《遗传标记》教学课件

第二章遗传标记第二章遗传标记1本章主要内容形态标记细胞学标记生化标记分子标记本章主要内容形态标记2遗传标记的类型遗传标记〔geneticmarker〕:指可追踪染色体、染色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。它具有两个根本特征，即可遗传性和可识别性；因此生物的任何有差异表型的基因突变型均可作为遗传标记。遗传标记的类型遗传标记〔geneticmarker〕:指可3遗传标记的类型形态学标记〔morphologicalmarker〕细胞学标记(cytologicalmarker)生化标记(biochemicalmarker)分子标记(molecularmarker)：或DNA标记。遗传标记的类型形态学标记〔morphologicalmar4即植物的外部形态特征。主要包括肉眼可见的外部特征，如：矮秆、紫鞘、卷叶等；也包括色素、生理特性、生殖特性、抗病虫性等有关的一些特性。优点：形态标记简单直观、经济方便；缺点:(1)数量在多数植物中是很有限的;(2)且多态性较差，表现易受环境影响，(3)有一些标记与不良性状连锁。(4)形态标记的获得需要通过诱变、别离纯合的过程，周期较长。因此形态标记在作物遗传育种中的作用是有限的。一、形态标记即植物的外部形态特征。主要包括肉眼可见的外部特征，如：矮秆、5〔一〕、形态标记的应用张庆勤等在对燕麦与节节麦、黑小麦的杂交的研究中，根据杂种后代小穗着生的部位，芒的生长位置，从形态上验证了在杂种F1植株中存在有燕麦的特征性状。田崎通过对来自不同地方的120个小豆品种进展的调查发现，根据分枝性、主茎的坚实度及柔软度、主茎基部粗度、最长分枝的长度等4项指标，可以把小豆株型按照其指数分成A、B、C、D这4个根本类型。任刚通过对黄瓜属种间杂交新种的形态学研究说明，杂交新种自交一代各个单株除了在节间长和侧枝数上有差异之外，其他方面均没有差异。〔一〕、形态标记的应用张庆勤等在对燕麦与节节麦、黑小麦的杂交6〔二〕应用实例1〕具有代表性的三种锦鸡儿的形态学观察

