《生物化学检验技术》教案

教材匕主物化学检验早下第十五章 心脏标志物检验学时2教学要教字目的和要求1、掌握AMI的诊断标准；心脏标志物的测定及方法学评价。2、熟悉心脏标志物的选择原则和评价。3、了解心脏的结构和功能。教学内容1、心脏标志物的测定及方法学评价。2、心脏标志物的选择原则。求教重难学点点重点：心脏标志物的测定及方法学评价。难点：心脏标志物的选择原则。教学媒体课堂讲授为主,多媒体教学为辅复习旧课分析化学、生物化学等概念及其主要内容上次课选择题答案为C教学过程11井授而果一、概述（一）心脏的结构和功能（二）心脏疾病的诊断AMI的诊断标准（2000年修改版）：①②③④二、心脏标志物的测定（一）酶类标志物1、AMI血清中酶活性改变的机制2、AMI的酶类标志物（1）肌酸激酶；（2）乳酸脱氢酶；（3）AST;（4）AST、LDH、CK的特异性比较3、AMI后心肌酶的时相变化4、心肌酶的生理变异5、心肌酶的测定：AST、LDH、CK的测定原理（二）蛋白类标志物1、肌红蛋白：主要采用免疫化学法。2、心肌肌钙蛋白（cTn）：cTn的测定主要采用双抗体（捕获抗体、标记抗体）夹心的免疫学方法，如ELISA分析法、化学发光法等。三、心脏标志物的选择原则堂问课提急性心肌梗死（AMI）的诊断标准是什么？课堂小节心脏标志物的测定及方法学评价；心脏标志物的选择原则。作业用于AMI早期诊断的确证标志物是（ ）A.CK B.LDH C.CK—MB D.cTn经々书目宋国杰.分子心脏病学.天津：天津科学技术出版社， 2001高东开，董殿阶.临床心血管疾病. 山东：山东科学技术出版社，2000教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验早下实验一分光光度计性能检测学时3教学要求学的要教目和求1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。2、掌握分光光度计的使用方法。教学内容分光光度计性能检测学点点底难重点：比色皿配对与分光光度计的使用方法。难点：分光光度计波长的粗测、细测，杂光的检测。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课理论课第五章内容讲授新课一、原理1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵错钛滤光片在529nm11〜2nm处有较好的吸收峰，适用于光度计波长的细测。2、杂光检测：错铉滤光片在585nm处吸光度A最大，透光率T最小，所产生的透光与杂光成正比，因此可用其透光率表示杂光的大小。3、比色皿配对：一套比色皿之间的材质、厚薄、色泽、空白吸收等应该一致，误差小于0.5%才能配套使用。二、操作1、波长检测(1)粗测：调仪器波长旋纽至580nm处，打开遮光板，在比色槽中光路经过处放一白纸条，观察是否有均匀的黄光。(2)细测：调波长至529nm处，打开遮光板，调0%T,盖上遮光板以空气调100%T,将错铉滤光片插入光路，测出A值。再在529nm附近每隔1〜2nm,各测其A值。2、杂光检测(1)调波长为585nm,盖上遮光板，用黑纸挡住比色皿光路，调 0%T。(2)盖上遮光板，用空气作空白调 100%T。(3)插入错铉滤光片，盖上遮光板，测出585nm时的T%,即为杂光水平。3、比色皿配套(1)选取几支大小、材质、色泽相同的比色皿，洗净，装入占比色皿体积2/3的蒸储水(D.W.),擦干，放入比色槽。(2)在585nm处，调第1支比色皿透光度为100%T,依次测出其他几支比色皿的 T%。不合格的需反复剔除极端值，或重新配对，直至有 2个以上的比色皿合格。三、结果及其讨论课堂提问何谓杂光？何谓最大吸收峰？分光光度计如何得到单色光？课堂小节分光光度计的性能检测。分光光度计的使用方法。作业简述722型分光光度计的使用时的注意事项。简述杂光检测与比色皿配套的注意事项。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业(层次)医学检验(中专)

