分子生物学简答题

1、如何理解结构决定功能？胸腺嘧啶（，thymine，5尿嘌呤（，Urnci，2,4二氧嘧啶；尿嘌呤（，Urnci，2,4二氧嘧啶；胞嘧啶（C，cytosin，2氧-4氨基嘧啶；TU5A发生互补配对，但是一RNADNA的碱基。TU的甲基化，经DNARNAC源。C和U因为4位上一个是氨基一个是羰基然后一个就和G配对，一个和A配对。1、Eachallelehasadifferentphenotype,why(illustratebyexample).ww基因座的杂合子中，红色（野生型）相对于其他基因来说是显性的一个突变可能都型基因。例如人类血型系统：缺失功能用空白型即OAB是共显性的O型表现出显性。2、Conservationofexonsanditsapplication.①外显子就是在DNA序列中被转录成mRNA片段的一段序列；②外显子序列除，因而它在进化中具有保守性。开放的阅读框其它生物中很可能存在。3、Chromosomewalkinganditsapplication.从的一端从文库中筛选出第二个重组克隆，该克隆插入片段含有与探针重叠的顺序和染色体的其它顺第二个重组克隆的插入片段末端小片段第三个重组克隆此重复，得到一个相邻片段，等于在染色体上移了一步，称为染色体步移。地获取与已知序列相邻的未知序列，即侧翼序列。主要应用有：步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；T-DNA或转座子的插入位点；用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；、YACBAC的片段搭接。4、Howtoclonegeneforgenome?DNADNADNA的基因文库，通常是用λ噬菌体或柯斯质粒作载体构建的。应用λ噬菌体载体构建基因组文库：第一步是从给体生物制备基因组DNADNA片段同适当的λ最后从转化子克隆群体中挑选出含有目的基因的克隆。DNA使真核基因组DNA克隆的柯斯质粒载体上，然后分离收集分子量35-45kbDNA连接重组。经5、利用cDNA克隆某基因（举例）cDNA通过一系列的酶促作用转变成双链cDNA群体载体分子上，然后再转化到大肠杆菌菌株的细胞内，如此便构成了包含着所有基因编码序列的cDNA基因文库要步骤：RNAmRNA的分部；dTcDNAcDNA合成法合成第一链cDNA；mRNA-DNAcDNA分子；cDNA主细胞增殖。重组的方式是先用末端转移酶给双链cDNAcDNA分子的两端，然后再同经适当处理而具有相应末cDNA文库。例如，poly(A)mRNAoligo(dT)引物和反转录酶成出cDNA与质粒载体构成重组分子大肠杆菌DNA片段。6、蛋白质组学研究中所用的方法及原理①蛋白质组学研究中最常用的方法是二维电泳（2DE。第一维过程中，蛋SDSCoomassieBlue色，让蛋白质显现出来。②目前已成为蛋白质组学研段与蛋白质的对应关系，最终推断样品中包含的蛋白质。（比较蛋白质组学其表达蛋白质的含量。例如Label-freeDeCyderMSTM样本上相应肽段的强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。7、RFLP可以作为一种遗传标记DNADNADNA片段在长度上的简单变化。DNA整的纯合子个体（DNA序列）DNA分子，都会在同样的位点被准确地切割。从不同的生态型或不同的地理隔离群植株分离的总DNA中，同源DNA分子通常会表现出序列的趋异性，形成RFLP。RFLPDNA序列上的特定变化（突变）够像其他任何遗传标记一样进行定位，成为一种十分有用的分子标记。RFLP可以作为一种遗传标记，基本上一个RFLPSNPSNP8、限制性位点能否体现孟德尔遗传的特性尔定律。祖孙三代的限制性多态家谱证明了限制位点多态性的遗传规律符合孟德尔4因都能找到，并且它们都可以在每一代中独立地分离，表明了DNA段的孟德尔遗传定律。