小叶、中间、树锦鸡儿植物的照片〔二〕应用实例1〕具有代表性的三种锦鸡儿的形态学观察小叶、中72〕不同棉花材料的形态学观察亚洲棉〔A2〕2.比克氏棉〔G1〕3.亚洲棉×比克氏棉双二倍体〔A2A2G1G1〕4.陆地棉〔[AADD]1〕5.海岛棉〔[AADD]2〕6.〔[A2×G1]〕×[AD]1杂种F17.〔[A2×G1]〕×[AD]2杂种F12〕不同棉花材料的形态学观察亚洲棉〔A2〕2.比克氏棉〔8〔亚比棉×陆地棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较〔亚比棉×陆地棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较9〔亚比棉×海岛棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较〔亚比棉×海岛棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较10《遗传标记》教学课件11即植物细胞染色体的变异：包括染色体核型〔染色体数目、构造、随体有无、着丝粒位置等〕和带型〔C带、N带、G带等〕的变化。与形态标记相比，细胞学标记的优点是能进展一些重要基因的染色体或染色体区域定位。但细胞学标记材料需要花费较大的人力和较长时间来培育，难度很大；同时某些物种对染色体变异反响敏感；还有些变异难以用细胞学方法进展检测。因此到目前为止，真正应用于作物遗传育种研究中的细胞学标记还很少。二细胞学标记即植物细胞染色体的变异：包括染色体核型〔12〔一〕核型和核型分析定义1核型----一般是指体细胞染色体在光学显微镜下所有可以测定的表型特征的总称。主要包括染色体的数目与形态构造特征两大方面的内容。染色体的数目包括染色体的基数、多倍体、非整倍体、B-染色体(B染色体)超数染色体,是存在于许多有机体中的额外染色体及染色体断片)。染色体的形态主要包括染色体的绝对大小和相对大小、着丝点和次缢痕以及随体的数目和位置等特征。〔一〕核型和核型分析定义132.核型分析：核型分析就是指对核型的各种特征进展定量和定性的表述。核型分析是分析染色体数目和构造变异的根本手段之一。它在杂种细胞的染色体研究和基因定位，单个染色体的识别等方面具有重要意义。2.核型分析：核型分析就是指对核型的各种特征进展定量和14什么是染色体分带技术特殊的染料、染色方法，使同一染色体的不同区段呈现不同的染色效果－带型，各种分带技术C、G、Q、R、N的出现，为染色体的准确鉴别提供了一条崭新的途径。什么是染色体分带技术15人类染色体核型分析〔Q带〕人类染色体核型分析〔Q带〕16女男女男17Eg蚕豆的核型分析2n=12，染色体长度：大小臂比：大小带型：同源＋编号Eg蚕豆的核型分析2n=12，染色体长度：大小18(二〕核型分析的应用1.核型分析应用于植物的分类研究2.核型分析应用于探讨物种的起源3.核型分析应用于外源染色体的检测与验证杂种的真实性(二〕核型分析的应用1.核型分析应用于植物的分类研究19(三)核型分析内容核型分析主要包括两个方面的内容:一个是染色体的数目，另一个是染色体的形态。(三)核型分析内容核型分析主要包括两个方面的内容:20〔四〕核型分析的方法1.取材观察染色体的适宜的材料的选取：但凡能进展细胞分裂的植物组织和单个细胞都可以作为观察染色体的材料，比方像一些植物的顶端分生组织〔根尖和茎尖〕、居间分生组织、愈伤组织和胚乳、大小孢子母细胞的减数分裂时期等等。但是并不是随时取来的材料都可以用。各类材料有自己的特点及取材操作的本卷须知。可以采用种子萌发取根，鳞茎水培取根，扦插取根和植株上直接取根等等。一般常用根尖作为材料。对于那些难萌发的种子或有植株无种子的材料可以用茎尖进展染色体压片.〔四〕核型分析的方法1.取材212.预处理进展预处理的目的主要是〔1〕防止纺锤体的形成，因为没有了纺锤体的牵引，就会使的细胞分裂被迫处于中期阶段，从而能够获得很多的中期分裂相。〔2〕材料经过预处理后，就会引起染色体的收缩，使得染色体能够缩短，这样有利于通过压片，使得染色体很好的分散开。2.预处理进展预处理的目的主要是〔1〕防止纺锤体221〕固定目的：主要是利用化学药物能迅速杀死细胞，从而使得蛋白质变性和沉淀，并能尽量保持各种构造的原有状态。2〕固定液：主要使用的固定液是卡诺固定液〔1：3的冰乙酸和无水乙醇〕3.固定3.固定233〕固定所需要的时间：2—24小时，小材料，固定的时间应短一些，而对于大一些的材料，那么固定的时间可以长一些。4〕固定所需要的温度；一般固定是在低温冰箱里，但这并不是必需的条件。5〕保存；经过固定后的材料可以保存在70%的酒精中待用。3〕固定所需要的时间：2—24小时，小材料，固定的时间应短一244.解离1〕解离的目的：为了方便压片，对于根尖和茎尖等体细胞组织，需经过某些处理，以除去细胞之间的果胶层并能使细胞壁软化。2〕解离方法；〔1〕酸解离：固定后的材料经50%酒精洗涤后，再转入蒸馏水中清洗干净后，转入1N盐酸于60℃恒温处理5-20min。当然，不同的作物需要解离的时间也会有所不同。〔2〕酶解离：一般用果胶酶、纤维素酶来进展。像做棉花的染色体，在用盐酸解离之前先用2%的纤维素酶与果胶酶进展解离，效果比较好4.解离1〕解离的目的：为了方便压片，对于根尖和茎尖等体细胞255.染色