教学目的和要1、掌握线性范围试验的原理及方法。2、掌握葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法测定葡萄糖（Glu）。教求3、熟悉分光光度计的使用。学要求教学内容方法学评价试验（1）——线性范围试验字占~教童重点：GOD-POD法测Glu,线性范围试验的原理及方法难点难点：A-C曲线的绘制教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅复习旧课分光光度计性能检测一、原理使用不同浓度的葡萄糖标准溶液， 用GOD-POD法试剂测定各目的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反应曲线。一般测定方法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。二、操作（一）样品的处理与测定1、原始的葡萄糖标准溶液浓度为 110mmol/L,设为第1号管，将其稀释后得到教讲2种高浓度的匍匐糖标准溶液管：第 2、3号管，浓度分别为73.335mmol/L、授55mmol/L。注意稀释后要混匀。学新2、再将第2、3号管分别取50闻加D.W.50n依次作等倍稀释（各4管），课得到8种较低浓度的葡萄糖标准溶液。过3、取12支试管，其中1号为空白管，按加样：试剂比=10口11.5ml,37c水浴15min,505nm,测定出TP标准液的吸光度As和样本的吸光度Ai。对应的标准程浓度分别为0mmol/L、110mmol/L、73.33mmol/L、55mmol/L、36.67mmol/L、27.5mmol/L、18.33mmol/L、13.75mmol/L、9.17mmol/L、6.88mmol/L、4.58mmol/L、3.44mmol/L（二）绘制A-C曲线在坐标纸上，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标绘制A-C曲线。三、结果及讨论课堂提问何谓线性范围？如何进行倍比稀释？课堂小节线性范围试验的原理及方法； GOD-POD法测葡萄糖。r线性范围测定的注意事项。作业GOD-POD法测匍匐糖的注意事项。章节实验线性范围试验学时3教材生物化学检验方法学评价试验（1）参考书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验章节实验三方法学评价试验（2）——重复性试验 学时3教学要求学的要教目和求1、掌握批内重复性试验的原理及操作方法。2、了解双缩月尿法测定总蛋白TP的操作方法。教学内容方法学评价试验（2）——重复性试验引点点重点：双缩月尿法测TP,重复性试验的原理与操作；难点：重复性试验中的计算。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课线性范围试验讲授新课一、原理五同一短”：同一方法、同一人、同一器材、同一实验室、同一测定条件（标本、标准品和试剂相同，温度、湿度、 pH等相同）下，短期内重复测定。指标用批内CV来评价。二、操作：采用双缩月尿法，设置标准和空白，同一标本用对比法测定 10份（n=10）。按加样：试剂比二5052.5ml,37c水浴10min,540nm,测定出TP标准液的吸光度As和样本的吸光度Ai。三、计算：「 A 据Xi，Xs计算出样本中TP浓度Xi。Asn（Xi）2n ' i/i1JXi 1n ss=[j_j n_,X-Xi，CV=-100%1 n1 ni1 X四、结果及其讨论：课堂提问双缩月尿方法名称的由来？重复性试验的意义是什么？课堂小节重复性试验的原理；双缩月尿法测TP。作业双缩月尿测总蛋白的原理及方法评价；重复性实验的注意事项。参考书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版，北京：人民卫生出目版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教口生物化学检验章节 实验四、方法学评价试验（3）——回收试验 学时3材教学要求教学目的和要求1、掌握回收试验的原理及操作方法。2、掌握GOD-POD法测Glu的原理。教学内容方法学评价试验（3）——回收试验学点点教书难重点：掌握GOD-POD法测Glu,难点：回收试验的原理与操作；教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课重复性试验讲授新课一、原理回收是指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析物的能力，用回收率表示。将被测物标准液加入病人标本中，成为分析标本；原病人标本中加入等量的无被测物的溶剂作基础标本；然后用候选方法测定并得到各自浓度。回收浓度=分析标本测得浓度-基础标本测得浓度。加入浓度= 呼曲^量标准液浓度 回收率（％）=回收浓度 100病人样拍量ml标准?R量ml 加入浓度二、操作（一）样品的处理（已制备）1、基础血清管=原血清0.9ml+蒸储水0.1ml2、回收管=原血清0.9ml+相应的Glu标准液回1=原血清0.9ml+11.1mmol/L的Glu标准液0.1ml回2=原血清0.9ml+33.3mmol/L的Glu标准液0.1ml回3=原血清0.9ml+111mmol/L的Glu标准液0.1ml（二）操作与计算营W1季d兰T=事电之三工-=X 工工工S3F家工三AiA®4A±AaJ-K-E.LLTaT>31UN二一二二.二匚一壬G口Csi.*iaM.凡■匚口 4--- 3工-FEW" =・：=丁".育Us三、结果及其讨论课堂提问何谓回收试验？其目的是什么？课堂小节回收试验的原理；GOD-POD法测Glu二里JJ^LE业简述回收试验的原理及注意事项。经支书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教口生物化学检验章节实验五方法学评价试验（4）——干扰试验 学时3材教口生物化学检验章节实验五方法学评价试验（4）——干扰试验 学时3材学的要教目和求教掌握干扰试验的原理及操作方法。掌握GOD-POD法测Glu的原理。学要求学容学点点