9、目前遗传研究中所用的4类遗传标记形态学标记（Morphologicalmarkers）细胞学标记（Cytologicalmarkers）生化标记（Biochemicalmarkers）分子标记（Molecularmarkers）10、人类基因组数目、蛋白质组的成员，为什么后者远多于前者？25%60%的人类基因存在可变剪接，使RNA质组增加的程度大于基因组增加的程度，所以基因的总数比潜在的蛋白质数目少。11、人类线粒体基因组与酿酒酵母线粒体基因组间的异同DNAtRNArRNA蛋白质的基因。DNADNA含有较长的内含子。12、Toillustratethedevelopmentalcontrolviaglobin.执行相同的功能。α链和β和类β中的肽链相关，并在稍后被其取代。13、动物可以从植物中得到营养的原因？Rubisco1,5形态转变成有机物，比如说葡萄糖等形态。2动物不能直接利用大气中的二氧化碳。在植物中，由于Rubisco这种酶的存在，经过一系列反应，可以把CO转变为磷酸甘油酸的形式，然后在被其他酶变成蔗糖等有机物，供动物使用。因此动物可以通过食用植物而得到有机物。14、Unequalcrossing-overcanresultinwhatresults?2不等交换可以改变基因数目，使基因簇发生重排：如果一条染色体上的基12（重组染色体（父本、母本、重组。不等交换还会有质的改变：如果交换发生在基因内部而不是基因间，其结果将决定于发生交换的基因序列完全相同还是只是相近如果非等位基因的拷贝1和拷贝2序列相同，形成两条基因序列没有改变。但是相邻基因序列比较相近时也可以发生不等交换这时形成的两条重组基因与任一条亲本基因都不相同15、DNA fingerprinting.小卫星DNA重复序列单位的数目变化是由类似于重组的事件造成的，我们DNADNA指纹分析技术，即使用限制性内切酶切割每个个体的、含有短串联重复序列的区域后所产生的片段，通过分析这些片段的异同而得到个体间16、Theadaper”istransferRNA,why?mRNA中的每个核苷酸三联体代表一个氨基酸。由于核苷酸三联体与氨基酸的结构不同其中的“适配器”是tRNA,它代表唯一的氨基酸，并与其共价相连它包含了一个三核苷酸序列，即反密码子，它与代表氨基酸的密tRNA能够通过碱基互补配对原则识别密码子。17、比较三种RNA的结构及功能种类种类结构功能mRNAmRNA53’末传递DNA遗poly（A）mRNA起始密码传物质，合成子上游存在SD序列；分子量远大于tRNA。 蛋白质的模板二级结构三叶草结构，三级结构倒L型结构；三叶转运氨基tRNA 草带有4个恒定臂在更长的tRNA中另有一个侧酸，识别臂；由74-95个碱基组成。 码子具有广泛的二级结构并且和蛋白质结合形成核糖 核糖体的组rRNA 体；有大小两种亚基：真核60S大成部分，参亚基，原核30S50S大亚基）分子质量最大。 合成18、Howtoproducethecapandthepoly(A)foreukaryoticmRNA?①mRNA5'-5'G程是由鸟苷转移酶催化完成的。随后，1-31-3类型。-7-甲基转70。下一步是在第二位碱基(在没有任何修饰之前的转录物真正的第一个起始碱基)2′-O2′-O-甲基-转移酶催化，1第三碱基的修饰是甲基被加到已戴帽的mRNA21mRNA2mRNA210%-15%。②mRNA3′延伸的多聚腺苷酸经常被描述为poly(A)尾部，有这种特征的mRNApoly(A)+。poly(A)DNA编码，它是在转录之后被加到RNA上的，加poly(A)poly(A)聚合酶所催化，在mRNA3′-200RNAmRNApoly(A)poly(A)结合蛋白相结合，许多真核生物内部有相关类型的蛋白质。1、Whasitsfunctionofpoly(A)andhowtouseitinexperiment？RNApoly(A)mRNARNAmRNApoly(A)。poly（A）PABPmRNAmRNA分子有效翻译。poly(A)的存在有重要的应用价值，它可用于分离mRNA，因为mRNA的poly(A)区域可以与oligo(dT)oligo(dT)将poly(A)+mRNA从其他RNA中分离出来。