常见带型的类型

常见带型的类型1、Q带(Qbanding)：Q显带是用荧光染料对染色体标本进行染色，然后在荧光显微镜下进行观察。Q显带技术是最早建立的显带技术，它在观察染色体多态方面有重要的用途。但Q带保存时间短，而且需要在荧光显微镜下进行观察，因而，限制了Q显带技术的应用。2、G显带(Gbanding):染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后，再用Giemsa染色，可以显示出与Q带相似的带纹。在光学显微镜下，可见Q带亮带相应的部位，被Giemsa染成深带，而Q带暗带相应的部位被Giemsa染成浅带。这种显带技术称为G显带，所显示的带纹称为G带。G显带克服了Q显带的缺点，G带标本可长期保存，而且可在光学显微镜下观察，因而得到了广泛的应用，是目前进行染色体分析的常规带型。3、R显带(Rbanding)：所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反，故称为R带(reversedband)。G带浅带如果发生异常，不易发现和识别，而日显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带，所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有重要作用。4、C显带(Cbanding):专门显示着丝粒的显带技术。C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。因而，C带可用来分析染色体这些部位的改变。5、T显带(Tbanding)：专门显示染色体端粒的显带技术，用来分析染色体端粒。6、N显带(Nbanding)：专门显示核仁组织区的显带技术。7、高分辨显带(high-resolutionbanding)：分裂中期一套单倍染色体一般显示320条带。70年代后期，采用细胞同步化方法和改进的显带技术，获得细胞分裂前中期、晚前期或早前期的分裂相，可以得到带纹更多的染色体，能显示550-850条带，甚至2000条带以上。这种显带技术称为高分辨显带技术。8、姊妹染色单体互换(SCE):5-漠脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxy-uridine，BrdU)是脱氧胸腺嘧啶核苷的类似物，在DNA链的复制过程中，可替代胸腺嘧啶。由于DNA的半保留复制，当细胞在含有BrdU的培养液中经过两个分裂周期后，两条姊妹染色单体的DNA链在化学组成上出现差别，即一条染色单体的DNA双链中有一条链掺入了BrdU，另一条则为原来的模板，不含BrdU；而另一条染色单体的两条DNA链中的胸腺嘧啶核苷均被BrdU取代。固定原理：固定是组织细胞或其成分选择性的固定于某个特定阶段的过程。其目的是杀死细胞，但又要避免所研究的成分受到破坏。固定的目的不止是提高染色体结构的可见性，还应能显示染色体形态的细节，诸如染色质和异染色质、初级缢痕、次缢痕等，这就要求临界固定。细胞的膨胀和染色体的皱缩是决定固定剂质量的两个重要因素。固定剂的特性：1、为使染色体结构不破坏，按染色体的可见性及嗜碱性，就需要使染色体物质沉淀。2、能迅速穿透组织或细胞，并在瞬间杀死它们，使正在分裂的细胞立即停止在各自的时相上。3、能防止蛋白质的自溶作用。4、在细胞致死时，固定剂能起防腐作用，又能阻止分解细胞成分的作用。5、能增强染色体的嗜碱性，达到优良的染色效果。(甲醛能降低嗜碱性)乙酸能使核酸沉淀，组蛋白溶解，但却不能固定细胞质蛋白。在染色体结构的研究中，乙酸的主要用途是阻止染色体收缩，使染色体结构免于破坏。经乙酸固定的物质，还能抵消甲醇的硬化作用。1、优点：乙酸作为混合固定液中的一种可与任何一种固定剂同时使用，且可与任意比例的水、乙醇或甲醇混合；可以用很低的浓度：1%〜100%；具有很强的穿透性能，甚至比乙醇的穿透性要高。这可能是因为它的离子较小的缘故。2、缺点：导致染色体片段的过分膨胀，故如要形成染色体的详细结构，必须把它与乙醇或类似的化学物质一道使用，后者能使组织收缩和硬化。甲醇优点：迅速穿透组织，沉淀蛋白质，具有脱水性。蛋白质的不可逆转的变性，使组织硬化、脱水，固缩作用能迅速进入细胞。预固定可以慢慢脱水，防止细胞离心破裂。大乙醇不能有效固定染色质，原则上不与乙酸、甲醇或氯仿混合。药物作用1、TDR：抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶的活性，使dTMP合成下降，继而使DNA的合成受到阻断；然后同时洗脱，解除阻断，可使细胞分裂同步化。