教内教重难方法学评价试验（4）——干扰试验重点：掌握GOD-POD法测Glu;难点：干扰试验的原理与操作。教学

媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅复习回收试验旧课一、原理干扰试验是测定特异性和干扰二者引起的误差。在具体方法学评价实验中，首先要确定被试可疑物质是否引起误差；若能引起误差，再进一步探讨其误差的来源是因为方法特性差还是干扰。若加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，这是特异性差；若加入的物质并不与分析试剂反应，但它改变了分析物和分析试剂间的反应，这是干扰。本实验选用尿酸做GOD-POD法测血糖的干扰试验，尿酸可以和 GOD反应生成的H2O2反应，使部分H2O2不能参与第二步POD的偶联反应，从而降低显色强度，产生负的测定误差。因此，尿酸对该反应有干扰，但不是尿酸被测定。二、操作（一）样品的处理（已制备）讲

授

新

课1、基础血清管=原血清0.9ml+蒸储水（D.W.）O.lml讲

授

新

课2、干扰管=原血清0.9ml+相应的维生素C干扰液0.1ml干1=原血清0.9ml+10mmol/LVc干扰液0.1ml干2=原血清0.9ml+20mmol/LVc干扰液0.1ml（二）操作与计算* 七户Te” 百把头尿血1油:挂础血iWT*干卜Tr 干nTzr取4，&10MML・5mli-底七.三了七：代带1口电牛口.用口一丁心■的Et：色工IL,3aBniTi.B管（花■虹口.W./等，曲总混想比ar吸光度・一—A.-22A,■Ai/•1」1匚•S七3Q4JAddu=l.AdrL=2.«变再山农度C=CA7AljKG卡dfJeB-C”LuiKlo1ZLV©的干械UHe-2--Ej1k.d 吗=0工..1mn01/UVc的不知中忧atee］气.wHp的由去，及—用岫*主化,三、结果及其讨论课堂