1〕常见的染色液(1)卡宝品红(2)洋红(3)地衣红(4)树脂蓝(5)甲苯胺蓝5.染色1〕常见的染色液266.压片操作取出根尖，将根尖放在载玻片上，用镊子或刀片切除根冠和伸长区局部，留2——3毫米的分生区，加约1/3的染色液，再用镊子将材料分割成假设干小块加盖片，在盖片的一角压一硬纸，并用左手食指压紧以免盖片错动，右手拿解剖针用针尖轻轻敲击盖片使材料均匀散开。6.压片操作取出根尖，将根尖放在载玻片上，277.镜检

在显微镜下观察染色体，可以从低倍到高倍，选染色清晰而又分散很好的中期分裂相，然后可以制作永久封片。7.镜检在显微镜下观察染色体，可以从低倍到高倍，选288.永久封片

做出的染色体片子，可以把其放在培养皿里临时保存。具体的做法是在培养皿里放一张滤纸，把滤纸浸湿，然后把做好的染色体制片放进去，这样可以临时保存好所做出的染色体片子，但是这种方法只能是作为临时保存用，因为随着时间的延长，染色体也会由于逐渐的缩水而收缩，最后就不能很清晰的看见染色体。8.永久封片做出的染色体片子，可以把其放在培养皿里临29为了把好的染色体制片长久的保存下来，可以制作永久封片。作永久封片可以用冰冻脱片封片法，具体的做法如下：先把制好的染色体制片用冰冻制冷器进展冷冻，待冷冻后，用刀片把盖波片掀开，这个过程应该在没有解冻之前完成。然后分别把盖波片和载玻片放在37℃的烘箱中，将其烘干，等到烘干后，再在二甲苯中浸泡10-20min，最后用中性树胶进展封片。在这应该注意的一点是进展封片的时候应该把载玻片和盖波片分别进展封。当然，还有其他的方法也能进展制作永久制片。永久封片的制作

为了把好的染色体制片长久的保存下来，可以制作永久封片30亚比棉的染色体形态图、核型图及核型模式图

亚比棉的染色体形态图、核型图及核型模式图31图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×陆地棉杂种F1的染色体形态图、核型图及核型模式图402423571012468911121314151617181920212223242526图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×陆地棉杂种F1的染色32图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×海岛棉杂种F1的染色体形态图、核型图及核型模式图402423571012468911121314151617181920212223242526图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×海岛棉杂种F1的染33生化标记就是利用电泳技术对蛋白质、酶等生物大分子进展鉴定。主要包括同工酶和等位酶标记。同工酶是：指构造不同、功能相似的酶，也即具有同一底物专一性的不同分子形式的酶。属于一个以上基因座位编码的酶的不同形式；等位酶是指由一个基因座位的不同等位基因编码的酶的不同分子形式。分析方法是从植物组织的蛋白粗提物中通过电泳和组织化学染色法将酶的多种形式转变成肉眼可辩的酶谱带型。

三

生化标记生化标记就是利用电泳技术对蛋白质、酶等生物大分子进展鉴定341,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期),2,4,6,8,10分别为保持系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期)。图1棉花晋A及其保持系酯酶酶谱及模式图。三

生化标记实例1,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶351,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期),2,4,6,8,10分别为保持系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期)。图2

棉花晋A及其保持系过氧化物酶谱及模式图。1,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶36生化标记具两个方面的优点：一是表现近中性，对植物经济性状一般没有大的不良影响；二是直接反映了基因产物差异，受环境影响较小。但目前可使用的生化标记数量还相当有限，且有些酶的染色方法和电泳技术有一定难度，因此其实际应用受到一定限制。生化标记具两个方面的优点：一是表现近中性，37(一)生化标记的应用1.生化标记在品种纯度和真实性鉴定上的应用2.生化标记在品种的亲缘关系和分类研究上的应用3.生化标记在杂种优势的预测上的应用4.生化标记在抗性鉴定上的应用5.生化标记在品种鉴定上的应用(一)生化标记的应用1.生化标记在品种纯度和真实性鉴定上的应38四

