常规菌检测标准课件

常规菌检测标准检测方法概述卫生指标菌的检测

细菌总数、大肠菌群、肠杆菌科病原菌的检测

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、环境李斯特菌属微生物检测标准国家标准GB4789行业标准SNFDABAMAOACAFNORISO要点细菌总数的含义

本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数

样品均液的制备固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品,放入装有225mL稀释液的灭菌均质杯内或均质袋中,于8000r/min均质1～2min或同样效果的拍打频率,制成1:10的样品匀液；要点样品均液的制备

干燥或干粉食品

以无菌操作取25g样品,放入装有225mL稀释液和适量玻璃珠的500mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1:10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。

液体食品

用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL稀释液的500mL稀释瓶中,按上述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释液中吹洗吸管。大肠菌群检测的GB法

361℃242h检样10倍梯度连续稀释选3个适宜的稀释度，接种至乳糖胆盐发酵管不产气大肠菌群阴性产气伊红美蓝(EMB)平板分离

361℃18-24h乳糖发酵产气不产气大肠菌群阳性大肠菌群阴性

361℃24h大肠杆菌检测的GB法检样测大肠菌群MPN25g＋营养肉汤225ml污染严重的检样匀液乳糖发酵或不发酵的菌落3个~5个，氧化酶阴性，革兰氏阴性杆菌乳糖发酵阳性的发酵管麦康凯EMB肠道菌增菌肉汤非左述的各种反应结果TSI、靛基质、pH7.2尿素、KCN、赖氨酸、动力TSI底层+、H2S-、KCN-、尿素-大肠杆菌非大肠杆菌(36±1)℃6h(36±1)℃18h~24h第一步:推测实验(大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌)第二步:确证实验LST检样LST肉汤(月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤)

37℃482h

不产气(阴性)产气2)确证实验:粪大肠菌群和大肠杆菌1)确证实验:大肠菌群第三步:确认E.coli37℃48h

EC肉汤(阳性)37℃24+2h

EMB平板挑取可疑菌落于PCA平板37℃18-24h

37℃18-24h

LST肉汤IMViC(吲哚,甲基红,3羟基-2-丁酮和柠檬酸)革兰氏染色产酸产气++--/-+--无芽胞G-杆菌按EC肉汤管数,查MPN表,报告大肠杆菌日本大肠杆菌的检验方法(MPN法)检样EC肉汤发酵管

44.5C24h

不产气(阴性)产气在EMB平板上划线分离

35C24h

乳糖(LB)发酵管NA(营养琼脂）

35℃24-48h

革兰氏染色大肠菌群固体平板计数法VRB(VioletRedBile)FDABAM,SNDeso(DesoxycholateAgar)Japan3MPetrifilmTM选适宜稀释度的样液，滴加1ml到平皿将冷至46C的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)10-15ml倾注于每个平板，并混匀待琼脂凝固后，再加3-4mlVBRA覆盖平板表层翻转平板，置于351C培养18-24h从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，接种BGLB肉汤管，361C培养24-48h，观察产气情况BGLB肉汤管产气，革兰氏染色为阴性杆菌的为大肠菌群阳性确认实验大肠菌群检验的VRB固体平板法选适宜稀释度的样液，滴加1ml到平皿倾注Deso培养基翻转平板，置于351C培养18-24h从Deso平板上挑取典型和可疑菌落，接种LB肉汤管，361C培养24-48h，观察产气情况LB肉汤管产气，革兰氏染色为阴性杆菌的为大肠菌群阳性确认实验大肠菌群检验的Deso固体平板法日本不同食品的大肠菌群检测Deso冰淇淋,发酵奶,乳酸菌饮料,黄油，好油,奶酪,浓缩乳清，冷冻食品

MPN(BGLB)除了Deso方法中的其它乳制品,肉,炸鱼片金黄色葡萄球菌检验的SN法

361℃20-24h

检样从有菌的管中接种1环到Baird-Parker平板上从BP平板上挑取典型菌落到肉汤培养基中选择3个连续稀释度接种于10%NaCl的TSB管中兔血浆凝固酶试验

361℃482h