提问何谓干扰试验？其目的是什么?课堂

小节干扰试验的原理及操作方法,GOD-POD法测Glu课堂

提问何谓干扰试验？其目的是什么?课堂

小节干扰试验的原理及操作方法,GOD-POD法测Glu布置

作业简述干扰试验的原理及注意事项。22版，北京：人民卫生出参考书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验早下实验六 方法学评价试验（4）——对比试验学时3学的要教目和求. 11_t.、.、,r_f教1、巾！刀法刈叱反施烟原埋及瞟作步赛；2、掌握用双缩月尿法及折射率法测定血清 TP。学TFFF教学内容方法学评价试验（4）——对比试验要求■点点教E难重点：掌握双缩月尿法及折射率法测定血清 TP;难点：对比试验的原理与操作。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅复习旧课干扰试验教学讲授新课一、原理方法对比试验是将候选方法与准确度已知的方法（如参比方法）作对比分析，以评价候选方法的准确度，是考核候选方法是否可被采用的重要试验。方法对比试验是用于检测候选方法系统误差的大小包括恒定误差和比例误差，如对适当的数据进行分析，也可以提供误差的性质。二、操作（一）样品处理1〜10号样本:质控血清+不同体积的蒸储水（4.5ml、4.0ml、3.7ml、3.5ml、3.2ml、3.0ml、2.7ml、2.5ml、2.2ml、2.0ml）,混匀。（二）样品测定1、双缩月尿法：设置标准和空白，用对比法测定。按加样：试剂比 =50 2.5ml,37c水浴10min,540nm,测定出TP标准液的吸光度As和样本的吸光度Ai,并据Xi=Ai/AsxCs计算出样本中TP浓度Xi。2、折射率法：先调标，再测样本中 TP浓度YiuB S T七 九 Tw过程吸光度 & Ax % ……儿口，双维嬲法浓度X. XS=5<l£/LMt 二 乂廿折射赤法浓度0 ¥^&0e/LV. 匕液度工后=Y「XJ … d 出 ”相关利回归 y-Sr+bs*三、统计学检验1、相关与回归：计算出a、b、r及t值，进行r的t检验；2、配对t检验四、结果及其讨论比较双缩月尿法与折射率法测TP的相互关系；注意相关与配对的区别、r的t检验与配对t检验的区别。课堂提问何谓对比试验？其目的是什么？课堂小节方法对比试验的原理及操作步骤；用双缩月尿法及折射率法测定血清 TP。作业简述对比试验的原理及注意事项。参考书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版，北京：人民卫生出目版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验早下实验七双缩月尿试剂的制备与鉴定（1）学时3教学要求学的要教目和求1、掌握双缩月尿试剂的制备原理。2、熟悉重量分析与容量分析的基本操作。教学内容双缩月尿试剂的制备学点点点难重点：双缩月尿试剂的制备方法；难点：重量分析与容量分析的基本操作。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课对比试验讲授新课一、原理：准确称取一定量的物质，溶解后，定量转移到容量瓶中，稀释至一定体积，根据称取物质的质量和容量瓶的体积，即可算出溶液中该物质的准确浓度。二、操作双缩月尿试剂的制备1、NaOH溶液的制备用两支干净的塑料试管配平天平后，称取 2.4gNaOH于试管中用少许D.W.溶解。2、双缩月尿试剂的制备称取硫酸铜结晶（CuSO4?5H2。）0.3g于烧杯中用D.W.溶解后，加入酒石酸钾钠（NaKC4H4。6?4H2。）0.9g,用D.W,溶解后，再加入碘化钾（KI）0.5g,力口D.W.溶解，再辿搅拌边加入已配好的 NaOH溶液，用D.W.定容至100ml容量瓶中。三、结果及其讨论：课堂提问双缩月尿反应的原理，天平称量时的注意事项课堂小节双缩月尿试剂的制备方法作业简述重量分析与容量分析时的注意事项、操作经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验早下实验八双缩月尿试剂的制备与鉴定（2）学时3教学要求学的要教目和求1、掌握双缩月尿试剂的鉴定方法；2、熟悉双缩月尿试剂测定总蛋白的原理及操作。教学内容双缩月尿试剂的鉴定学点点底难重点：双缩胭试剂的鉴定方法；难点：双缩月尿试剂空白吸光度及定值血清的测定。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课双缩月尿试剂的制备讲授新课一、原理：1、蛋白质中的肽键（一CONHF）在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩月尿 （H2N—CO-NHHCO-NH2）与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似，故称为双缩月尿反应。2、合格的双缩月尿试剂应为均一的大蓝色溶液，不呈胶体状、无沉淀。试剂空白吸光度约在0.070,对定值血清的测定值应在许可范围内。二、操作双缩月尿试剂的鉴定1、理学检查：均一的大蓝色溶液，不呈胶体状、无沉淀。2、试剂空白吸光度及定值血清的测定 （校准液浓度：50g/L） 空白（B） 校准（C） 测定（U）样品（rL） -- -- 50校准液（vI） -- 50 -D.W.（gl） 50 -- --试剂Ri（vD 2500 2500 2500混匀，37c水浴10min,540nm,0.5cm的比色皿，D.W.调0,测定3管的吸光度三、结果及其讨论：试剂空白吸光度约在0.070,定值血清的测定值应在许可范围内。课堂提问双缩月尿反应的原理，酒后酸钾钠在试剂中起着什么作用？课堂小节双缩月尿试剂的鉴定方法；双缩月尿试剂测定总蛋白的原理及操作。作业简述双缩胭试剂鉴定的注意事项。