分子标记四分子标记39〔一〕分子标记的定义：

分子标记：在生物系统和进化研究中，每个能反响遗传变异的，能提供系统学信息的多态位点称为一个分子标记，在遗传育种研究中每个与感兴趣的性状或目的基因连锁的多态性位点也称为一个分子标记。〔一〕分子标记的定义：分子标记：在生物系统和进40(二)目前的分子标记类型第一类是以分子杂交为核心的分子标记技术，包括RFLP、DNA指纹技术〔DNAFingerprinting〕等；第二类是以PCR为核心的分子标记技术，包括RAPD、简单序列重复标记SSR、序标位STS、序列特征化扩增区域SCAR等；第三类是一些新型的分子标记，如：SNP标记、表达序列标签EST标记等。(二)目前的分子标记类型第一类是以分子杂交为核心的分子标记技41〔三〕分子标记的特点1.直接以DNA的形式表现，表现稳定2.数量多3.多态性高4.表现为中性，不影响目标性状的表达；5.许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。6.本钱不太高〔三〕分子标记的特点1.直接以DNA的形式表现，表现稳42(四)分子标记技术的定义1.分子标记技术：能提供分子标记的分子生物学技术称为分子标记技术。(四)分子标记技术的定义1.分子标记技术：能提供分432.分子标记技术的优点1)分子标记技术选用的分子信息比较稳定采用常规的形态标记或细胞学标记进展分类时，一些表型特征是不稳定的，很容易受环境因素的影响。有些物种在自然选择的作用下，为适应当地的生态环境，某些表型特征会发生变化，形成适应当地环境的特殊生态类群，相应的，野生物种或栽培品种会获得相异的分子信息，但其持有的分子信息是可以稳定遗传的，不会因环境或栽培条件的改变而发生变化。2.分子标记技术的优点1)分子标记技术选用的分子信44分子标记技术可提供植物有关的任何基因〔或DNA片段〕或它们编码的蛋白质的直接或间接的构造证据，并可以应用到任何大小、任何地区的生物。植物基因组所包含的信息量是巨大的，就好似百科全书一样，是个巨大的信息库，它不仅与植物的生长发育密切相关，而且在它的核酸序列中记录了物种的起源和进化。在许多物种内，仅种内的遗传变异就很惊人，种间的遗传变异就更为庞大。2)分子标记技术所提供的遗传信息量是无限的分子标记技术可提供植物有关的任何基因〔或DNA片45相似性(similarity)和同源性(homology)是两个完全不同的概念。相似性是指序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间一样DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的上下。当相似程度高于50%时，比较容易推测检测序列和目标序列可能是同源序列；而当相似性程度低于20%时，就难以确定或者根本无法确定其是否具有同源性。总之，不能把相似性和同源性混为一谈。所谓“具有50%同源性〞，或“这些序列高度同源〞等说法，都是不确切的，应该防止使用。3)分子标记技术能很好的区分同源性和相似性相似性(similarity)和同源性(h46传统主要根据形态性状的经典遗传学的分类方法有明显的局限性，在自然选择和人工选择的作用下，有时毫不相干的物种由于长期生活在共同的环境中会形成相似的形态性状，有时没有亲缘关系的物种由于长期生活在共同的环境中，为适应环境的需要，会生成一些相似的形态性状，这种相似性给分类造成混乱。传统的遗传学分类方法无能为力，但分子标记技术能到达很好的别离目的。在分子生物学技术中可以用DNA杂交的方法来区分同源性和相似性。