双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价

双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价摘要：目的方法结果540nmA，CV%2.36%，105%，R20.9980。结论在严格规范操作下，双缩脲法测定血清总蛋白的精密度高，关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价BiuretmethodwasdevelopedforthedeterminationofproteinevaluationmethodologyAbstract Objective Thepurposeofthedoublereductionofurineproteindeterminationofserumtotalperformanceevaluationmethods,tothequalityofanalyticalmethods.Methods Biurettestpreparation,andformulatedwiththebiuretteststandardserumtotalproteinintheassayreproducibilitytest,recoverytestandlinearrangeofevaluationtoevaluatethedoublereductionofurineassayprecisionofserumtotalprotein, accuracy and linear range.Results A spectrophotometerabsorbanceat540nmwave,theassociateddataanalysis,determinationofintra-assaycoefficientofvariationoftotalserumproteintestreproducibilityCV%was2.36%,theaveragerecoveryrecoverytest105%biuretmethod,linearevaluationtestrangeR2is0.9980.Conclusion Inthestrictlyregulatetheoperation,biuretserumtotalprotein,highprecision,accuracyandlinearitybettermeettheclinicalforquantitativedeterminationoftotalserumprotein,serumtotalproteinconventionalmethodsofclinicalmeasurement.Keywords Biuretmethod;Totalserumprotein;EvaluationMethodology[1]Doumas[2]试验，从而评价双缩尿法测定血清总蛋白的精密度、准确度和线性范围。材料和方法材料仪器分光光度计试剂配制双缩脲试剂的基本试剂有NaOH钠、碘化钾。30g/L蛋白质标准液60g/L,蛋白质标准液，150g/L蛋白质标准液，待测血清标本，蒸馏水。方法批内重复性试验1312101表1 试剂添加加入物（ml）空白管标准管×2测定管×10蒸馏水0.06——30g/L蛋白标准液—0.06—待测样品——0.06双缩脲试剂333充分混匀，3710min30min，540nm空白管调零，测定各管吸光度。结果记录和处理待测样品浓度：血清蛋白质(g/L)=A/A平均值：SD=(∑Si2)½Si^2=∑(Xi-x)^2/n-1，CV%=(SD÷x)×100管号待测管吸光度1234管号待测管吸光度123456789 100.1390.1430.1380.1470.1480.1470.1400.1420.1450.145蛋白质浓度(g/l)58.7360.4258.3162.1162.5462.1159.1560.0061.2761.27平均浓度(g/l) 60.59方差 2.05变异系数(%) 2.36管号12标准管吸光度标准管平均吸光度0.1360.1420.148讨论评价批内重复试验测得数据的平均蛋白浓度为60.59g/l,方差SD2.05,变异系CV%2.36%<2.5%，回收试验样品制备:基础样品：待测样品0.45mL+蒸馏水0.15mL回收样品1：待测样品0.45mL+150g/L蛋白溶液0.05mL+蒸馏水0.1mL2：0.45mL+150g/L0.1mL3：0.45mL+150g/L0.15mL1011823表3 添加试剂试剂(mL)空白管标准管样品管蒸馏水150g/L蛋白溶液样品0.060.060.06双缩脲试剂33337℃1030540nm结果记录和处理加入浓度(g/L)=150×(回收样品中加入的150蛋白溶液体积/0.6)回收浓度=回收样品测得浓度-基础样品测得浓度回收率=(回收浓度/加入浓度)×100%吸光度测定浓度表4 蛋白质测定的回收试验结果吸光度测定浓度测定1测定2测定1 测定2平均浓度加入浓度回收浓度回收率标准管0.1170.147基础样品0.0540.05527.6922.4525.07回收样品10.0870.08844.6235.9240.2712.5015.201.22回收样品20.1120.10557.4442.8650.1525.0025.081.00回收样品30.1260.13464.6254.6959.6537.5034.500.92平均回收率1.05讨论评价95%-105%，100%，105%，95%-105%12>3，100%，验表明随着150g/L蛋白溶液加入量的增多，待测样品的回收程度越差，影响中干扰物的含量。线性范围评价试验样品制备（采用稀释法制备1：150g/L1mL2：125g/L3：100g/L4：75g/L5：50g/L6：25g/L7：5g/L8：1g/L17116，825表5 添加试剂试剂(mL)空白管样品管蒸馏水样品0.060.06双缩脲试剂33匀后37℃水浴10分钟或室温放置30分钟，540nm波长比色，空白管调零。结果记录和处理表6 双缩尿法线性评价试验样品浓度(g/l)5255075100125150吸光度10.0140.0580.1090.1610.2290.2700.336吸光度20.0130.0490.1030.1670.2320.2790.342平均吸光度0.0140.0540.1060.1640.2310.2750.339图1 双缩尿法线性评价试验讨论评价建立回归方程y=0.002x-0.001，R2=0.9980，从剂量反应曲线结果来看，R2=0.9980.995，95%总结讨论CV%2.36%<2.5%接受。在回收试验中，一般要求回收率在95%-105%，本试验测得的平均回收率105%。虽然测得的结果准确度不是很高，但也在可接受的范围内，另外，回R2=0.998方法的线性范围的上限应能使95%的临床标本