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材生物化学检验早下实验九 澳甲酚绿法测定白蛋白学时3教学要求学的要教目和求1、掌握澳甲酚绿法测定白蛋白的原理及操作；2、了解测定白蛋白的临床意义教学内容澳甲酚绿法测定白蛋白引点点重点：掌握澳甲酚绿法测定白蛋白的原理难点：测定白蛋白的临床意义教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课双缩月尿试剂的制备与鉴定讲授新课一、原理血清白蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表向活性剂存在时，可与带负电的染料澳甲酚绿 （BCG）结合形成蓝绿色复合物， 在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度呈正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可得到血清中白蛋白含量。二、操作（一）样品处理取洁净试管3支，按卜表操作 加入物（ml） 空白管标准管 测定管 （B） （S） （T） 血清 -- -- 0.02Alb标准液 -- 0.02 -D.W. 0.02 -- -BCG试剂 4.0 4.0 4.0（二）样品测定在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器加BCG试剂；混匀，立即在30s耳s内测定吸光度。三、计算血清白蛋白（g/L）=（测定管吸光度/标准管吸光度）X白蛋白标准液浓度四、结果及其讨论课堂提问白蛋白的性质及理化特点； BCP与BCG在测定白蛋白时有何区别？课堂小节澳甲酚绿法测定白蛋白的原理；测定白蛋白的临床意义作业简述测定白蛋白的注意事项；测定白蛋白的临床意义。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材J主物化学检验早下实验十血浆脂类测定（1）——gpo-pap法测定白油三酯学时3教学要求学的要教目和求1、掌握GOD-PAP法的检测原理。2、掌握用GOD-PAP法检测甘油三酯的操作步骤。教学内容GPO-PAP法测定白油三酯教重难学占八占八重点：掌握GPO-PAP法测定甘油三酯的原理和操作方法。难点：测定原理。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课甘油三脂测定方法讲授新课一、原理 脂蛋白脂肪酶甘油三酯+H2O +甘油+脂肪酸甘油激酶甘油+ATP +3-磷酸甘油+ADP甘油磷酸氧化酶3-磷酸甘油+O2 +磷酸二羟内酮+H2O2过氧化物酶H2O2+4AAP+phenol 竽醍亚胺+H2O（红色，500nm）二、操作空白（B） 校准（C） 测定（UJ）样品（L） -- -- 10校准液（科L） -- 10 --D.W.（…） 10 -- --工作液（WL） 1000 1000 1000混匀，37c水浴10min,505nm波长，以空白管调0,测定各管吸光度。三、计算：Ct今-Cs,其中CS=2.26mmol/LAs四、结果及讨论课堂提问本法容易受到哪些物质的干扰？如何消除游离甘油的干扰？课堂小节GPO-PAP法测定甘油三酯的原理和操作方法。作业简述gpo-pap法测定甘油三酯的注意事项。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材J八皿认” 上. 实验尸血浆脂类测定（2）主物化学检验 章节 学时3——免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1教学要求学的要教目和求掌握免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1的原理及操作方法。教学内容免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1教重难学占八占八重点：掌握免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1的原理和操作方法。难点：数据处理方式。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课载脂蛋白A1测定方法讲授新课一、样品处理将4瓶含ApoA1的混合校准血清冻干粉分别用 0.5mlD.W.或人离子水复溶，再将其中的最高浓度管作对倍稀释，共形成 5种浓度梯度，见卜表：编号 12345ApoA1（g/L）0.420.781.051.332.10对ApoA1按卜表操作： 空白（B） 校准（S） 测定（T）样品（D -- -- 20校准液（WD -- 20 -D.W.（wD 20 -- --试剂R（吐D 2000 2000 2000二、样品测定混匀，37c水浴10分钟，主波长340nm,副波长700nm,空白管调0,测定各管吸光度。三、数据处理⑴校准曲线法⑵三次方程法⑶Log-Logit4P法四、结果及讨论课堂提问本法为何不直接米用单点定标的方法们要米用标准曲线法？课堂小节免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1的原理和操作方法。作业简述免疫透射比浊法测定载脂蛋白 A1的原理。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材匕主物化学检验早下实验十二含氮化合物测定（1）——两点法测定肌酎学时3教学要求学的要教目和求掌握两点法测定肌酎的原理及操作方法。教学内容两点法测定肌酎教重难学点点重点：掌握两点法测定肌酎的原理及操作方法。难点：把握反应时间。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课肌酎测定方法讲授新课一、原理肌酎与碱性苦味酸试剂反应生成黄红色络合物，在 500nm处选择线性较好的两个吸光度值，与通过同样处理的标准液比较，即可计算出血中肌酎含量。二、标准液吸光度变化值的测定：按加样：试剂 =0.20ml:2.00ml,混合均匀，倒入干净比色皿中，立刻记时，在 20秒钟时，510nm处读取吸光度值Asi,在第60秒时，再读取吸光度值As2。得到^As=As2—Asi。三、样品吸光度变化值的测定：同上，得到 ^At=AT2—Ati四、计算At肌酎浓度Ct= XCs（133pmol/LAs五、结果及讨论课堂提问两点法测定肌酎为什么要严格把握反应时间？课堂小节两点法测定肌酎的原理及操作方法。作业简述两点法测定肌酎的注意事项。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）

