您身边具有辅助降血压功能的物质(保健品)

PAGEPAGE45具有辅助降血压功能的物质血压（bloodpressure，BP）是血液在血管内流动时，对血管壁产生的侧压力。它是推动血液在血管内流动的动力。包括动脉血压、毛细血管压和静脉血压。人们常说的血压是指动脉血压，心室收缩，血液从心室流入动脉，此时血液对动脉的压力最高，称为收缩压（systolicbloodpressure，SBP）。心室舒张，动脉血管弹性回缩，血液仍慢慢继续向前流动，但血压下降，此时的压力称为舒张压（diastolicbloodpressure，DBP）。正常的血压是血液循环流动的前提，血压在多种因素调节下保持正常，从而提供各组织器官以足够的血量，藉以维持正常的新陈代谢。血压异常（低血压、高血压）会造成严重后果。高血压是目前最常见的血压异常情况。一、对高血压的认识高血压（hypertension）是以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征，可伴有心脏、血管、脑和肾脏等器官功能性或器质性改变的全身性疾病，是最常见的心血管疾病。可分为原发性高血压和继发性高血压两大类。在绝大多数患者中，高血压的病因不明，称之为原发性高血压（primaryhypertension），比例占高血压患者的90%～95%以上；血压升高是由于某些疾病的一种临床表现，本身有明确而独立的病因，称为继发性高血压（secondaryhypertension），占总高血压患者的5%～10%左右。我国目前采用国际上统一的高血压诊断标准，WHO/ISH（世界卫生组织及国际高血压联盟）1999年规定：①理想血压：收缩压<120mmHg、舒张压<80mmHg。②正常血压：收缩压<130mmHg、舒张压<85mmHg。③正常高值：收缩压130～139mmHg、舒张压85～89mmHg。④高血压：收缩压≥140mmHg和（或）舒张压≥90mmHg。以上标准适用于男女两性任何年龄的成人，对于儿童，目前尚无公认的高血压诊断标准，但通常低于成人高血压诊断的水平。二、高血压的病因及危害近年来流行病学调查资料显示，尽管人们对高血的研究和认识都有了很大的提高，检测手段和治疗方法也取得了很大的进步，但高血压仍是心血管疾病死亡的重要原因之一。高血压发病的原因很多，现代医学认为主要原因来自遗传和环境两个方面。一般认为高血压是在一定的遗传背景下由于多种后天环境因素作用使正常血压调节机制失代偿所致。人体血压大小主要决定于心排血量及体循环的周围血管阻力，一切影响这两方面的因素均可导致血压异常。人体本身具有调节异常血压的机制，一般分为神经性调节（快）和体液性调节（慢）。血压的快速调节主要通过压力感受器及交感神经活动来实现，而慢性调节则主要通过肾素-血管紧张素-醛固酮系统及肾脏对体液容量的调节活动来完成。如果这两类血压调节机制失去平衡则会导致高血压的产生。高血压早期无明显病理学改变，仅表现为心排血量增加和全身小动脉张力的增加。高血压持续及进展即引起全身小动脉病变，小动脉中层平滑肌细胞增殖和纤维化，管壁增厚和管腔狭窄，使外周阻力持续增高，导致重要靶器官心、脑、肾组织缺血，长期高血压及伴随的危险因素可促进动脉粥样硬化的形成，该病变主要累及中、大动脉。最终引起脑、心、肾、视网膜等重要器官结构与功能的损害，导致这些器官功能衰竭，迄今仍是心、脑血管疾病死亡的重要原因之一。①心：由于长期周围血管阻力升高，加重心脏负荷，早期发生代偿性左心室肥厚，随着病情发展心脏继续扩张，最后可能发生心力衰竭及严重心律失常。长期高血压可促使脂质在大、中动脉内膜沉积，引起动脉粥样硬化的形成，尤其是冠状动脉硬化的发展。②脑：长期的血压升高，使脑部小动脉硬化及血栓形成，易于破裂出血或痉挛导致脑血栓的形成。③肾：由于肾脏入球和出球小动脉痉挛、硬化、退变导致肾实质的缺血、缺氧，最终导致肾小球纤维化、萎缩至肾衰竭。④视网膜：血压长期升高使得视网膜小动脉从痉挛到硬化，发生视网膜出血或渗出。三、高血压的预防和治疗1992年国际心脏会议提出高血压预防的主要内容是的“健康四大基石”，即“合理膳食、适量运动、戒烟限酒、心理平衡”，其核心就是健康的生活方式，可使高血压的发病率下降55%。①合理膳食合理的膳食很重要，以低脂、低钠、低胆固醇的饮食为主，食盐摄入量的标准为每天少于6克。少吃高脂肪、高盐、高热量的食品，多吃新鲜蔬菜、水果和坚果，从饮食上控制体重的增加。②适量运动进行适度的体育锻炼，如快走、慢跑、健身操等，以促进热量的消耗。③戒烟限酒吸烟和过量饮酒均会刺激心率增加和血管收缩，导致血压升高，更重要的是，吸烟是脑卒的重要危险因素。因此，为了降低心血管病的危险因素，吸烟的人应争取戒烟。每日饮少量的酒，能有效地降低高血压病及冠心病的患病率和病死率。适量饮酒能缓解紧张情绪，过量则适得其反。④心理平衡紧张、急躁和焦虑会使血压升高。劳逸结合，心情放松，保持足够的睡眠，养成良好的生活习惯。四、具有辅助降血压功能的物质对于“辅助降血压”功能认定，保健食品检验与评价技术规范（2003版）中保健食品的功能实验是这样认定“辅助降血压”功能的：选择符合条件的原发性高血压患者（收缩压≥140mmHg和或舒张压≥90mmHg），受试者在试食观察期间不改变原有抗高血压药物治疗方案的基础上，按推荐剂量和服用方法服用30～45天，血压达到以下标准为有效：舒张压下降≥10mmHg或降至正常；收缩压下降≥20mmHg或降至正常。按症状轻重（重症3分，中症2分，轻症1分）统计食前后积分值和计算改善率，症状改善1分及1分以上为有效。研究辅助降血压功能食品目的不是在于单纯降低患者血压,重点是在于改善高血压症状,促进心、脑、肾、血管病理改变的恢复。现代医学研究证明,西医降压药和中医降压药各有其优缺点。西药并未解决导致血压升高的病理因素,一旦停药血压就会很快反弹升高,使患者必须终身服药。中药的降压效果虽不如西药,但能通过其对脏腑机能的调节,改善导致血压升高的病理因素而达到防治血压升高的效果。且中医认为药补不如食补,具有药食两用的药物更是高血压患者的理想选择。研究表明,降血压功能食品功效成分主要有黄酮（芦丁等），皂苷，不饱和脂肪酸，粗多糖，低聚糖类，维生素，钾镁硒等微量元素等。目前，市场上共有60多种“辅助降血压”功能的保健食品，产品大多与辅助降血脂、改善睡眠、抗氧化、辅助降血糖等功能搭配，大多辅助降血压物质也具有降血脂的功能。从剂型上来看，以中草药为原料的胶囊、茶饮、提取物冲剂最为常见。国家卫生部和国家食品药品监督管理局批准具有辅助降血压功能的部分物质：杜仲，杜仲叶，罗布麻叶，葛根、决明子、丹参、天麻，绿茶，泽泻，三七，绞股蓝，菊花，大蒜油，海澡酸钾，牛磺酸，山楂，银杏叶，芦丁（提取物），红花，藏红花，大枣，甘草，海带，蒲公英，夏枯草，玉米胚芽油，硒及富硒食品，维生素E，藜蒿，槐米，昆布，桑白皮，微晶纤维素，蜜环菌菌丝体。其它具有辅助降血压功能的物质：γ-氨基丁酸（GABA），茶氨酸，低聚糖类，虎杖，降血压肽，钩藤，荷叶，野菊花，淫羊藿，可可多酚，灵芝，大豆低聚肽，海藻酸低聚糖，酿造醋，牡蛎肉，贝母，无花果，芹菜等等。杜仲和杜仲叶（一）主要功效成分介绍1．组成、结构与性质杜仲(拉丁植物名EucommiaulmoidesOliver)是名贵药材，英文名CORTEXEUCOMMIAE，别名思仙、思仲、木绵、石思仙、扯丝皮、丝连皮、玉丝皮、丝棉皮等。为杜仲科植物的干燥树皮。4～6月剥取，刮去粗皮，堆置“发汗”至内皮呈紫褐色，晒干而成。气微，味稍苦。杜仲入药在我国已有2000多年的历史，祖国医学认为，杜仲味甘、微辛、性温，具有补肝肾、强筋骨、安胎之功效[1][2]。近年来，许多学者对杜仲的化学成分进行了大量研究，发现杜仲的皮、叶有相似的化学成分和药理作用。杜仲化学成分复杂，目前已确定有活性成分有木脂素及其苷类化合物[3]，木脂素包括双环氧木质素类(如松脂素单糖甙、松脂素二糖甙或称松脂醇二葡萄糖甙，中脂素、中脂素单糖甙，中脂素二糖甙、丁香素、丁香素单糖甙、丁香素二糖甙)；单环氧木质素类(如橄榄素、橄榄素二糖甙)、环木质素类(如橄榄素)；新木质素类(如二羟基脱氢二松柏醇、柑桔素B)；倍半木质素类(如耳草素二糖甙)等。其中松脂素二糖甙为杜仲皮主要降压成分，丁香素二糖甙有抗癌活性，一些木质素类化合物对CAMP磷酸二酯酶有强的抑制活性，故可成为血管扩张剂[4]；苯丙素类化合物，木脂素的前体，主要有绿原酸（杜仲叶主要功能指标之一）、咖啡酸、二氢咖啡酸、松柏酸、愈创木丙三醇、松柏苷、丁香苷、间羟基苯丙酸、绿原酸甲酯、香草酸、β-谷甾醇、熊果酸、寇布拉苷[5]；环烯醚萜类；黄酮类化合物（槲皮素、芦丁类物质）；儿茶素；氨基酸；微量元素及维生素、杜仲胶、杜仲抗真菌蛋白、挥发性成分（不饱和脂肪酸类）、萜类和甾醇类化合物、单糖和多糖类化合物等等。