病原性真菌检验 临床微生物学 第三军医大学2

厌氧性细菌及检验

临床微生物教研室

袁小澎一定义有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌1836年Pasteur提出临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染---------------------需要重视二分类

1有芽孢厌氧性细菌一个梭菌属包括83个种2无芽孢厌氧性细菌40多个菌属，300多个菌种和亚种三感染分布原因临床症状厌氧菌在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道一芽孢菌G+杆菌梭状芽孢杆菌属二无芽孢菌（一）G+的杆菌双歧杆菌（二）G-的杆菌类杆菌属（三）G+的球菌消化球菌属（四）G-的球菌韦荣氏菌属000+000+++±++++++++++++++++±0+±±±±++++致病的原因1组织缺氧或氧化还原电势降低穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿瘤压迫等等2机体免疫力低下临床的症状1感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感染的特征2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴性的3其它等等厌氧菌标本的采集和送检标本的采集和送检------------1标本决不能被正常菌群污染；2应尽量避免空气标本的采集标本来源收集的方法封闭性脓肿妇女生殖道下呼吸道分泌物胸腔窦道，子宫腔，深部创伤组织尿道针管抽取后穹隆穿刺抽取肺穿刺术胸腔穿刺术静脉注射的塑料导管穿入无菌外科切开上阴部膀胱穿刺标本本的的送送运运与与处处理理针筒筒送送运运法法无菌菌小小瓶瓶送送运运法法棉拭拭送送运运法法大量量标标本本送送运运法法组织织块块送送运运法法厌氧氧袋袋送送运运法法分离离和和鉴鉴定定检验验的的方方法法1直直接接镜镜检检一些些特特殊殊的的特特点点，，临临床床工工作作中中的的总总结结可对对初初步步判判断断及及临临床床应应用用做做早早一一步步的的指导导作作用用2分分离离培培养养1初初步步培培养养1））培培养养基基的的选选择择强化化血血琼琼脂脂平平板板卡那那万万古古霉霉素素冻冻溶溶血血琼琼脂脂平平板板七叶叶苷苷胆胆汁汁平平板板等等等等2））标标本本的的接接种种每份份标标本本应应接接种种3个个培培养养平平板板，，分分别别放放置置于于有有氧氧，，无无氧氧和和含含5%~10%的的CO2的的容容器器中中，，有有时时需需要要专专用用的的培培养养基基3））厌厌氧氧培培养养法法a厌厌氧氧罐罐培培养养法法b气气袋袋法法c气气体体喷喷射射法法d厌厌氧氧手手套套箱箱法法e其其它它等等等等2次次代代培培养养和和厌厌氧氧菌菌的的确确定定3分分离离培培养养中中可可能能失失败败的的原原因因1））培培养养前前为为做做标标本本的的直直接接涂涂片片和和染染色色镜镜检检2））标标本本在在空空气气中中放放置置太太久久或或接接种种时时时时间间过过长长3））未未用用新新鲜鲜配配制制的的培培养养基基4））未未用用选选择择性性培培养养基基5））无无合合适适的的厌厌氧氧罐罐或或装装备备出出现现问问题题6））培培养养时时间间不不足足7））……………………………………..鉴定定实实验验1形形态态和和染染色色重要要的的是是为为下下一一步步的的鉴鉴定定提提供供参参考考，，时间间破伤伤风风梭梭菌菌革革兰兰氏氏染染色色改改变变拉丝丝实实验验加加KOH30g/l一一滴滴，，能能拉拉丝丝为为阴阴性性不不能能为为阳阳性性PH痤疮疮丙丙酸酸杆杆菌菌7.0时时阴阴性性及及多多型型性性6.0及及以以下下革革兰兰氏氏阳阳性性杆杆菌菌2菌菌落落性性状状1））色色素素产产黑黑色色素素类类杆杆菌菌2~10天天可可产产生生黑黑色色素素；；溶溶齿齿放放线线菌菌培培养养3~4天天产产生生粉粉红红色色色色素素2））溶溶血血产产气气夹夹膜膜梭梭菌菌在在新新鲜鲜的的血血琼琼脂脂平平板板上上可可产产生生双双溶溶血血环环3））荧荧光光3抗抗生生素素敏敏感感实实验验4一一些些特特殊殊的的敏敏感感实实验验————聚茴香香脑磺磺酸钠钠敏感感实验验5生化化特性性6气液液相色色扑7PCR等等等有芽孢孢的厌厌氧菌菌简介梭菌属属G+陈陈旧旧性培培养基基G-四破破伤风风梭菌菌大量存存在于于人和和动物物的肠肠道粪便污污染伤口被被污染染导致致----------注意意消毒毒清洁洁芽孢为为于顶顶部，，呈鼓鼓槌壮壮，直直径比比菌体体粗，，呈梭梭状可以被被用来来生物物技术术，外毒素素致毒毒一）生生物学学性状状染色，，培养养生生化对我们们实验验诊断断来说说最重重要破伤风风梭菌菌菌体体细长长，长长4～～8um，，宽宽0.3～～0.5um，，周身身鞭毛毛，芽芽胞呈呈圆形形，位位于菌菌体顶顶端，，直径径比菌菌体宽宽大，，似鼓鼓槌状状，是是本菌菌形态态上的的特征征。