例如；两个DNA样品用RAPD-PCR得到的一样分子量的多态性片段可能是同源的但也不一定是同源的，将该片段切下来作为探针与原来的RAPD带谱进展杂交，有杂交信号的那么是同源的性状，无杂交信号的那么是相似性状。传统主要根据形态性状的经典遗传学的分类方474)分子标记能提供物种间比较共同的尺度分子标记技术中以物种的DNA作为研究的最初样本，它具有任何生物有机体包括动物、植物和微生物所具有的分子属性，因此，分子标记技术所获得的分子数据，可以作为共同尺度来直接比较任何有机体任何分类层次之间相对水平的遗传变异。4)分子标记能提供物种间比较共同的尺度分子标记技485)分子标记技术翻开了遗传学研究的大门在还没有分子技术之前，经典遗传学的研究范围是比较有限的，很多的研究主要局限于几个模式类群，比方说像孟德尔的豌豆、大肠杆菌及噬菌体、玉米、果蝇和家鼠等等，并且大多数还是在可控制的实验体搜集下进展的杂交试验。而且大多数是从一些的遗传模式来推测另些形态和生理学性状的遗传根底，这样，不可能获得基因组内各遗传组分间的多样性。与当今的科学家已经越来越多地将分子标记技术已用于各个方面。5)分子标记技术翻开了遗传学研究的大门在还49分子标记的重要研究领域1遗传图谱构建与基因定位2种质资源的遗传多样性分析3数量性状的分子标记辅助选择4基于图谱图位克隆分子标记的重要研究领域1遗传图谱构建与基因定位50本章知识点1、遗传标记2、形态标记及其优缺点3、细胞标记及其优缺点4、生化标记及其优缺点5、分子标记及其特点6、分子标记技术及其优点。本章知识点1、遗传标记51第二章遗传标记第二章遗传标记52本章主要内容形态标记细胞学标记生化标记分子标记本章主要内容形态标记53遗传标记的类型遗传标记〔geneticmarker〕:指可追踪染色体、染色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。它具有两个根本特征，即可遗传性和可识别性；因此生物的任何有差异表型的基因突变型均可作为遗传标记。遗传标记的类型遗传标记〔geneticmarker〕:指可54遗传标记的类型形态学标记〔morphologicalmarker〕细胞学标记(cytologicalmarker)生化标记(biochemicalmarker)分子标记(molecularmarker)：或DNA标记。遗传标记的类型形态学标记〔morphologicalmar55即植物的外部形态特征。主要包括肉眼可见的外部特征，如：矮秆、紫鞘、卷叶等；也包括色素、生理特性、生殖特性、抗病虫性等有关的一些特性。优点：形态标记简单直观、经济方便；缺点:(1)数量在多数植物中是很有限的;(2)且多态性较差，表现易受环境影响，(3)有一些标记与不良性状连锁。(4)形态标记的获得需要通过诱变、别离纯合的过程，周期较长。因此形态标记在作物遗传育种中的作用是有限的。一、形态标记即植物的外部形态特征。主要包括肉眼可见的外部特征，如：矮秆、56〔一〕、形态标记的应用张庆勤等在对燕麦与节节麦、黑小麦的杂交的研究中，根据杂种后代小穗着生的部位，芒的生长位置，从形态上验证了在杂种F1植株中存在有燕麦的特征性状。田崎通过对来自不同地方的120个小豆品种进展的调查发现，根据分枝性、主茎的坚实度及柔软度、主茎基部粗度、最长分枝的长度等4项指标，可以把小豆株型按照其指数分成A、B、C、D这4个根本类型。任刚通过对黄瓜属种间杂交新种的形态学研究说明，杂交新种自交一代各个单株除了在节间长和侧枝数上有差异之外，其他方面均没有差异。〔一〕、形态标记的应用张庆勤等在对燕麦与节节麦、黑小麦的杂交57〔二〕应用实例1〕具有代表性的三种锦鸡儿的形态学观察