杜仲有种类繁多的化学成分和广泛的药理药效，临床应用前景极为广阔，在医药领域有巨大潜力。大量动物实验表明，杜仲的皮、叶提取物有降血压、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老作用、利尿、增强免疫力等功效作用。经广泛研究证明，杜仲提取物中取有降血压功能的活性成分为木脂素类化合物、芦丁和槲皮素等。木脂素类化合物是目前杜仲化学成分中研究最多、结构最清晰、成分最明确的一类化合物，从杜仲中分离出的木脂素类化合物已有27种，其中多数为苷类化合物。结构见表DZ01[6]。其中的松脂醇二葡萄糖苷是最主要的降压成分。北京中医学院李家实等[7]对杜仲皮和叶分别作了降压实验，结果表明，杜仲叶和皮中的生物碱、桃叶珊瑚甙、氯原酸、糖类均有同程度的降压作用。此外，水溶性硅、钙含量高，都可能参与对心血管功能的调节。松脂醇二葡萄糖苷，英文名称：PinoresinolDiglucoside，分子式：C32H42O16，分子量：682.67，CAS号：63902-38-5，化学分类：Lignans木脂素类。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲提取物中主要的降压成分之一。图DZ01松脂醇二葡萄糖苷分子结构式芦丁，英文名称：Rutin，分子式：C27H30O16，分子量：610.51，CASNO：153-18-4，浅黄色针状结晶（水），熔点176℃-178℃，难溶于冷水，可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶，易溶于碱水。产品来源：芸香叶、烟叶、枣、杏、杜仲、橙皮、番茄、荞麦花等中。主要由醇提、萃取、层析、结晶等工序完成。保存于阴凉干燥、避光、避高温。图DZ02芦丁分子结构式槲皮素，英文名：Quercetin，又名栎精，槲皮黄素，分子式：C15H10O7分子量：302.24，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水。二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97°C成为无水物，熔点314°C（分解）。熔点314℃，极微溶于水和乙醚，溶于冰醋酸及碱性水溶液显黄色等。几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦，可作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。图DZ03槲皮素分子结构式表DZ01杜仲中已知27种木脂素化合物结构[6]绿原酸，英文名：Chlorogenicacid；别名：氯原酸,咖啡鞣酸；化学名：(1S,3R,4R,5R)-3-[[3-(3,4-二羟基苯基)-1-氧代-2-丙烯基]氧]-1,4,5-三羟基环己烷甲酸；CASNO:327-97-9；分子式及分子量：C16H18O9=354.30。天然的绿原酸是由咖啡酸（Caffeicacid）与奎尼酸（Quinicacid，1-羟基六氢没食子酸）生成的缩酚酸，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。图DZ04绿原酸的分子结构式2．生物学和药理学功能杜仲降血压功效很早就在动物和临床试验成功证实了。美国威斯康星大学CharlesJsih等[8]研究认为杜仲提取物中降血压的有效成分是松脂醇二葡萄糖苷、杜仲绿原酸和桃叶珊瑚甙等。作用机理是由于其直接作用于血管平滑肌，使血管扩张。可以改善高血压症状，减少血管损伤，改善脑、肾等脏器的循环。康存战等[9]用杜仲口服液灌胃自发性高血压大鼠，实验研究证实：杜仲口服液对自发性高血压大鼠有明显的降压作用，且对机体健康无不良影响。黄志新等[10]用杜仲水提液对肾性高血压小鼠灌胃，也证实具有降血压作用，最大耐受量灌胃，也未见急性毒性反应。李家实等[7]用杜仲水浸提物进行了急性降血压试验，发现杜仲的降压作用与其中含有的绿原酸、桃叶珊瑚苷和糖类等物质有关。李武明等人[11]通过对45例高血压受试者临床观察发现，复方杜仲片具有较好的降压作用，且能明显改善临床症状，并兼有降低TG、TC、ET、TXA2和升高NO的作用，无不良反应；张瑛朝等[12]通过对60例高血压受试者的临床研究发现，复方杜仲叶合剂对人体有明显的降压及调节血脂的作用，且对机体健康无不良影响。3．安全性（毒理）杜仲提取物的安全性[2]：小鼠LD50为17.3±0.52g/kg(煎剂小鼠腹注)。杜仲叶提取物的安全性[2]：①大鼠LD50>5.64g/kg(大鼠，经口)。②对4周龄大鼠每日饲以5g/kg体重杜仲提取物，经14d后，测体重，用乙醚麻醉后放血致死，解剖，观察胸、腹部并测定其肝、肾、脾脏质量，均无异常发现。③曾对成人12名每天给予含杜仲叶提取物6～12g/d×10d的饮料饮用，经临床药理评价，确认无有害作用。④杜仲叶常作茶饮，不仅在中国，而且在日本也较普及。刘月凤等[13]人对杜仲提取物的亚慢性毒理学研究表明，给小鼠以最大剂量18.2g/kg灌胃，7d内动物均无异常反应。小鼠精神状态良好，无死亡发生，给药后的第8天处死动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均无异常发生。刘丽春等[14]对复方杜仲片的毒理学研究表明，复方杜仲片以灌胃给药小鼠药，测得最大耐受量为35.6g/kg，接近临床剂量的200倍。在观察期间，全部小鼠存活，剖检，肉眼观察主要脏器，未见心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织明显异常。急性毒理学试验也进一步证实了杜仲提取物为基本无毒物。黄武光等[15]用杜仲叶冲剂静脉注射给药麻醉猫和对小鼠灌胃进行急性毒性实验，结果杜仲叶冲剂能使麻醉猫血压平缓而较持久地明显降低：对小鼠空腹最大耐受量灌胃，未见急性毒性反应。因此认为杜仲叶冲剂具有明显降压作用，且无明显急性毒性反应。隋海霞等[16]运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验对杜仲进行了较系统的安全性评价。结果：杜仲的LD50为160.0g／kg；对CHO和CHL细胞的Ic50均为109．38mg／ml，并且在该剂量之下为阴性结果。认为杜仲属无毒物，在较高剂量下对CHO和CHL细胞均表现出一定的毒性，该实验条件下无细胞染色体畸变的遗传毒性。张国红等[17]研究杜仲康茶对大鼠性功能的影响及其对小鼠的急性毒性作用，以最大剂量给小鼠灌胃后观察7d，全部动物存活．未观察到急性毒性的发生。（二）功效成分的检测方法1.松脂醇二葡萄糖苷的检测方法目前，用于杜仲及提取物中松脂醇二葡萄糖苷的检测方法有薄层色谱法、反相高效液相色谱法和液质联用法。其中以反相高效液相色谱法报道最多。样品经提取后，在反相色谱柱上与杂质分离，紫外检测定量。伍庆,张明时,王兴宁等[18]采用高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量，采用DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15:85:0.5)为流动相,检测波长227nm。样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%;绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98μg，γ=0.999和0.872～8.72μg，γ=0.9998。王月茹,谢伟,王西芳等[19]采用高效液相色谱法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量，使用ODS-C18柱(5μm,4.6mm×250mm)为分析柱，流动相为：乙腈-0.1%磷酸(15:85)，检测波长为227nm，流速为1.0mL/min，柱温:30℃。松脂醇二葡萄糖苷在1.086～5.430μg范围内线性关系良好(γ姜新义等[20]以正交设计方法确定样品制备的最佳条件，采用HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量。