可疑菌落挑取一菌落鉴定常用快速检测方法胶体金检测条荧光PCR检测检测工作中应关注的事项乱的实验室验测27样品的采桌运物采集:病例:粪便、肛拭子、呕吐物未使用抗生素之前健康”人:粪便、肛拭子其他传播环节的标本:食物、水、环境类样品监测:水样,水产品等运输:般要求在3小时内室温(20-25℃)条件下送达实验室检测C-B运输培养基(pH8.4);(或文腊二氏保存液)碱性蛋白胨水(pH8.49.2):不是最佳的,尤其6小时内还不能进行培养时,尽量采用CB运输培养基。样品的采桌运物28分离流及技术要点粪便的采集与保存运送以采集病人自然排除的新鲜粪便为主,水样便采取1~3mL,成形便采取指甲大小的粪量,亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3~5cm处采取,采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水(PH8.6-9.2)同时划线分离选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板),如不能在6小时内送达实验室检测的样品,应插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基(或文腊二氏保存液)中送检。标本与保存液比例约为1:5分离培养要点(两管三板法):挑取粪便,直接接种于碱性蛋白胨水(第一管)中,同时划线分离选择性平板(庆大/四号/TCBS平板,第一板)。第一管碱性蛋白胨水在37℃增菌6-8小时,沾取菌膜下表层液体,划线分离选择性平板(庆大/四号/TCBS平板,第二板)0.1~0.2mi表层培养物,接种碱性蛋白陈水(第二管)。·同时吸取第二管碱性蛋白胨水增菌18小时后划线分离选择性平板(庆大/四号TCBS平板,第三板)分离流及技术要点29k水分流要点A水体的采集与保存运送水体的采集一般用无菌的500m水样瓶采集相对静止的表层水(深度为30cm以內)500ml,密封加盖后于室温(2025℃)3小时内送达实验室检测。·分离培养要点(十倍浓缩碱胨水增菌培养法):取450m水样,用1M氬氧化钠调整至pH8.49.2。然后加10倍浓缩碱性胨水50ml。再加入1%亚碲酸钾0.25~0.5m和1000单位/m青霉素lml37℃培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板)分离培养,同时吸0.1~0.2m表层培养物转种于碱性胨水管中作二次增菌,37℃培养6~&h再划线接种于选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板)。k水分流要点A30k水产品分流况要点口水产品的采集与保存运送通常选取活的或者新鲜的水生动物为采集对象,有时也应考虑冰冻的水生动物,有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处置涂抹采集:使用无菌棉签涂抹5只以上水水生动物表面、腮部及泄殖腔,直接接种到20ml碱性蛋白胨水作为增菌液处理。整体或局部采集在实验室应以无菌操作将其解剖,取鳃部和肠内容物25克剪碎后,置灭菌均质杯或均质袋中,加入225mL倍体积的碱性蛋白胨水增菌;但小贝壳类动物,则用锤子将外壳击碎,整体放入100m三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白陈水增菌;甲壳类动物除含肉质部分外,其余部分(包括鳃、肠、足、表层外壳等整体放入100ml三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白胨水增菌分离培养(两管两板法):接种后的碱性蛋白胨水37℃培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板).同时吸0.1~0.2m表层培养物转种于陈水管中作二次增菌,37℃培种于选择性培养k水产品分流况要点口31图9-71霍乱弧菌在碱性蛋白胨水培养基(pH2)中生长,液体呈均匀混浊,有菌膜(6~8h)左侧为阴性对照。