过量的TDR使染色体细胞停止在S期。2、Brdu：为胸苷类似物，加入后可渗入复制阶段，干扰DNA的二三级结构形成，使染色体延长。3、PHA：能够使终端细胞反分化，促进细胞的有丝分裂，增加其分裂指数。4、秋水仙素：能破坏纺锤丝的形成，将细胞控制在有丝分裂中期，使同源染色体不易二二分离。5、KCl：破坏红细胞，使核膨胀，染色体松软，迅速分散。0.075MKCl低渗液优点：染色轮廓清晰，可染性强，染色时间短，充分显示带型。染色体显带：常用的染色体显带技术有以下4种：Q带、G带、R带和C带。其中Q带因荧光很快褪色，标本不易保存，故国内很少应用；C带为染色体着丝粒显带法，对染色体识别帮助不大，一般也不作常规使用。国内应用较广的是G带和R带技术。G带是指标本事先经过某种预处理，再以Giemsa染色后染色体纵轴上所显示的带型。它和Q带带型基本一致，并具有用普通显微镜即可观察、标本能永久保存等Q带所没有的优点。和R带相比，G带的长处是带纹细致，因而解象力较强；其短处是多数染色体末端呈浅带，不利于该区异常的识别，其次G带对标本中分裂相的数量和质量的要求较高，以致分裂相相对贫乏且染色体质量较差的白血病和实体瘤标本常不易获得高质量的带型，此外，影响显带的因素较多，故条件不易控制，欠稳定等。G显带技术视预处理的不同而有多种，例如热盐水法、碱处理法、尿素法和蛋白酶消化法。其中重复性较好且应用最广者当推Seibright的胰酶G显带法［9］。该法显带的机制可能是胰蛋白酶抽提了和DNA上富含GC碱基对区段相结合的蛋白质，以致降低了该区段和染料的亲和力，乃呈浅带；反之，DNA上富含AT碱基对的区段和组蛋白结合紧密，胰酶处理时不易被抽提，故和染料有较强的亲和力，乃呈深带。R带有两个特点：其一，带型和Q带、G带正好相反，即前者的阳性带相当于后者的阴性带，而前者的阴性带则相当于后者的阳性带；其二，除Y染色体外，其余染色体末端均呈深带。因此R带不但可代替Q带、G带作为常规显带技术应用，而且还有胜过Q带和G带之处：R带作为G带的互补带，有助于确定位于G带阴性区的染色体重排断裂点；R带对揭示涉及染色体末端的缺失和易位特别有价值。自然，R带也有它的短处，即它的带纹不如G带精细，因而其解象力有时逊于G带，例如难以识别象inv（16）这样微小的异常。R带按制备方法的不同可分为荧光R带和姬姆萨R带两类，但以Dutrillaux首创的热处理姬姆萨R显带法为最基本的方法［10］。其显带机制尚未完全明了°Dutrillaux认为是由于DNA受热变性的缘故。此时富含AT碱基对的区段单链化，故不易为Giemsa液所染色，乃呈浅带；而富含GC碱基对的区段仍保持正常的双链结构，故易于为Giemsa液染色，乃呈深带。西欧地区特别是法国普遍将R带作为常规显带法，其原因除了上面已提到过的外，还由于R带方法简便，重复性好，带型清晰，易于识别，标本可成批显带以及对于分裂相量少质差的肿瘤细胞其显带成功率明显高于G带的缘故。染色体制备过程均包括以下步骤：（一）应用秋水仙素，阻留中期分裂相。秋水仙素系一种生物碱，其作用有二：①破坏纺锤体，使细胞分裂停止在中期；②使染色单体收缩，形态典型，宜于观察和分析。秋水仙酰胺为其衍生物，功效相同而毒性只及其1/30〜1/40。秋水仙素的效果与其浓度和作用时间密切相关。浓度愈高，处理时间愈长，则MI愈高，而染色体愈短；反之，则MI愈低，而染色体愈长。因此分裂相数量和染色体长度是一对矛盾，应兼顾这二者而确定秋水仙素的浓度和处理时间。终浓度为0.05gg/ml的秋水仙酰胺处理1h是国内外一致推荐的浓度和时间。（二）应用低渗溶液处理细胞，使制片时染色体获得满意的分散。低渗溶液中以0.075MKCl为最理想，使用前应预温至37°C。不同组织所需处理时间并不一致。外周血标本处理15min为宜，骨髓标本需处理30min。处理时间太短，则染色体铺展不好；处理时间过长，可导致细胞破碎和染色体肿胀以致染色体人为丢失和带纹不清。（三）应用固定剂处理细胞，防止其变质，其次由于抽提了与染色体结合的组蛋白，显带后能产生清晰的带型。常用3:1甲醇、冰醋酸溶液，反复多次固定，直至细胞悬液澄清为止。固定剂需新鲜配制，以免产生沉淀，影响其固定效果。（四）气干法滴片使细胞膜破裂，染色体分散。通常的做法是将洁净玻片浸泡在冰水中，滴片时取出直立于滤纸上，吸去多余的水，只留一薄层在玻片表面，用吸管吸取细胞悬液从10cm高处滴下，每片2滴，立即吹气，再通过小火焰，使其干燥。另一种做法是将玻片浸泡于95%乙醇中，滴片时取出重新浸泡于20%乙醇中，滴片后不吹气，立即在火焰上方通过，再将玻片边缘通过火焰中心部以促使附着于玻片表面上的固定液