于45℃下采用超声提取20min，并用改良的色谱条件进行杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量测定，所得结果与采用现行中国药典法(2005年版一部)测得的松脂醇二葡萄糖苷含量接近，含量测定中所采用的流动相为乙腈-水(15:85).获得了对称性良好的色谱峰和理想的分离度。所建方法样品处理过程简便、迅速,含量测定结果准确可靠、分离效果好、稳定性好,可以快速并准确测定多批样品张倩茹等[21]建立杜仲及相应制剂中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的含量测定方法，方法也采用高效液相色谱法测定，色谱条件中色谱柱采用AgilentEclipseXDB-C18150×4.6mm,5μm)，流动相:甲醇-水(26:74)，流速:1.0mL/min，检测波长：230nm，柱温为25℃，进样量：10μL，PDG在0.05080～0.5080mg/mL范围内呈良好线性(γ罗旭彪等[22]采用液相色谱-质谱仪检测杜仲中松脂醇二葡萄糖苷。流动相0.1%甲酸水溶液和甲醇体系，梯度洗脱，质谱条件采用负离子扫描，定量离子为m/z519，待测物在0.03～0.45μg范围内呈良好线性(r=0.9920)。方法定性准确、重复性好。方法已经成功地分析了杜仲的皮、叶、提取物、天麻杜仲胶囊和杜仲茶中9种活性成分。2.绿原酸、芦丁和槲皮素功效成分的检测方法目前氯原酸的分离与测定方法较多，主要有：高效液相色谱法、反相高效色谱法、紫外可见分光光度法、纸层析－紫外分光光度法、薄层扫描法、毛细管电泳法。吴红等[23]采用紫外分光光度法及薄层色谱扫描法分别测定。纸层析紫外分光光度法(剪洗法)测得杜仲叶中氯原酸含量为1.949%，变异系数(CV)1.34%，回收率100.44%。薄层色谱扫描法测得含量为1.886%，变异系数1.72%，回收率101.27%。马柏林等[24]利用氯原酸的配位效应进行显色的有关参数，建立了测定氯原酸的可见分光光度法。方法具有仪器简单、灵敏度高、选择性好、快速准确、容易普及等优点。用于样品中氯原酸测定的标准偏差为1.0%～3.1%，标准加入回收率为100.8%～102.4%。张泽楷等[25]采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定杜仲降压片中绿原酸、芦丁含量。色谱条件：SpherisorbBDS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，流速1ml/min，检测波长350nm，样品中绿原酸、芦丁加样回收率分别为99%、98%。董娟娥等[26]建立了利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定杜仲雄花及其产品中京尼平苷酸和绿原酸的方法。所用的色谱柱为Shim-packVP-ODS(150mm×4.6mm,5μm)，流动相为甲醇-水-乙酸(体积比为24∶75∶1)，检测波长为240nm。在该色谱条件下绿原酸的含量在0.075～1.200g/L范围内线性关系良好，相关系数0.9990。王柏强等[27]建立测定杜仲缓释滴丸中绿原酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。以迪马C18柱(250mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为327nm。绿原酸在1.3～130.0μg/mL范围内与峰面积值线性关系良好，γ=0.9999(n=6)。该方法操作简便,结果准确可靠。孙娟娟等[28]比较具有降压作用的5个科属代表性植物中芦丁和槲皮素含量差异。建立一种反相高效液相色谱法同时测定中药材(连翘、杜仲、槐花、金银花、雪莲花)中芦丁和槲皮素的含量，2种黄酮化合物线性范围为10～5000ng，平均加样回收率均在97%～102%，精密度和重复性RSD均小于5%，定量限(S/N=10)低于5.0ng。何新荣等[29]建立采用高效毛细管电泳测定杜仲中有效成分绿原酸(CA)含量的方法。方法采用毛细管区带电泳(CZE)，以内标法测定。运行电解质为含80mmol/L硼砂缓冲液-100mmol/L氢氧化钠(20：1,pH=9.32),工作电压30kV，柱温25℃余济海等[30]建立反相高效液相色谱法同时测定了杜仲叶中2种黄酮类成分—芦丁和槲皮素的含量。色谱柱为Nova-PakC18(3.9mm×300mm,4μm)，流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液(50:50)，流速0.6mL/min，检测波长为356nm，芦丁和槲皮素的线性范围分别为0.246～4.92μg(γ=0.9999)和0.0846～1.692μg(γ=0.9999)，平均回收率(n=5)分别99.8%和102.1%。方法准确、快速、重现性好，适用于同时测定杜仲叶中黄酮类成分的含量。伍庆等[31]建立同时测定杜仲叶中芦丁、槲皮素、山萘酚的高效液相色谱法。采用SpherisorbBDSC18柱(5μm,250mm×4.6mm)，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，流速1mL/min，检测波长350nm。芦丁、槲皮素、山萘酚的线性范围分别为0.579μg～5.79μg，γ=0.9999；0.12μg～1.20μg，γ=0.9998；0.109μg～1.09μg，γ=0.9999。陈望爱等[32]建立了分析比较杜仲和杜仲叶中挥发油和黄酮类的化学成分。对于挥发性成分,采用毛细管气相色谱-质谱(GC-MS)技术和化学计量学的方法对各个色谱峰定性,并用色谱峰面积归一法定量；对于黄酮类成分,采用高效液相色谱-二极管阵列(HPLC-DAD)分析技术并结合标准曲线法给芦丁、槲皮素和山柰酚定量。王明艳等[33]利用分子自组装技术制备了4-(3-吡啶基)-2-巯基咪唑(PMI)修饰金电极.采用一阶微分线性扫描伏安法同时测定芦丁和槲皮素的含量,发现两氧化峰相差200mV左右.在优化条件下,在共存溶液中当芦丁及槲皮素分别在5.0～100.0μmol/L和10.0～150.0μmol/L浓度范围内,其氧化峰电流与浓度有良好的线性关系,检出限分别为1.0μmol/L和2.0μmol/L。林淼等[34]采用毛细管电泳/电化学检测法(CE/ED)同时分离测定了杜仲叶、杜仲皮及市售杜仲保健品中芦丁、抗坏血酸、金丝桃甙、绿原酸、槲皮素等多种生物活性成分的含量,考察了运行缓冲液酸度和浓度、分离电压、氧化电位和进样时间等实验参数对分离、检测的影响.在最优化条件下，以300μm碳圆盘电极为检测电极，检测电位为+950mV(vs，SCE)，50mmol/L硼砂的运行缓冲液(pH9.0)中，各组分在20min内可基本实现基线分离.各组分浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好线性，检出限(S/N=3)在3.3×10-5～9.6×10-5g龚明贵等[35]用分光光度法测定杜仲花粉黄酮含量的方法。方法以芦丁作为对照品，采用NaNO2-A1(NO3)3-NaOH体系显色，R=0.9952，在波长510nm下检测总黄酮含量为3.29%。张敏等[36]根据黄酮类化合物能与Al3+形成稳定的荧光络合物，建立一种测定杜仲叶总黄酮的新方法.用60%乙醇加热回流提取杜仲叶有效成分，以芦丁为标样，选择激发波长λex=436nm，发射波长λem=483nm，采用荧光分光光度法测定杜仲叶中总黄酮含量，方法检出限为1.27×10-9mol/L，线性范围在1.64×10-8～3.63×10-5mol/L之间，线性回归方程:y=17.923x+1.398，相关系数γ=0.9989，平均回收率99.8%-104.2%，相对标准差(RSD)0.84%。（三）检测方法实例方法一保健食品中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的测定[16]1、方法提要建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱法。