小叶、中间、树锦鸡儿植物的照片〔二〕应用实例1〕具有代表性的三种锦鸡儿的形态学观察小叶、中582〕不同棉花材料的形态学观察亚洲棉〔A2〕2.比克氏棉〔G1〕3.亚洲棉×比克氏棉双二倍体〔A2A2G1G1〕4.陆地棉〔[AADD]1〕5.海岛棉〔[AADD]2〕6.〔[A2×G1]〕×[AD]1杂种F17.〔[A2×G1]〕×[AD]2杂种F12〕不同棉花材料的形态学观察亚洲棉〔A2〕2.比克氏棉〔59〔亚比棉×陆地棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较〔亚比棉×陆地棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较60〔亚比棉×海岛棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较〔亚比棉×海岛棉〕杂种F1与其亲本的形态特征比较61《遗传标记》教学课件62即植物细胞染色体的变异：包括染色体核型〔染色体数目、构造、随体有无、着丝粒位置等〕和带型〔C带、N带、G带等〕的变化。与形态标记相比，细胞学标记的优点是能进展一些重要基因的染色体或染色体区域定位。但细胞学标记材料需要花费较大的人力和较长时间来培育，难度很大；同时某些物种对染色体变异反响敏感；还有些变异难以用细胞学方法进展检测。因此到目前为止，真正应用于作物遗传育种研究中的细胞学标记还很少。二细胞学标记即植物细胞染色体的变异：包括染色体核型〔63〔一〕核型和核型分析定义1核型----一般是指体细胞染色体在光学显微镜下所有可以测定的表型特征的总称。主要包括染色体的数目与形态构造特征两大方面的内容。染色体的数目包括染色体的基数、多倍体、非整倍体、B-染色体(B染色体)超数染色体,是存在于许多有机体中的额外染色体及染色体断片)。染色体的形态主要包括染色体的绝对大小和相对大小、着丝点和次缢痕以及随体的数目和位置等特征。〔一〕核型和核型分析定义642.核型分析：核型分析就是指对核型的各种特征进展定量和定性的表述。核型分析是分析染色体数目和构造变异的根本手段之一。它在杂种细胞的染色体研究和基因定位，单个染色体的识别等方面具有重要意义。2.核型分析：核型分析就是指对核型的各种特征进展定量和65什么是染色体分带技术特殊的染料、染色方法，使同一染色体的不同区段呈现不同的染色效果－带型，各种分带技术C、G、Q、R、N的出现，为染色体的准确鉴别提供了一条崭新的途径。什么是染色体分带技术66人类染色体核型分析〔Q带〕人类染色体核型分析〔Q带〕67女男女男68Eg蚕豆的核型分析2n=12，染色体长度：大小臂比：大小带型：同源＋编号Eg蚕豆的核型分析2n=12，染色体长度：大小69(二〕核型分析的应用1.核型分析应用于植物的分类研究2.核型分析应用于探讨物种的起源3.核型分析应用于外源染色体的检测与验证杂种的真实性(二〕核型分析的应用1.核型分析应用于植物的分类研究70(三)核型分析内容核型分析主要包括两个方面的内容:一个是染色体的数目，另一个是染色体的形态。(三)核型分析内容核型分析主要包括两个方面的内容:71〔四〕核型分析的方法1.取材观察染色体的适宜的材料的选取：但凡能进展细胞分裂的植物组织和单个细胞都可以作为观察染色体的材料，比方像一些植物的顶端分生组织〔根尖和茎尖〕、居间分生组织、愈伤组织和胚乳、大小孢子母细胞的减数分裂时期等等。但是并不是随时取来的材料都可以用。各类材料有自己的特点及取材操作的本卷须知。可以采用种子萌发取根，鳞茎水培取根，扦插取根和植株上直接取根等等。一般常用根尖作为材料。对于那些难萌发的种子或有植株无种子的材料可以用茎尖进展染色体压片.〔四〕核型分析的方法1.取材722.预处理进展预处理的目的主要是〔1〕防止纺锤体的形成，因为没有了纺锤体的牵引，就会使的细胞分裂被迫处于中期阶段，从而能够获得很多的中期分裂相。〔2〕材料经过预处理后，就会引起染色体的收缩，使得染色体能够缩短，这样有利于通过压片，使得染色体很好的分散开。2.预处理进展预处理的目的主要是〔1〕防止纺锤体731〕固定目的：主要是利用化学药物能迅速杀死细胞，从而使得蛋白质变性和沉淀，并能尽量保持各种构造的原有状态。2〕固定液：主要使用的固定液是卡诺固定液〔1：3的冰乙酸和无水乙醇〕3.固定3.固定743〕固定所需要的时间：2—24小时，小材料，固定的时间应短一些，而对于大一些的材料，那么固定的时间可以长一些。4〕固定所需要的温度；一般固定是在低温冰箱里，但这并不是必需的条件。5〕保存；经过固定后的材料可以保存在70%的酒精中待用。3〕固定所需要的时间：2—24小时，小材料，固定的时间应短一754.解离1〕解离的目的：为了方便压片，对于根尖和茎尖等体细胞组织，需经过某些处理，以除去细胞之间的果胶层并能使细胞壁软化。2〕解离方法；〔1〕酸解离：固定后的材料经50%酒精洗涤后，再转入蒸馏水中清洗干净后，转入1N盐酸于60℃恒温处理5-20min。当然，不同的作物需要解离的时间也会有所不同。〔2〕酶解离：一般用果胶酶、纤维素酶来进展。像做棉花的染色体，在用盐酸解离之前先用2%的纤维素酶与果胶酶进展解离，效果比较好4.解离1〕解离的目的：为了方便压片，对于根尖和茎尖等体细胞765.染色

