百合多糖提取及成分分析

百合多糖提取及成分分析作者：张国强，杨正平来源：《湖北农业科学》2012年第15期张国强，杨正平(安阳工学院生物与食品工程学院，河南安阳455000)摘要：采用水提醇沉法提取百合(Bulbuslilii)中的多糖成分，Sevage法除蛋白质，凝胶色谱法进行多糖纯化，制备3—甲基一1一苯基一2一毗唑啉酮(PMP)衍生物进行高效液相色谱分析。结果表明，百合多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、半乳糖5种单糖组成，其含量分别为4.82%、12.79%、47.02%、13.01%、22.36%。关键词：百合(Bulbuslilii)；多糖；提取；成分分析中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：0439—8114(2012)15—3298-02ExtractionandCompositionAnalysisofPolysaccharidesinBulbusliliiZHANGGuo—qiang，YANGZheng—ping(SchoolofBiotechnologyandFood，AnyangInstituteofTechnology，Anyang455000，Henan，China)Abstract：PolysaccharidewasextractedandisolatedfromBulbusliliibywaterextracting—alcoholprecipitatingmethodandpurifiedbySevagemethodandgelpermeationchromatography.ThecomponentsofthepolysaccharidewereidentifiedandquantifiedbyHPLCofthePMPderivatives.TheresultsshowedthatthemainmonosaccharidescontainedinB.liliipolysaccharidewererhamnose，arabinose，glucose，xyloseandgalactose，withcontentof4.82%，12.79%，47.02%，13.01%and22.36%，respectively.Keywords：Bulbuslilii；polysaccharide；extraction；componentanalysis百合(Bulbuslilii)是百合科百合属多年生草本球根植物［1］，其味甘、微苦，具有补益心肺、调理脾胃、清热止痰之功效，对体虚肺弱、慢性支气管炎、肺气肿、肺结核及神经衰弱、失眠、高血压、胃溃疡等有一定疗效［2］,是传统的药食同源植物。现代医学研究发现百合多糖具有较为广泛的药理作用，包括抗氧化、抗肿瘤、降血糖与免疫调节等［3—5］。本研究对百合多糖的提取工艺及主要成分进行初步分析，以期为百合的综合利用提供一定的理论参考。1材料与方法1.1材料与仪器百合购于河南省安阳市药材批发市场；乙醇、丙酮、三氟乙酸、3一甲基一1一苯基一2一毗唑啉酮（PMP）、氢氧化钠、无水醋酸酐、氯仿等试剂为分析纯；标准单糖鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖为色谱纯。仪器包括安捷伦1260高效液相色谱仪（配有紫外及蒸发光检测器，C18柱）、电子分析天平、ALPHAL—2真空冷冻干燥机、真空干燥箱、RE52—3旋转蒸发器、TDZ5—WS低速离心机、电子恒温水浴锅、CS101—IC型干燥箱、BAZ—100自动分步收集器、DHL—A电脑恒流泵等。1.2试验方法1.2.1百合多糖的提取①百合多糖粗品的制备。称百合样品5.000g,粉碎后加入10倍体积的蒸馏水，调节溶液pH至11,沸水浴提取2h,重复4次，过滤合并滤液，于60°C真空浓缩至约50mL，以体积分数95%的乙醇溶液沉淀，过滤，滤渣加5倍体积的丙酮一石油醚混合液（体积比1：1），于60C水浴浸提1h，过滤，得沉淀，60C真空干燥1h，再于105C干燥箱中烘干，即得灰白色的百合多糖粗品。②脱蛋白多糖的制备。取多糖粗品，加蒸馏水充分溶解，用Sevage法脱蛋白，离心，取上清液对流水透析48h，再对蒸馏水透析24h，无水乙醇沉淀，抽滤得沉淀，真空冷冻干燥，即得脱蛋白多糖。③多糖精品的制备。取适量脱蛋白的多糖，加蒸馏水充分溶解，上SephadexG—75凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，4.5mL/管自动分步收集，苯酚一硫酸法检测，合并主峰收集管液，60C真空浓缩，冷冻干燥得精制的百合多糖。1.2.2多糖成分的分析①多糖水解。称取10mg精制的百合多糖样品于安瓿瓶中，加入2mL2mol/L的三氟乙酸［6］，封管后置于120C干燥箱中水解，2h后取出冷却，离心后取上清液，真空浓缩至干，得单糖样品置于干燥箱中备用。②单糖的衍生化。称取鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖标准品各10mg，分别加入单糖2倍物质的量的PMP，调pH至11，充分振荡溶解，于60C水浴反应30min，取出冷却到室温，真空浓缩蒸干，用于液相色谱分析。多糖水解后所得单糖样品的衍生化操作方法相同。③液相色谱分析条件°C18色谱柱，紫外检测器，检测波长250nm，柱温为室温，进样量20PL，流动相溶剂A：15%乙腈+20mol/L乙酸铵水溶液，溶剂B：40%乙腈+20mol/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序为在0—115min内溶剂B的体积分数从0线性增加到100%，流速1.2mL/min。2结果与分析将提取所得的百合多糖进样记录色谱图，参照单糖标准品的色谱图确定主要的指纹峰；采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件（2004A），将全谱导入后，经谱图处理，以软件自动生成的对照图谱为参照图谱，多点校正将谱峰进行比较，得到相似度结果，查看样品的相关性。根据各色谱峰与标准单糖的保留时间对照，可知百合多糖水解物液相色谱图中各峰代表的单糖分别为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖(图1),采用面积归一化方法计算单糖的含量，结果见表1。圄i百合华航水忡产■林i的做+AFiWfFI*I百台M岫需单械视对的由*时词&含HX1心nuii■±.?v47D2一*U3讨论PMP与糖类物质衍生时反应条件温和，产物无立体异构。2分子PMP与1分子单糖缩合生成的衍生物与各单糖的定量关系明确，线性关系良好。检测灵敏度较高，可同时检测醛糖、酮糖及糖醛酸；PMP衍生物在254nm处有强烈的紫外吸收，克服了单糖本身没有紫外吸收峰的缺点，同时使用紫外检测器克服了示差检测器灵敏度低、不适用于梯度洗脱的缺点。本试验中采用PMP衍生物液相色谱法进行百合多糖组成分析，其衍生物制备简便、试剂易得，且每种单糖均可得到单一色谱峰。分析结果表明百合多糖主要由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、半乳糖5种单糖组成，其含量分别为4.82%、12.79%、47.02%、13.01%、22.36%。参考文献：田爱梅，郑日如，王国强，等.中国野生百合种质资源的研究、保护与利用[J].安徽农业科学，2007，35(31)：9987—9990.王燕.我国百合产业现状及其发展对策[J].湖南农业科学，2007(5)：150—152，156.赵国华，李志孝，陈宗道.百合多糖的化学结构及抗肿瘤活性】J].食品与生物技术，2002，2