方法采用DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15+85+0.5)为流动相,检测波长227nm。样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%，绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298μg~2.98μg，γ=0.9999和0.872μg~8.72μg,γ=0.9998。2、试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.1乙腈：色谱纯。2.2甲醇。2.3磷酸。2.4绿原酸及松脂醇二葡萄糖苷标准品：中国药品检验所。2.4.1标准品储备液分别准确称取2.4对照品适量,用60%甲醇溶解后置于25mL的容量瓶,并稀释至刻度,配置成含绿原酸1.49mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷4.35mg/mL的对照品储备溶液。2.4.2标准品溶液应用液分别准确吸取对照品储备溶液1.00mL置于10mL的容量瓶中,用60%甲醇溶解并稀释至刻度,配置成含绿原酸0.149mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷0.435mg/mL的标准品应用溶液。临用现配。3、仪器及条件3.1回流装置。3.2水浴锅。3.3高效液相色谱仪：带紫外检测器或二级管阵列检测器。3.4色谱条件色谱柱DiamonsilC18柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相为乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15+85+0.5),检测波长227nm。4、测定步骤4.1样品处理供试品溶液精密称取杜仲药材粉末(过60目筛)2g，于100mL锥形瓶中,加入25mL60%甲醇溶液,称定重量,在水浴上回流提取1h,冷却后用60%甲醇补足重量。过0.45μm的滤膜供HPLC分析。4.2标准曲线分别准确吸取标准应用液（2.4.2）绿原酸0.149mg/mL,松脂醇二葡萄糖苷0.435mg/mL，进样2μL，5μL，10μL，15μL，20μL，按3.4色谱条件进行分析，外标法定量。4.3标准品和样品色谱进样量均为10μL，测定峰面积，用外标法计算含量。5、测定低限、回收率、精密度5.1线性关系绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的回归方程分别为：Y=267175X+1288.1,γ=0.9999,Y=188306X+280.73,γ=0.9998。绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷分别在0.298μg~2.98μg，0.872μg~8.72μg间呈良好的线性关系。5.2回收率和样品提取液的稳定性实验精密称取已测含量的杜仲药材粉末6份,每份2g,按样品含绿原酸及松脂醇二葡萄糖苷的80%,100%,120%精密加入绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷对照品储备溶液,按4.1方法处理样品。测得绿原酸及松脂醇二葡萄糖苷的回收率分别为95%~98%,96%~103%；精密度RSD分别为0.8%~1.7%,1.5%~2.7%,n=3。样品溶液稳定性实验取同一供试品溶液,分别在0，2，4，6，8，10，12h测定,绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含量的RSD分别为1.7%，2.2%，n=7。表明供试品溶液在12h内稳定。5.3精密度对同一份杜仲样品平行测定5次,绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为：0.23%，1.5%，n=5。同时称取同一份杜仲样品5份,按4.1方法进行样品前处理,在3.4色谱条件下分别测定,绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分别为：0.76%，0.69%，n=5。6、谱图图DZ05杜仲提取物中绿原酸和松脂醇二葡萄苷色谱图7、方法讨论7.1提取溶剂的选择绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷属于芳香族化合物,易溶于水及强极的溶剂中,本文选择甲醇-水、乙醇-水和水3种溶剂作为提取溶剂,结果表明,以60%的甲醇作为提取溶剂时,绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷提取较完全。7.2提取方法的选择本实验考虑了超声、回流、索氏提取3种提取方法,发现回流提取效率明显高于其他两种提取方法;实验中通过比较了提取温度、提取时间对提取率的影响。结果以回流法提取、提取温度80℃7.3检测波长的选择绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液的紫外分析表明,绿原酸在220nm,246nm,232nm,松脂醇二葡萄糖苷在227nm,280nm,288nm有较强吸收,对各波长进行比较,发现在227nm处两组分都具有较好的灵敏度,应此选择227nm为检测波长。方法二保健食品中芦丁和槲皮素含量的测定[28]1、方法提要建立反相高效液相色谱法同时测定了杜仲叶中2种黄酮类成分—芦丁和槲皮素的含量。色谱柱为Nova-PakC18(3.9mm×300mm，4μm)，流动相为甲醇-0.5％磷酸溶液(50:50)，流速0.6mL／min，检测波长为356nm。芦丁和槲皮素的线性范围分别为0.246g～4.92g(相关系数0.9999)和0.0846g～1.2、试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.1甲醇：色谱纯。2.2磷酸。2.3乙醇。2.4芦丁和槲皮索对照品：中国药品生物制品鉴定所。2.5对照品溶液。准确称取芦丁对照品6.15mg，槲皮素对照品2.16mg，用浓度70％甲醇溶液溶解后定容于25mL容量瓶中，配制成含芦丁0.2460mg/mL和含槲皮素0.0864mg/mL的对照品混合溶液，用0.45μm滤膜过滤。3、仪器及条件3.1高效液相色谱仪：带紫外检测器或二级管阵列检测器。3.2超声波提取仪。3.3旋涡混匀器。3.4样品粉碎机。3.5样品筛：40目。3.6色谱条件流动相：甲醇-0.5％磷酸(50:50)，流速0.6mL/min，进样体积l0μL，检测波长326nm，柱温25℃，外标法定量4、测定步骤4.1提取样品粉碎后过40目筛，准确称取约5.0g，置具塞三角烧瓶中，加入70％乙醇旋涡2min后超声提取2h，提取液过滤，滤渣洗涤2次，合并滤液于50mL容量瓶中，乙醇定容至刻度，0.45μm滤膜过滤，4.2测定将4.1样品提取液按（3.6）所述色谱条件进样测定，同时分别准确吸取对照品混合溶液1.0μL、5.0μL、10μL、l5μL、20μL进样分析，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线。5、测定低限、回收率、精密度5.1线性范围以对照品的进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性拟合，芦丁和槲皮素的回归方程分别为：Y=2.01×105-1.92×104(γ=0.9999)，Y=2.32×10105-1.10×104(γ=0.9999)。芦丁在0.246μg～4.92μg，槲皮素在0.0846μg～1.692μg范围内线性关系良好。5.2回收率精密称定已知芦丁和槲皮素含量的杜仲叶5份，每份约5.0g，加入适量对照品混合溶液，按4.1所述方法制备样品溶液，测定加样样品中两组分含量，芦丁和槲皮素的平均加样回收率分别为99.8％、102.1％。5.3精密度5.3.1对照品测量的精密度。取对照品混合溶液重复进样5次，进样量10μL，以峰面积外标法定量，芦丁、槲皮素峰面积RSD分别为0.3％和0.6％。5.3.2样品测量的精密度。取杜仲叶供试样品重复进样5次，进样量10μL，以峰面积外标法定量，芦丁、槲皮素RSD分别为0.5％和0.7％。