医院检验中心VMA操作规程

医院检验中心 VMA操作规程试剂：ReagentB1MTris75ml550mReagentC0.2N醋酸钠冲洗液l550mReagent10.2N醋酸钠微柱缓冲液lReagent24M碳酸钾缓冲液30mlReagent32瓶、每瓶0.4克NaIO4Reagent42瓶、每瓶2.5克Na2S2O5VMA标准1瓶树脂柱50支另外试剂乙醇（分析纯）1N乙酸：57.1ml冰醋酸+D.water至1000ml试剂准备:ReagentB.C.1.2: 如提供的使用NaIO4溶液:4%Reaent3+10mlD.water2- 8℃稳定2周Na2S2O5溶液:10%Reagent4+25mlD.water2- 8℃稳定2周VMA标准液:1N乙酸5ml加至VMA标准瓶中浓度为 1.2mgVMA/ml2-8℃稳定4周,-20℃稳定3月注意:收集标本前 3天、病人禁食香蕉、香草、巧克力、咖啡、茶及呋喃嘧啶类药物、包括 2,5一二羟基苯甲酸和 2,5一二羟基苯乙酸。收集:干净容器，加入 15ml20%HCl(或12ml25%HCl)作稳定剂重要：调整标本 PH值1.5~3.5注意: 用尿液质控必须用 0.1NHCl溶解,若用D.water 则需加10ul6NHCl/2.0ml操作步骤:在第一次操作分析前须完整仔细阅读操作手册让所有试剂和标本到达室温在非常熟练之前,所有试验必须双份为有良好的实验操作,每次操作须携带质控操作过程:准备标准:Tube1:standardSo:Oul(=OmgVMA/L)+2.0mlurineTube2:standardS1:25ul(=15mgVMA/L)+2.0mlurine吸2.0ml标本和质控到标记的试管中。用试剂B调至PH大约5.5~7.5(PH指示纸)接近或超过PH7.5时会出现混浊,加少许1N乙酸。准备标准、质控、标本的过滤柱。摇动柱使树脂完全悬浮，让树脂下沉（避免气泡），去帽、除滴头，让柱完全在架上下流。加标准、质控、标本到相应的柱中，让其完全流经，去除洗出液。转移柱子到相应试管中（16×160mm）,每柱中加10mlReagent1收集洗出液,去除过滤柱。每管准备测定和空白,测定和空白管加2.0ml洗出液。加0.2mlReagent2到每管中,混匀3~5秒。9. 每支测定管加 0.1mlReagent3, 每支空白管加0.2mlReagent4, 充分混匀。10.37℃水浴 30′11. 未冷却测定管中直接加 0.2mlReagent4, 空白管中加0.1mlReagent3 充分混匀.测定:在360nm波长以D.water为空白测出吸光度在380nm波长以D.water为空白测出吸光度计算:△Eso(380)=Eso(380)-EBo(380)△Eso(360)=Eso.(360)-EBo(360)△Es1(380)=Es1(380)-EB1(380)△Es1(360)=Es1(360)-EB1(360)△Et(380)=Et(380)-EBt(380)△Et(360)=Et(360) -EBt(360)bNetEso=△Eso(360)-△Eso(380).NetEs1=△Es1(360)-△Es1(380)NetEt=△Et(360) - △Et(380)cCorr.Es1=Nets1-Netso.dVMAt(mg/L)=15mg/corr.Es1×NetEt.eMgVMA/24h=mgVMA/L×24h 尿量.正常范围:mgVMA/24h:1-8mgVMA/24hVMASo:Oul 标准+2.0ml尿液S1:25ul 标准+2.0ml尿液↓用B试剂调整每管2.0ml尿液的PH:5.5-7.5,出现混加少许1N乙酸↓摇动使柱完全悬浮 ,脂下降(无气泡),去帽,去滴头↓相应标本加入柱中 ,余液用3mlD.water 冲洗加入+10mlReagentC到柱中,完全流经,去除洗出液↓移柱至相应管中 +10mlReagent1. 收集洗出液,去除柱↓每管均设定测定和空白 ,且每管加2.0ml洗出液↓“B”和“T”+0.2mlReagent2混匀3-5秒↓T BReagent3 0