教材匕主物化学检验早下实验十三含氮化合物测定（2）——尿酸酶-过氧化物酶法测定尿酸学时3教学要求学的要教目和求掌握尿酸酶-过氧化物酶法测定尿酸的原理及操作方法。教学内容尿酸酶-过氧化物酶法测定尿酸教重难学点点重点：尿酸酶-过氧化物酶法测定尿酸的原理及操作方法。难点：尿酸测定的影响因素。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课尿酸测定方法讲授新课一、原理尿酸在尿酸酶的催化下， 氧化生成尿囊素和H2O2,H2Q通过Trinder反应，生成的醍亚胺在520nm处有最大吸收，其程度与血清中尿酸含量成正比，与同样处理的尿酸标准液比较，可求出血清中尿酸的含量。反应式如下：尿酸+O2+2H2O尿酸酶 尿囊素+CO2+2H202H2Q+4-氨基安替比林+3,5-二氯-2-羟基苯磺酸 过氧化物酶 醍亚胺+2H2O二、操作按卜表操作：加入物 空白管（B） 标准管（S） 测定管（T） 样本pl — — 25标准?仅（il — 25 —试剂ml1.0 1.0 1.0混匀，37c水浴10分钟，取出冷却至室温，垫好比色皿， 520nm处空白管调零，测定吸光度As、At。三、计算一 At一 …，Ct Cs,其中Cs=297^mol/LAs四、结果及讨论课堂提问体内尿酸是哪种物质的最终代谢产物？过高会导致哪种疾病？课堂小节尿酸酶-过氧化物酶法测定尿酸的原理及操作方法。作业简述尿酸的测定方法可分为哪几种？经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）教材生物化学检验早下实验十四无机离子测定（1）——火焰光度法测定钾、钠学时3

教字目的1、掌握火焰光度法测K+、Na+的原理及操作方法。教要和求2、了解测定K+、Na+的临床意义。学要求教学内容火焰光度法测定钾、钠教学重点难点重点：掌握火焰光度法测K+、Na+的原理及方法。难点：调节火焰与冲洗管道。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅复习旧课K、Na测定方法一、原理火焰发射光谱法(FE9是一种原子发射光谱分析技术，利用火焰的热能使原子被激发而发射出特异的光谱进行分析。 钠的特征谱线为589nm(黄色)；钾的特征谱线为767nm(深红色)；样品溶液中钠、钾浓度与发射光谱强度成正比。用已知含量的标准溶液与待测标本相比，即可计算出血清、尿液中的钠钾浓度。二、预处理样品与标准均做1:100的稀释(已制备)三、含量测定讲1、打开空气泵，调空气压为0.4kg/cm2(0.04Mpa)教授2、打开测定开关及燃气压开关，适当调大煤气量新3、点火，调节火焰呈淡蓝色学课4、测K+：(1)打开测K+开关过(2)用去黄十水调零(3)用k+标准?仅(4mmol/L)调标至检流计刻度为40,即k+的标准读数程(4)测样品，读刻度(5)计算：血清K浓度叱1/4mmol/L标准读数5、测Na+：测Na+标准?取(140mmol/L)同上，调刻度为70。、测定读数血清Na浓度岩窑2140mmol/L标准读数四、结果及结果分析课堂提问本法测定K+Na+的优缺点有哪些？？课堂小节火焰光度法测欧Na+的原理及操作方法。作业简述火焰光度法测定钾、钠的原理。经々书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版，北京：人民卫生出目版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业(层次)医学检验(中专)教材生物化学检验早下实验十五无机离子测定(2)——硫氟酸铁比色法测定氯学时3