5.3.3样品测量的稳定性。取样品提取液放置2h、4h、6h、8h后，进样进样分析，测得芦丁、槲皮素峰面积RSD为1.1％和0.5％，说明样品在测定时间内稳定。6、谱图.图DZ06HPLC测定杜仲中芦丁和槲皮素色谱图7、方法讨论7.1采用超声提取，以不同浓度的乙醇为提取剂，考察了2种黄酮类成分的提取效果。结果表明，用浓度70％乙醇提取时芦丁和槲皮素得率最高。7.2检测波长的选择取芦丁和槲皮素对照品混合溶液进样，使用PAD检测器进行三维扫描，提取190～600nm波长范围内2组分的紫外光谱，流动相中芦丁最大吸收波长分别为204.5nm、256.3nm和357.4nm，槲皮素最大吸收波长分别为203.4nm、255.2nm和367.9nm。提取各波长下色谱进行比较，选择356nm作为检测波长基线平稳，干扰小，峰形好。（四）参考文献国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京,化学工业出版社,2005.凌关庭.保健食品原料手册(第二版).化学工业出版社,2006尉芹，马希汉等．杜仲化学成分研究．西北林学院学报，1995，10(4)：88～93杜红岩.杜仲活性成分与药理研究的新进展.经济林研究2003，21(2)：58—61成军,白焱晶,赵玉英等.杜仲叶苯丙素类成分的研究[J].中国中药杂志,2002,27(1)：38管淑玉苏薇薇.杜仲化学成分与药理研究进展.中药材，2003，26（2）：124～129李家实．阎玉凝．杜仲皮与叶化学成分初步研究．中药通报，1986，11(8)：41～42SihCJ，eta1．Separationandsynthesisofpinoresinoldiglucosidemoidesolive．JAmChemSoc1976，98(17)：5412～5413康存战，高社干等.杜仲口服液对自发性高血压大鼠降血压功效的实验研究.中医研究,2005,18(5):25～27黄志新,岳京丽等.槲寄生、杜仲的降血压作用和急性毒性的实验研究.天然产物研究与开发.2003,15(3):245～248李武明何玉香谭元生.复方杜仲降压片治疗高血压病45例分析.中医药学刊,2004，22（2）张瑛朝张延敏等．复方杜仲叶合剂对人体降压作用的实验研究．中成药，2001，23(6)：418～421]刘月凤陈建文等.杜仲提取物的亚慢性毒理学研究.时珍国医国药,2006,17(11):2185～2187刘丽春,滕宝霞等.复方杜仲片的毒理学研究.中成药，2005,27(7):827～828黄武光等．杜仲叶冲剂主要药效学及急性毒性研究[J]．贵州医药，2000，24(5)：325—326隋海霞等.杜仲的快速毒性筛选试验.癌变·畸变·突变,2004,16(6):355～258张国红,郭鸣放等.杜仲康茶对性功能的影响及其急性毒性实验研究.河北医科大学学报.1999,20(3):140～142伍庆,张明时,王兴宁等.高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].时珍国医国药,2008,19(3)王月茹,谢伟,王西芳等.HPLC测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].现代中医药,2009,29(6)姜新义,杨中林,李萍.杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的样品处理方法优化[J].药学进展,2009,33(1)张倩茹,肖清,赵洺等.HPLC法测定杜仲及其相关制剂中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].遵义医学院学报,2009,32(4)罗旭彪,马铭等.液质联用测定杜仲及其制剂中9种生物活性成分[J].广西师范大学学报（自然科学版）,2003,21(z5)吴红,李稳宏.杜仲叶中氯原酸测定方法的比较[J].第四军医大学学报,2003,24(1)马柏林,董娟娥.纸色谱分离和分光光度法测定氯原酸[J].分析化学,2001,29(7)张泽楷.高效液相色谱法同时测定杜仲降压片中绿原酸和芦丁的含量[J].山东医药,2008,48(35)董娟娥,马希汉.反相高效液相色谱法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的京尼平苷酸和绿原酸[J].色谱,2007,25(2)王柏强,刘福.高效液相色谱法测定杜仲缓释滴丸中绿原酸含量[J].中国药业,2009,18(9)孙娟娟,葛红,侯婷婷等.几种有降压作用的植物中芦丁和槲皮素含量测定[J].中国现代中药,2009,11(1)何新荣,张琼,刘萍.毛细管区带电泳法测定杜仲药材中绿原酸的含量[J].中国药物应用与监测,2008,5(6)余济海.高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素含量的研究[J].安徽农业科学,2006,34(10)伍庆,王兴宁.高效液相色谱法同时测定杜仲叶药材中芦丁等3种黄酮类有效成分的含量[J].时珍国医国药,2009,20(5)陈望爱,张泰铭,梁逸曾等.利用GC-MS和HPLC-DAD技术分析比较杜仲和杜仲叶的化学成分[J].中国药学杂志,2008,43(11)王明艳,许兴友,马卫兴等.4-(3-吡啶基)-2-巯基咪唑修饰金电极对芦丁和槲皮素的电催化作用及其同时测定[J].分析试验室,2009,28(11)林淼,楚清脆,田秀慧等.杜仲及其保健品中生物活性成分的毛细管电泳/电化学检测[J].分析测试学报,2007,26(3)龚明贵,张红梅,孙军杰等.杜仲花粉黄酮含量测定的研究[J].农产品加工·学刊,2008，(9)张敏,李国章,曹庸.荧光分析法测定杜仲叶总黄酮含量的研究[J].光谱实验室,2005,22(1)（四川检验检疫局胡江涛）罗布麻叶罗布麻，又名：红麻、野麻、茶叶花。多年生草本，高1～2米，全株含有乳汁。茎直立，无毛。叶对生，椭圆形或长圆状披针形，长2～5厘米，宽0.5～1.5厘米，基部圆形或楔形，先端钝。其主要生长于沙漠盐碱地、河岸、山沟、山坡的砂质地。世界上约有14种，我国有3种，即罗布麻红麻、中花罗布麻白麻和大花罗布麻白麻。盛产于新疆、青海、甘肃、宁夏、辽宁、吉林等地区。罗布麻有极强的耐旱性、耐盐性、耐寒和酷暑。罗布麻的根和叶有药用价值，祖国医学记载：清凉泻火，强心利尿，降血压。治心脏病，高血压，神经衰弱，肾炎浮肿[1][2]。（一）主要功效成分介绍罗布麻是生长在盐碱、沙荒地区的一种多年生宿根草本植物。茎皮纤维可为纺织、造纸等工业的原料；花芳香，是良好的蜜源植物；其根提取物有强心作用，罗布麻叶有降高血压、治疗气管炎的功效。随着人们保健意识的增强,罗布麻保健作用的研究不断深入。罗布麻叶是卫生部和国家食品药品监督管理局批准可用于保健食品的物品名单中具有辅助降压功能物质。市售保健功能饮品“罗布麻茶”、“罗布麻袋泡茶”和含罗布麻提取物的胶囊等。1．组成、结构与性质现代医学对罗布麻叶进入了深入的研究，罗布麻叶中主要化学成分有黄酮类、儿茶素、鞣质，酸类，脂肪酸醇酯，醇类，甾体类，糖类，烷类，氨基酸类，矿物质元素等。2005版中国药典收录了罗布麻叶，记载其功效为平肝安神，清热利水。用于肝阳眩晕，心悸失眠，浮肿尿少,高血压，神经衰弱，肾炎浮肿治疗[1]。罗布麻叶中总黄酮类化合物是其主要成分和保健功能成分，含量在0.20%～1.14%，主要包括槲皮素、金丝桃苷、异槲皮苷、三叶豆苷、紫云英苷、异槲皮苷-6-0-乙酰基、三叶豆苷-6-0-乙酰基[3]。经研究证实，罗布麻提取物有降压作用、降血脂、增强免疫、抗氧化、抗衰老、清热利尿、平肝安神等功效。其中的槲皮素（quercetin，中国药典主要指标之一）、异槲皮苷（isoquercitrin）、金丝桃苷(hyperin)、芦丁(rutin)是罗布麻降血压、降脂、抗氧化的主要活性物质。其它还有绿原酸（Chlorogenicacid）、香树精（amyrin）、异秦皮定（isofraxidin）等槲皮素，英文名：Quercetin，又名栎精，槲皮黄素，分子式：C15H10O7分子量：302.24，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水。二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97°C成为无水物，熔点314°C（分解）。