1〕常见的染色液(1)卡宝品红(2)洋红(3)地衣红(4)树脂蓝(5)甲苯胺蓝5.染色1〕常见的染色液776.压片操作取出根尖，将根尖放在载玻片上，用镊子或刀片切除根冠和伸长区局部，留2——3毫米的分生区，加约1/3的染色液，再用镊子将材料分割成假设干小块加盖片，在盖片的一角压一硬纸，并用左手食指压紧以免盖片错动，右手拿解剖针用针尖轻轻敲击盖片使材料均匀散开。6.压片操作取出根尖，将根尖放在载玻片上，787.镜检

在显微镜下观察染色体，可以从低倍到高倍，选染色清晰而又分散很好的中期分裂相，然后可以制作永久封片。7.镜检在显微镜下观察染色体，可以从低倍到高倍，选798.永久封片

做出的染色体片子，可以把其放在培养皿里临时保存。具体的做法是在培养皿里放一张滤纸，把滤纸浸湿，然后把做好的染色体制片放进去，这样可以临时保存好所做出的染色体片子，但是这种方法只能是作为临时保存用，因为随着时间的延长，染色体也会由于逐渐的缩水而收缩，最后就不能很清晰的看见染色体。8.永久封片做出的染色体片子，可以把其放在培养皿里临80为了把好的染色体制片长久的保存下来，可以制作永久封片。作永久封片可以用冰冻脱片封片法，具体的做法如下：先把制好的染色体制片用冰冻制冷器进展冷冻，待冷冻后，用刀片把盖波片掀开，这个过程应该在没有解冻之前完成。然后分别把盖波片和载玻片放在37℃的烘箱中，将其烘干，等到烘干后，再在二甲苯中浸泡10-20min，最后用中性树胶进展封片。在这应该注意的一点是进展封片的时候应该把载玻片和盖波片分别进展封。当然，还有其他的方法也能进展制作永久制片。永久封片的制作

