T-CSTM 01090-2022 T-CAIA-SHO19-2022（idt） 乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法

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T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022（IDT）乙酰胆酯酶 活检测分光度法Acetylcholinesterase-Determinationofactivity-Spectrophotometricmethod2022-10-28发布 2023-01-28实施中关村材料试验技术联盟发布中国分析测试协会T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022II前 言本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》，GB/T20001.4-2015《标准编写规则第4部分：试验方法标准》的规定起草。T/CSTM01090—2022与T/CAIA/SHO19-2022一致程度为等同（IDT）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）本文件由中国材料与试验标准化委员会科学试验标准化领域委员会（CSTM/FC98）T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022T/CSTM01090—2022/T/CAIA/SHO19-2022PAGEPAGE5乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法范围本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法。0.01μmol/(mL·min)0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)。规范性引用文件（GB/T6379.1 测方结果准度(确与确度) 第1部：则定义GB/T6379.2 测方结果准度(确与确度) 第2部分确准测方重性再现的本法GB/T6682 GB/T26810 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1乙酰胆碱酯酶活性acetylcholinesteraseactivity在规定的反应条件下，乙酰胆碱酯酶具有催化分解碘化硫代乙酰胆碱的特性，用每毫升（或毫克）乙酰胆碱酯酶每分钟催化分解碘化硫代乙酰胆碱的微摩尔量表示。原理5,（2-5-巯基412nmDTNB试剂除非另有规定，本方法所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。pH8.0称取33.92和0.83置于200烧杯1000pH8.00.1mol/L磷酸缓冲液。称取72mg10磷酸缓冲液（5.1）4℃10倍。5,5（2-）（DTNB）溶液称取19.8mgDTNB置于烧杯中，用磷酸缓冲液（5.1）溶解，移入100mL容量瓶中，用磷酸缓冲液定容。应现用现配，出现明显黄色即弃用。吸取7μLO,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯（敌敌畏）纯品（或有效含量为10mg的溶液），置于带盖离心管中，立即加入10mL丙酮溶剂，混匀，用封口膜密封保存。称取30.7mg5010100相当于1μmol仪器设备试验需要的仪器至少包括：秒表0.15s。0.1mg。GB/T26810）370.5。e)100μL10.001。f)10和100。g)50mL离心管和15mm×150mm试管若干。样品（试验步骤10.0mg0.100mL2mL（5.1）10mL1.09.0mL10100100030.03μmol~0.40μmol范围内。选择2个~3个浓度样品原液或样品稀释液进行酶活性的测定。取两支50mL离心管，一支加入1.0mL碘化硫代乙酰胆碱溶液（5.2），并加入9.0mL磷酸缓冲液稀释；另一支加入20mLDTNB（5.3），37℃水浴锅中预热10min。1.01.0作为37℃5DTNB（5.3）1.037℃0.1抑制剂（5.4）使用分光光度计在412nm波长处，以对照管为参比，测试样品管吸光度。注1：乙酰胆碱酯酶酶活性的检测易受环境干扰，常用农药等相关试剂的实验室宜在通风橱内进行该实验。注2：在酶稀释后若溶液肉眼可见不澄清或者有颜色可将对照管变为酶稀释液，并将0.1mL抑制剂提前加入管中。取60~5DTNB表1 每配成表名称012345谷胱甘肽标准溶液（5.5）的体积，mL00.0300.1000.2000.3000.400磷酸缓冲液（5.1）的体积，mL2.1002.0702.0001.9001.8001.700DTNB溶液（5.3）的体积，mL1.0001.0001.0001.0001.0001.000相当于分解碘化硫代乙酰胆碱的量，μmol00.0300.1000.2000.3000.400在412nm波长处，以空白溶液（0号管）为参比，反应后每管的吸光度值为纵坐标，每管谷胱甘肽（0.990。结果计算乙酰胆碱酯酶活性（A），按式（1）计算：式中：

𝐴=

10×××𝐷𝑚×𝑡

(1)𝐴乙酰胆碱酯酶的活性，单位为微摩尔每毫升（或每毫克）每分钟（μmol/(mL·min或μmol/(mg·min)）；̅——由校准曲线计算得到的酶稀释液催化分解碘化硫代乙酰胆碱量的平均值，单位为微摩尔（μmol）；𝑉0——酶液或酶粉样品溶解后的体积，单位为毫升（mL）；D——稀释倍数；m——吸取酶液的体积或称取酶粉的质量，单位为毫升（mL）或毫克（mg）；t——反应时间，本方法为3分钟（min）；计算结果保留两位有效数字。精密度74GB/T6379.16~7次。根据GB/T6379.2，对得到的结果进行统计分析，所得精密度见表2。表2 精度乙酰胆碱酯酶活性μmol/(mL·min)重复性限r再现性限R0.01~