熔点314℃，极微溶于水和乙醚，溶于冰醋酸及碱性水溶液显黄色等。几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦，可作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。异槲皮苷和金丝桃苷，与槲皮素有同样的结构，只是在槲皮素的结构中多了一个糖苷。异槲皮苷和金丝桃苷具有相同的苷元，仅在糖基部分有一个羟基的构型不同，前者是半乳糖苷，后者是葡萄糖苷，其余部分完全相同，所以它们有相似的极性[4]。图LBMY01金丝桃苷(1)、异槲皮苷(2)和槲皮素(3)的化学结构罗布麻叶中的绿原酸具有抗菌、消炎、解毒、利胆、降压和升高白细胞及显著增加胃肠蠕动和促进胃液分泌等药理作用。绿原酸（Chlorogenicacid），别名：氯原酸,咖啡鞣酸；化学名：(1S,3R,4R,5R)-3-[[3-(3,4-二羟基苯基)-1-氧代-2-丙烯基]氧]-1,4,5-三羟基环己烷甲酸；CASNO:327-97-9；分子式及分子量：C16H18O9=354.30。2．生物学功能罗布麻及罗布麻提取物的主要生理功能有：降血压、降血脂、增强免疫、抗氧化、抗衰老、利尿等功能。完成这些生理功能的主要来自于提取物中的黄酮类活性物质、绿原酸、氨基酸、多糖类物质和微量元素的作用。与降血压西药相比，罗布麻叶降压效果虽迟缓，但降压后较为稳固，不会出现西药停药后血压立即反弹的现象，因而被公认为目前最好的中草药降压产品之一。临床研究也表明罗布麻降压作用疗效确切，作用温和，双向调节作用，尤其在改善眩晕，心悸等方面效果好。罗布麻提取物中具有降压功效的成分—黄酮类化合物，早期的研究认为是这类物质有此作用，后来人们发现并非所有的黄酮类化合物都有降压作用，其中的槲皮素、异槲皮苷才是罗布麻降血压的主要活性物质[5]。美国威斯康星大学CharlesJSih[6]等研究发现植物体内的绿原酸也是降血压的有效成分。经多年临床试验证实的，绿原酸有明显的降压作用，而且疗效平稳，无毒、无副作用。虞颖映等人[7]小鼠试验也证实罗布麻茶对有高血压症状的大鼠有显著而持续的降血压作用，不同剂量罗布麻茶能抑制食物性高脂血症大鼠模型血清TC、TG、LDL-C的升高及血清HDL-C的降低。何念善等[8]人用罗布麻复合茶对原发性高血压病56例临床观察，连续给药8周，同时以牛黄降压丸治疗组为对照，结果显示治疗组降压疗效为87.5%,优于对照组的73.1%,组间比较差异有显著性(P<0.05)，连续的监控显示罗布麻复合茶能持续有效的降低血压而不影响其心率，能增强食欲并对胃肠无刺激作用，说明罗布麻能持续有效降压且副作用小。KagawaT等[9]发现罗布麻叶提取物对自发性高血压大鼠有明显的降压作用，对稳定的血压无影响，并且在给予剂量之间呈明显的剂量正相关，其降压作用不是依赖于对交感神经系统。研究者发现罗布麻叶不降低正常血压，对于血压偏低者还能起到升压的调节作用。这些特点是其他所有降压药物不能比拟的。罗布麻叶的降压原理目前的试验认为，降压作用与组织胺有关，可能是有效成分引起某些组织释放组织胺或直接作用于组织胺受体，使血管扩张，血压降低[10][5]。有研究表明罗布麻叶提取物可引起血管松弛,改善肾功能,对自发性高血压,NaCl导致的盐性高血压和肾性高血压大鼠均有明显降压作用，同时发现可明显降低肾型高血压大鼠的舒张压，增加尿量和K+、Na+的排出，减少血尿氮(BUN)水平，可能是通过改善肾功能的作用来降低血压[11]。3．安全性（毒理）小鼠的LD50为10.6g/kg(煎剂小鼠腹注)，或黄酮苷398mg/kg[2]。罗布麻的根、茎、叶和花入药已有千年历史,其部分药理作用很早就被人们发现并用于临床，证明可靠的食用安全性，据《本草纲目》记载,罗布麻有平心悸、止眩晕、消痰止咳、强心利尿之功能。其根含治疗心脏病的强心甙，具强心、减慢心率、利尿、镇静的效用，用于治疗慢性充血性心力衰竭、心率过速、浮肿、高血压等。其叶以清热利尿、平肝、安神，用于高血压、头晕、心悸、失眠症。1977年正式录入《中华人民共和国药典》。现代的动物实验和临床试验都已证明罗布麻的饮用安全性。虞颖映、王海明[12]用小鼠对市售罗布麻茶的饮用安全进行了食品安全性毒理学评价。小鼠经口急性毒性实验、遗传毒性实验、传统致畸实验。结果表明罗布麻茶提取物对雌雄大、小白鼠的急性经口LD50均大于10.0g/kg；微核试验、精子畸形试验和致畸试验结果表明罗布麻茶无致突变、致畸作用；30（二）功效成分的检测方法1.罗布麻中槲皮素、异槲皮苷和金丝桃苷的检测方法罗布麻提取物中降血压活性成分有异槲皮苷、金丝桃苷、芦丁和槲皮素几类黄酮类物质，检测的目标物不同，因此前处理也有所不同。一是测定提取物中总黄酮（以芦丁为对照品）的含量来衡量样品中是否含有降压活性成分，常采用分光光度法比色法；二是随着分析检测技术的进步，利用现代色谱分离技术，将提取物中异槲皮苷、金丝桃苷、槲皮素、芦丁进行色谱分离后，紫外或PDA检测；三是采用将提取物中异槲皮苷、金丝桃苷等黄酮类物质水解为槲皮素后，再测定水解产物中的槲皮素。常有检测方法有分光光度法、纸层析法、薄层层析法、反相高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、毛细管区带电泳-电化学检测法、液质联用仪等。范维刚等[13]以芦丁为对照品，NaNO2-AlCl3-NaOH体系为显色剂分光光度法测定罗布麻叶内的黄酮类物质。建立了芦丁浓度-吸光度关系的回归方程为A=0.145+7.9464C,r=0.9993.平均回收率为97.67%,相对标准偏差为0.52%。刘东平等[14]以金丝桃苷作为对照品采用三种不同的显色剂建立的测定方法测定罗布麻叶中总黄酮含量。结果以金丝桃苷为对照品紫外分光光度法测定的结果最高(4.21%),以金丝桃苷为对照品三氯化铝显色法测定的结果次之(3.81%),而以金丝桃苷作为对照品亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠络合比色法测定的结果最低(3.31%)。因此，他觉得以金丝桃苷为对照品，在酸性(加入醋酸一醋酸钠缓冲液)条件下加入三氯化铝显色法后的测定方法为罗布麻叶总黄酮含量测定的适用方法。第一种直接紫外检测的方法，杂质干扰太大，结果偏高，方法不可取。该文献认为总黄酮测定的经典主法以芦丁为对照品比色测定，但新疆的罗布麻中芦丁含量很低，因此他推荐用罗布麻中含量较高的金丝桃苷来作对照品。范维刚，解成喜等[15]以芦丁为对照品，NaNO2-A1C13-NaOH体系为显色剂分光光度法测定罗布麻叶内的黄酮类物质。相关系数0.9993,平均回收率为97.67%．相对标准偏差为0.52%。黄湘兰、曾凡[16]采用薄层层析法测定罗布麻叶水浸膏中总黄酮和槲皮，也取得了比较满意的结果。刘景国，刘文亮等[17]也采用薄层色谱法测鉴别罗布麻的活性成分。范维刚[18]以采用反相高效液相色谱法测定了罗布麻叶中槲皮素和山萘酚。色谱柱为Nova-pakC18(150mm×4.6mmi.d.)，流动相为甲醇+1％乙酸梯度洗脱，流速为0.6mL/min，检测波长为360nm。槲皮素在0.0137～0.136μg、山萘酚在0.0053～0.0265μg范围内呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9998和0.9980。槲皮素的回收率为99.6％，RSD为0.97％；山萘酚的回收率为98.2％，RSD为2.0％。韩利文等[19]建立罗布麻叶中有效成分金丝桃苷的HPLC含量测定方法,并且对不同种属和产地的罗布麻叶进行比较。采用Shim-PackVP-ODS色谱柱，乙腈-四氢呋喃-0.1%醋酸(15.5∶5.5∶79)为流动相，流速10mL/min，检测波长为360nm，柱温为30℃，进样量20μL，结果金丝桃苷线性范围0.01～0.2mg/mL(γ=0.9999)。郁韵秋等[4]采用HPLC法同时测定罗布麻浸膏粉中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量。样品以甲醇溶解后，过滤进色谱分析。色谱柱为YMC-PackC18(250mm×4.6mm)，流动相为乙腈-甲醇(10：1)和0.生物酶解的技术也应用到罗布麻活性成分提取和检测中，所得到的产物和产物量也比经典方法水解技术多。