为了把好的染色体制片长久的保存下来，可以制作永久封片81亚比棉的染色体形态图、核型图及核型模式图

亚比棉的染色体形态图、核型图及核型模式图82图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×陆地棉杂种F1的染色体形态图、核型图及核型模式图402423571012468911121314151617181920212223242526图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×陆地棉杂种F1的染色83图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×海岛棉杂种F1的染色体形态图、核型图及核型模式图402423571012468911121314151617181920212223242526图2-4三种杂种〔亚洲棉×比克氏棉〕×海岛棉杂种F1的染84生化标记就是利用电泳技术对蛋白质、酶等生物大分子进展鉴定。主要包括同工酶和等位酶标记。同工酶是：指构造不同、功能相似的酶，也即具有同一底物专一性的不同分子形式的酶。属于一个以上基因座位编码的酶的不同形式；等位酶是指由一个基因座位的不同等位基因编码的酶的不同分子形式。分析方法是从植物组织的蛋白粗提物中通过电泳和组织化学染色法将酶的多种形式转变成肉眼可辩的酶谱带型。

三

生化标记生化标记就是利用电泳技术对蛋白质、酶等生物大分子进展鉴定851,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期),2,4,6,8,10分别为保持系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期)。图1棉花晋A及其保持系酯酶酶谱及模式图。三

生化标记实例1,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶861,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期),2,4,6,8,10分别为保持系的叶片、苞叶、花蕾(造孢细胞增殖时期、小孢子母细胞减数分裂时期、小孢子形成时期)。图2

棉花晋A及其保持系过氧化物酶谱及模式图。1,3,5,7,9分别为晋A不育系的叶片、苞叶87生化标记具两个方面的优点：一是表现近中性，对植物经济性状一般没有大的不良影响；二是直接反映了基因产物差异，受环境影响较小。但目前可使用的生化标记数量还相当有限，且有些酶的染色方法和电泳技术有一定难度，因此其实际应用受到一定限制。生化标记具两个方面的优点：一是表现近中性，88(一)生化标记的应用1.生化标记在品种纯度和真实性鉴定上的应用2.生化标记在品种的亲缘关系和分类研究上的应用3.生化标记在杂种优势的预测上的应用4.生化标记在抗性鉴定上的应用5.生化标记在品种鉴定上的应用(一)生化标记的应用1.生化标记在品种纯度和真实性鉴定上的应89四

分子标记四分子标记90〔一〕分子标记的定义：

分子标记：在生物系统和进化研究中，每个能反响遗传变异的，能提供系统学信息的多态位点称为一个分子标记，在遗传育种研究中每个与感兴趣的性状或目的基因连锁的多态性位点也称为一个分子标记。〔一〕分子标记的定义：分子标记：在生物系统和进91(二)目前的分子标记类型第一类是以分子杂交为核心的分子标记技术，包括RFLP、DNA指纹技术〔DNAFingerprinting〕等；第二类是以PCR为核心的分子标记技术，包括RAPD、简单序列重复标记SSR、序标位STS、序列特征化扩增区域SCAR等；第三类是一些新型的分子标记，如：SNP标记、表达序列标签EST标记等。(二)目前的分子标记类型第一类是以分子杂交为核心的分子标记技92〔三〕分子标记的特点1.直接以DNA的形式表现，表现稳定2.数量多3.多态性高4.表现为中性，不影响目标性状的表达；5.许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。6.本钱不太高〔三〕分子标记的特点1.直接以DNA的形式表现，表现稳93(四)分子标记技术的定义1.分子标记技术：能提供分子标记的分子生物学技术称为分子标记技术。(四)分子标记技术的定义1.分子标记技术：能提供分942.分子标记技术的优点1)分子标记技术选用的分子信息比较稳定采用常规的形态标记或细胞学标记进展分类时，一些表型特征是不稳定的，很容易受环境因素的影响。有些物种在自然选择的作用下，为适应当地的生态环境，某些表型特征会发生变化，形成适应当地环境的特殊生态类群，相应的，野生物种或栽培品种会获得相异的分子信息，但其持有的分子信息是可以稳定