繁繁殖体体为革革兰氏氏阳性性，带带上芽芽胞的的菌体体易转转为革革兰氏氏阴性性。破破伤风风梭菌菌为专专性厌厌氧菌菌，最最适生生长温温度为为37℃pH7.0～7.5，营养要要求不不高，，在普普通琼琼脂平平板上上培养养24～48小小时后后，可可形成成直径径1mm以以上上不规规则的的菌落落，中中心紧紧密，，周边边疏松松，似似羽毛毛状菌菌落，，易在在培养养基表表面迁迁徒扩扩散。。在血血液琼琼脂平平板上上有明明显溶溶血环环，在在疱肉肉培养养基中中培养养，肉肉汤浑浑浊，，肉渣渣部分分被消消化，，微变变黑，，产生生气体体，生生成甲甲基硫硫醇（（有腐腐败臭臭味））及硫硫化氢氢。一般不不发酵酵糖类类，能能液化化明胶胶，产产生硫硫化氢氢，形形成吲吲哚，，不能能还原原硝酸酸盐为为亚硝硝酸盐盐。对对蛋白白质有有微弱弱消化化作用用。本本菌繁繁殖体体抵抗抗力与与其他他细菌菌相似似，但但芽胞胞抵抗抗力强强大。。在土土壤中中可存存活数数十年年，能能耐煮煮沸40～～50分钟钟。对对青霉霉素敏敏感，，磺胺胺类有有抑菌菌作用用。二）致致病性性与免免疫性性破伤风风梭菌菌芽胞胞广泛泛分布布于自自然界界中可可由伤伤口侵侵入人人体，，发芽芽繁殖殖而致致病，，但破破伤风风梭菌菌是厌厌氧菌菌，在在一般般伤口口中不不能生生长，，伤口口的厌厌氧环环境是是破伤伤风梭梭菌感感染的的重要要条件件。窄窄而深深的伤伤口（（如剌剌伤）），有有泥土土或异异物污污染，，或大大面积积创伤伤、烧烧伤、、坏死死组织织多，，局部部组织织缺血血或同同时有有需氧氧菌或或兼性性厌氧氧菌混混合感感染，，均易易造成成厌氧氧环境境，局局部氧氧化还还原电电势降降低。。有利利于破破伤风风杆菌菌生长长破伤风风梭菌菌能产产生强强烈的的外毒毒素，，即破破伤风风痉挛挛毒素素（Tetanospasmin）或或称神神经毒毒素(Neurotoxin)。。破伤伤风毒毒痉挛挛毒素素是一一种神神经毒毒素，，为蛋蛋白质质，由由十余余种氨氨基酸酸组成成不耐耐热，，可被被肠道道蛋白白酶破破坏，，故口口服毒毒素不不起作作用。。在菌菌体内内的痉痉挛毒毒素是是单一一和一一条多多肽链链，分分子量量15万。。破伤伤风毒毒素的的毒性性非常常强烈烈，仅仅次于于肉毒毒毒素素。破破伤风风梭菌菌没有有侵袭袭力三）微微生物物学检检验标本采采集检验程序检验方法和和鉴定五气性坏坏疽病原菌菌以组织坏死死，水肿，，产气及全全身中毒的的严重的急急性外伤感感染包括很多-----重点产气夹膜梭梭菌产气夹膜梭梭菌生物学性状状形态和染色色培养特性生化反应致病性为革兰氏阳阳性粗大梭梭菌，3～～4×1～～1.5um。单独独或成双排排列，有时时也可成短短链排列。。芽胞呈卵卵圆形，芽芽胞宽度不不比菌体大大，位于中中央或末次次端。培养养时芽胞少少见，须在在无糖培养养基中才能能生成芽胞胞。在脓汁汁、坏死组组织或感染染动物脏器器的涂片上上，可见有有明显的荚荚膜，无鞭鞭毛，不能能运动。厌氧程度不不如破伤风风梭菌要求求高。在血血液琼脂平平板上菌落落较大、灰灰白色、不不透明，边边缘呈锯齿齿状，多数数菌株有双双层溶血环环，内环是是θ毒素的的作用，而而外环不完完全溶血是是a毒素所所致。不能能消化已凝凝固的蛋白白质和血清清。在疱肉培养养基中肉渣渣不被消化化，有时呈呈肉红色。。在牛乳培培养基中能能分解乳糖糖产酸，使使酪蛋白凝凝固，同时时生成大量量气体，将将凝固的酪酪蛋白冲成成海棉状碎碎块。管内内气体常将将覆盖在液液体上的凡凡士林层向向上推挤，，这种现象象称为“汹汹涌发酵””，是本菌菌的特点之之一。能分解多种糖糖类，如葡萄萄糖、麦芽糖糖、蔗糖和乳乳糖，产酸产产气，不发酵酵甘露糖或水水杨苷，能液液化明胶，产产生硫化氢，，致病条件与破破伤风梭菌相相似。产气荚荚膜梭菌既能能产生强烈的的外毒素，又又有多种侵袭袭性酶，并有有荚膜，构成成其强大的侵侵袭力，引起起感染致病。。1．气性坏疽疽2．食物中毒毒3．急性坏死死性肠炎1．直接涂片片镜检从伤伤