张语迟等[20]采用酶解的技术对样品进行前处理后，用高效液相色谱法和电喷雾质谱联用技术并结合核磁共振和紫外光谱技术对复合酶提取的罗布麻叶成分进行了分析，结果表明复合酶可显著提高罗布麻叶的提取效率，提取物中白麻苷、芦丁、金丝桃苷、广寄生苷、乙酰化异槲皮素、乙酰化金丝桃苷、山奈酚-3-0-葡萄糖苷、山奈酚-3-0-半乳糖苷、槲皮素、山奈酚和贯叶金丝桃素含量明显增多，并得到了常规提取方法中不能得到的槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸、广寄生甘等化合物。同时张语迟也用电喷雾液质联用仪测定了罗布红麻和罗布白麻的16种主要成分[21]。（三）检测方法实例方法一保健食品中罗布麻总黄酮含量的测定（分光光度比色法）[22]（方法来源《保健食品检验与技术规范》2003版）1试剂1.1聚酰胺粉1.2芦丁标准溶液；称取5.0㎎芦丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50ug/ml。1.3乙醇：分析纯。1.4甲醇：分析纯。2分析步骤2.1试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25ml，摇匀后，超声提取20分钟，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴中挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20ml苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25ml。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定表标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮的含量。2.2芦丁标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。求回归方程，计算试样中总黄酮的含量。3计算和结果表示 X= 式中： X试样中总黄酮的含量，㎎/100gA由标准曲线算得被测液中黄酮量，ug;M试样质量，g；V1测定用试样体积，ml；V2试样定容总体积，ml。计算结果保留二位有效数字。方法二罗布麻提取物中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量测定[4]1、方法提要采用HPLC法同时测定含罗布麻提取物中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量。样品以甲醇溶解后，过滤进色谱分析。色谱柱为ODS-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-甲醇(10：1)和0．4％磷酸，梯度洗脱；二极管阵列检测器：检测波长360nm；分别以金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素对照品为外标，用标准曲线法进行定量．2、试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.1乙腈：色谱纯。2.2甲醇：色谱纯。2.3磷酸。2.4金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素标准品。2.4.1标准品储备液分别准确称取2.4对照品适量,用甲醇超声溶解后定容于10mL的容量瓶,并稀释至刻度，制得的金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素储备液分别约为1.00mg／mL。2.4.2标准品溶液应用液分别准确吸取对照品储备溶液0.1mL置于10mL的容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，以此类推，逐级稀释，临用现配。3、仪器及条件3.1回流装置。3.2水浴锅。3.3高效液相色谱仪：带紫外检测器或二级管阵列检测器。3.4色谱条件色谱柱：ODS-C18，(250mm×4.6mm,5μm)，柱温：35℃，流动相：A-0.4％磷酸，B-乙腈/甲醇(10:1)，流速1mL/min，梯度洗脱：0～15min，B由16％线性改变到23％；15-28min，B由23％线性改变到35.4％；至28min停止洗脱，回到初始比例平衡7min后进行下一个样品分析，检测波长为360nm。4、测定步骤4.1样品处理精密称取样品0.2000g或相当，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解后超声30min处理，再定容到100mL．过0.45μm的滤膜后供HPLC分析。4.2标准曲线分别准确吸取标准应用液（2.4.2）配成约为0.2μg/mL～5.0μg/mL的标准系列，按3.4色谱条件进行分析，外标法定量。4.3标准品和样品进样量均为20μL，测定峰面积，用外标法计算含量。5、方法学指标5.1线性范围分别制作3种物质的线性范围，在0.2μg/mL～5.0μg/mL范围内均成线性关系，以对照品的峰面积对相应的浓度进行线性回归，得回归方程分别是：金丝桃苷Y=26.48x－1.16(γ=0.9994)，异槲皮苷Y=22.48x－0.48(γ=0.9995)，槲皮素Y=28.31x－0.68(γ=0.9996)。5.2回收率与精密度同一样品溶液中，分别加入0.5ng三种对照品后混匀，平行6份，按照已建立的色谱条件测定，计算回收率。金丝桃苷的平均回收率90.94%(RSD=4.45%)、异槲皮苷的平均回收率99.96%(RSD=3.21%)、槲皮素的平均回收率85.57%(RSD=0.88%)。6、谱图图LBMY02标准溶液(a)和罗布麻样品提取液(b)的色谱图（1．金丝桃苷，2．异槲皮苷，3．槲皮素）7、方法讨论7.1波长的选择在200-400nm范围内对金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮素进行紫外吸收扫描，金丝桃苷最大吸波长分别是254和356nm，异槲皮苷最大吸波长是254和346nn3，槲皮素最大吸波长是254和368nm，兼顾3种物质的最大吸收，选择360nm为检测波长．图LBMY03金丝桃苷(a)，异槲皮苷(b)和槲皮素(C)的紫外吸收扫描图7.2流动相选择在相同的梯度洗脱程序下考察了3种不同的流动相体系，分别是①A－乙腈／甲醇(10：1)，B－0.4%磷酸，②A－乙腈／甲醇(10:1)，B－0.2％三氟乙酸，③A－乙腈，B－水．结果显示，其分离度分别达到1.64，1.62和1.58，均能达到基线分离．考虑到①的分离度最好，所以本文最终选择其作为流动相条件。（四）参考文献国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京,化学工业出版社,2005.凌关庭.保健食品原料手册(第二版).化学工业出版社,2006严秀珍．白麻和红麻化学成分的测定．中成药研究，1987(12)：27—29郁韵秋等.高效液相色谱法同时测定罗布麻浸膏粉中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量.复旦学报（自然科学版），2007，46（3）：418～422周裔彬，张伟等.罗布麻叶的研究进展.安徽农业大学学报，2008，35(4)：619—622CharlesJSih,etal.SeparationandsynthesisofpinoresinoldiglucosidemoidesoliveJAmChemSoc1976,98(17):5412虞颖映，邵健忠，王海明.罗布麻茶对心血管系统的生物学效应研究.同济大学学报(医学版),2006,27(4):40～44何念善.罗布麻复合茶治疗原发性高血压病56例临床观察[J].四川中医,2004,22(7)KagawaT，NakazawaY，eta1．StudiesonAntihy-pertensiveeffectofluobuma(ApocynumvenetumL．)leafExtract(2)．NaturalMedicines，2004，58(6)：299～302吴向起，杨新波，杨解人等.罗布麻提取物药理活性的研究进展.