教学要求学的要教目和求掌握硫氟酸汞比色法测定氯的原理及操作方法。教学内容硫氟酸汞比色法测定氯教学重点难点重点：掌握硫氧酸汞比色法测定氯的原理及操作方法。难点：硫鼠酸汞比色法影响因素的排除。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课血清氯测定方法讲授新课一、原理血清中的氯离子与试剂中的硫氟酸汞反应，生成 SCNT及溶解又不解离的HgCESCNI与试剂中的Fe3+形成红褐色的Fe(SCN)3,其颜色深浅与CI一浓度成正比，在波长480nm处测定吸光度，与通过同样处理的标准液比较，从而可求出血清氯的含量。2CI +Hg(SCN2-HgCb+2SCN3SCN +Fe3+fFe(SCN)3二、操作加入物(ml) 空白管 标准管 样品管 (B) (C) (U)样品 -- -- 0.01标准液 -- 0.01 --工作液 2.0 2.0 2.0混合均匀，室温反应5min,在波长480nm处，空白管调0,测定各管吸光度。三、计算血清氯含重(mmol/L)= X100Ac四、结果及讨论课堂提问血清氯测定的临床意义是什么？课堂小节硫氟酸汞比色法测定氯的原理及操作方法。作业简述硫鼠酸汞比色法测定氯的原理。经々书目钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第 2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业(层次)医学检验(中专)教材生物化学检验草节实验十六底物对酶促反应速度的影响学时3

教学要求学的要教目和求1、掌握酶促反应速度随底物浓度变化的原因。2、掌握底物对酶促反应速度影响的测定方法。教学内容底物对酶促反应速度的影响教学重点难点重点：掌握酶促反应速度随底物浓度的变化关系。难点：把握水浴时间，准确加样。教学媒体学生动手操作为主，课堂演示为辅教学过程复习旧课GOD-POD法测Glu的原理。讲授新课一、原理不同浓度的底物占据的活性中心的程度不同， 影响的促反应的速度就不同。根据中间产物学说，在酶的活性中心被完全饱和以前，底物浓度越大，酶和底物生成的中间产物就越多，酶促反应速度就越大。但当酶的活性中心被完全饱和以后，溶液中没有多余的酶，即使增加底物浓度也不会有更多的中间产物生成，此时酶促反应速度与底物无关，达到最大反应速度。配制不同浓度的葡萄糖标准溶液，在葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）催化下进行反应，测定反应完成时（15分钟）的吸光度A,从而观察反应速度的动态变化。以葡萄糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制出A-C标准曲线（又称校准曲线、剂量工作曲线）。曲线中呈线性的浓度范围为线性范围。二、样品的处理与测定同实验二。三、绘制A-C曲线同实验二。四、结果及讨论课堂提问酶促反应速度随底物浓度的变化关系是怎样的？课堂小节掌握酶促反应速度随底物浓度的变化关系； GOD-POD法测Glu的原理。作业简述GOD-POD法测Glu的原理。参考书钱士匀主编.临床生物化学和生物化学检验实验指导.第2版，北京：人民卫生出版社，2003教研室生化检验课程生物化学检验专业（层次）医学检验（中专）教材生物化学检验早下实验十七速率法测定酶活性——连续监测法测定碱性磷酸酶学