解放军药学学报，2009,25（5）:435～439KimD，YokozawaT，HattoriM，KadotaS，NambaT.Effectsofaqueousextractsofapocynumvenetumleavesonspontaneouslyhypertensive，renalhypertensiveandNaC1-fed-hypertensiverats．JEthnopharmacol，2000，72：53-59虞颖映,王海明.罗布麻茶的饮用安全性评价.同济大学学报(医学版),2006,27(5):24～26范维刚,解成喜,李锋等.罗布麻叶中总黄酮含量的测定[J].光谱实验室,2005,22(3)刘东平,周亚球,王先荣.罗布麻叶总黄酮的测定方法探讨[J].时珍国医国药,2007,18(3)范维刚，解成喜等.罗布麻叶中总黄酮含量的测定.光谱实验室,2005,22(3):465～467黄湘兰，曾凡.罗布麻叶化学成分测定.时珍国医国药,1998,9(6):539～540刘景国，刘文亮等.罗布麻降压片的薄层色谱鉴别.黑龙江医药,2008,21(1):28～29范维刚.反相高效液相色谱法测定罗布麻叶中槲皮素和山萘酚.分析试验室,2008,27(8):52～54韩利文,侯晋军,李云兰等.高效液相色谱法比较不同种属和产地罗布麻叶中金丝桃苷的含量[J].中国现代应用药学,2006,23(5)张语迟,刘春明.复合酶提取罗布麻叶的高效液相色谱—电喷雾质谱研究[A].第二届中草药提取关键技术与提取物产业应用研讨会论文集[C].2009.张语迟,刘春明.罗布白麻与罗布红麻的液相色谱-质谱联用分析[J].分析测试学报,2009,28(10)卫生部.保健食品检验与技术规范(2003版).中华人民共和国卫生部，北京，2003（四川检验检疫局胡江涛）决明子决明子，英文名：SemenCassiae

，为豆科植物决明（CassiaobtusifoliaL.）和小决明（CassiatoraL.）的干燥成熟种子。秋季采收成熟果实，晒干后入药。决明略呈菱方形或短圆柱形，两端平行倾斜，长3～7mm，宽2～4mm，表面绿棕色或暗棕色，平滑有光泽；小决明呈短圆柱形，较小，长3～5mm，宽2～3mm，表面棱线两侧各有一宽广的浅黄棕色带。本品粉末为黄棕色，气微，味微苦。决明主产于江苏、安徽、四川等地；小决明主产于广西、广东、云南等地，以野生或半野生为主，产量较小。中国卫生部2002年录入为可食用又可药用的两用原料[1][2]。决明子，别名草决明，马蹄决明。味甘、苦、咸、微寒。主要功效：清热明目，润肠通便[1]。主要功效成分有蒽醌、吡酮类、多糖、氨基酸和微量元素等。其药理作用：降血压作用、降血脂作用、增强免疫功能、对cAMP磷酸二酯酶具有抑制作用、泻下作用、抗菌作用等[3]。（一）主要功效成分介绍大、小决明子的种子中均含有蒽醌类化合物、吡咯酮类化合物、脂肪酸类、氨基酸和无机元素。其主要功效成分为蒽醌类化合物成分，含量约占1.1％～1.2%。游离蒽醌含量约为0.03％，结合蒽醌含量约为1.23％[4]。蒽醌苷元中主要含有大黄酚(0．28％)，生决明中含量较炒决明高[5]。目前，大多数学者认为，蒽醌糖苷是决明子发挥作用的主要成分。1．组成、结构与性质随着现代分析技术的快速发展，特别是红外光谱、核磁共振和质谱联用技术的出现并应用到未知物结构的解析，决明子中蒽醌类化学成分及其分子结构也被一一探明。目前，已知的决明子蒽醌类化合物主要有28种[6][7][8][9][10]，分别为大黄素(Emodin)、大黄酚(Chrysophand)、大黄酸(Rhein)、大黄素甲醚(Physeion)、芦荟大黄素(Ale-emodin)、去氧大黄酚(Chrysarobin)、大黄酚-9-蒽酮(Chrysophanicacid-9-anthrone)、钝叶素(Obtusifolin)、钝叶决明素(Obtusin)、甲基钝叶决明素(Chryso-obtusin)、橙钝叶决明素(Aurantio-obtusin)、奎司丁(Questin)、葡萄糖钝叶素(Gluco-obtusin)、葡萄糖钝叶决明素(Gluco-obtusin)、葡萄糖橙钝叶决明素(Gluco-aurantio-obttrsin)、1-去甲基橙钝叶决明(1-desmethvlaurantio-obtusin)、1-去甲基钝叶决明素(1-desmethvlobtusin)、1-去甲甲基钝叶决明素(1-desmethylehryso-obtusin)、大黄酚-10-10’-二蒽酮(Chrysophanol-10-10’bianthrone)、灰绿曲霉多羟基蒽酮8-O-D萄糖-吡喃糖甙(Eehinulpolydrieanthrone-8-O-D-glucopyrmloside)、有翅决明素1-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(Alaternin-1-O-β-D-glucpyranoside)、大黄素-6-葡糖甙(Emodin-6-gluoside)、大黄素蒽酮(Emodinanthrone)、甲基钝叶决明素-2-O-β-D-吡哺葡糖甙(Chryso-obtusin-2-O-β-D-glucopyranoside)、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(Chyscion-8-O-β-D-glueopyranoside)、1,3-二羟基-6-甲氧基-7-甲基蒽醌(1,3-dihydmxy-6-methoxy-7-methylanthraquinone)、1-羟基-3,7-二甲醛基蒽醌(1-hydroxy-3,7-diformylanthraquinone)、大黄酚-1-β-龙胆二糖甙(Chrysopahol-1-β-geniohioside)。蒽醌是三环类有机化合物，分子结果式见图JMZ01，是蒽醌类衍生物的母体；蒽醌类化合物的结构式如图JMZ02。图JMZ01蒽醌分子结构式图JMZ01蒽醌类化合物分子结构蒽醌 蒽酚 蒽酮图JMZ03蒽醌、蒽酚与蒽酮转化示意图蒽醌类化合物包括蒽醌衍生物、蒽酚衍生物、蒽酮类衍生物。在一定条件下，这三类物质是可以相互转化的，蒽醌在酸性环境中被还原，可生成蒽酚及其互变异构体—蒽酮。植物体内的蒽醌类化合物可呈游离形式或糖苷形式。蒽醌苷中的糖多为葡萄糖，部分为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等。蒽酚（或蒽酮）的羟基衍生物常以游离状态或结合状态与相应的羟基蒽醌共存于植物中。蒽酚（或蒽酮）衍生物一般存在于新鲜植物中。新鲜决明子经两年以上贮存则检测不到蒽酚。如果蒽酚衍生物的中位羟基与糖缩合成苷，则性质比较稳定，只有经过水解除去糖才能易于被氧化转变成蒽醌衍生物。2．生物学功能现代药理研究表明，决明子具有降血脂、降血压、抑菌、明目、增强免疫、利尿、抗氧化、抗衰老、抑制血小板凝集、缓泻和润肠通便功能等活性，其中主要成分－蒽醌类化合物，对高血压、高血脂等心血管疾病均有较好疗效，但长期服用对人体有害。决明子提取物对动物均有一定的降压作用，乙醇提取物对试验用自发遗传性高血压大鼠血压有明显降低作用，给药后收缩压、舒张压明显降低(P<0.01)，而且对呼吸、心率无影响。其脂溶性部分在10mg/kg时呈明显降压作用(p<0.05)作用的幅度和时间均比利血平更为显著[11]。周然等[12]对17例高血压病患者服用决明子茶(用开水浸泡决明子当茶饮)，2-3袋/d，45d为1疗程。结果发现收缩压和舒张压有明显的降低，根据对高血压治疗的疗效标准判断，显效6例，有效6例，无效5例。崔斌等人[13]对决明子茶剂治疗原发性高血压26例临床观察，降压效果明显。3．安全性（毒理）决明子提取物经小鼠LD50为36.35±2.38g/kg(为水煎剂小鼠腹注)。乙醇提取液小鼠90d亚慢性毒性试验的最小毒副作用剂量为5.0g/kg，折合人体为3g/d。毒理学试验表明本品不宜长期服用[2]。周宇红等[14],高芃等[15]用决明子乙醇提取物对健康Wistar大鼠喂饲13周，解剖观察脏器变化，喂饲决明子各组均出现肾脏肿大，色泽灰黑，肠系膜淋巴结肿大，呈灰白椭圆形结节状突起，结肠肿胀，浆膜充血，肾小管上皮细胞内可见棕褐色颗粒样物质沉积，黑色素染色阳性，动物睾丸曲细精管萎缩，无生精细胞等变化，而对照组无上述病理改变。认为决明子长期服用，可引起肾、结肠、直肠、肠系膜淋巴结、睾丸等靶器官病理改变，提示决明子不宜长期大量服用。（二）功效成分的检测