20、5-FU抗癌机理5-FU5-5位上的氢被氟取代的衍生物。5-FU5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸，而抑制脱氧胸苷酸合成酶，阻止脱氧尿苷酸甲基化转变为脱氧胸苷酸，从而影响DNA5-RNA中干扰蛋白质的合成，故对其它各期细胞也有作用。21、Tocomparetheprocessofproteinsynthesisforprokaryoticandeukaryotic.但也有不同之处。原核生物边转录边翻译，而真核生物的翻译与转录是分开的。真核mRNAmRNA译；真核生物蛋白质合成机构比原核生物复杂，起始步骤涉及起始因子众多，过程复杂：起始结合位置不同；起始tRNA不同；起始复合物形成所需的起始因子不同；终止释放因子不同。真核生物蛋白质合成的调控复杂；真核生物与原核生物的蛋白质合成可为不同的抑制剂所抑制。22、WhatisTu-Tscycle?EF-Tu-GTP将氨肽-tRNAEF-Tu-GDP的形式释放。EF-TsGTPGDPGTP，释放GDPEF-Tu-GTPfMet-tRNAf，两者无法结合可保证后者不能识别AUGGUG密码子。23、Howtodemonstratethatinhibitingonestepinproteinsynthesisblocksthenextstepforkirromycin?()黄色霉素是抑制EF-Tu起作用的抗生素，当EF-Tu被黄色霉素结合后，它仍可使氨酰-tRNAA位。但EF-Tu*GDP复合体的持续存在会阻止肽酰-tRNA与氨酸-tRNAmRNA上，使蛋白质合成终止。EF-Tu的持续存在阻止了氨酰-tRNA50SA以，EF-Tu*GDP的释放时形成肽键所必需的。在蛋白质合成的其它阶段可以看到同样的规律：前一步反应必须完成后才能发生后续反应。24、Howtorevealthenatureofthetransferreactionviatheantibiotic)tRNANOtRNA-tRNA肽酰-tRNA的肽键将被转移到嘌呤霉素的氨基基因上。25、Howtoform48Scomplex?一些起始因子与核糖体小亚基结合形成43S复合体（=40S亚基+因子+tRN43SmRNA48S体的形式被分离到。48S复合体在起始密码（AUG）处形成。26Howtoinhibittheprocessoftheproteinsynthesisatparticularbyusingantibiotics?（抗生素如何在蛋白质合成的特殊阶段抑制其合成？）蛋白质及rRNA组成的复合体提供了一些影响GTP酶活性的抗生素结合位GTP酶活性而抑制蛋白质的合成。研究同时S12蛋白结合从而抑制蛋白质的合成。27、Howtoprocessthe3endandthethe5endofatRNA?tRNA3CCA而成。过程为：核酸内切酶首先353端。在真核生物中，这个反应也是由多个酶来完成的。这个过程形成了3CCAtRNA。28、InosinecanpairwithanyofU,C,andA，why?A、C、UG(I)U、CA中的任何一种碱基配对。29、Toillustratemissensesuppressorscompletedwithwild-type.（说明错义抑制子具有野生型功能）tRNAtRNA应的氨酰-tRNA则是错义抑制子。tRNAtRNAtRNAAGA，所以抑制仅仅是部分的抑制。30Howtopreventrandomaggregationofproteinsby)细胞质中蛋白质的密度是相当高的，蛋白质的积聚使折叠蛋白容易聚集，而行折叠。31、Whytheyarenamed“hsp”?这些蛋白质之所以称为热激蛋白（heatshockproteinhsp度升高时，它们会大量产生，以尽量减少热变性对蛋白质的损害。32、Thesignalsequenceprovideswhatbetweentheribosomesandthemembrane.胞质内合成还是转运到膜上合成，而正是信号肽的合成引发了核糖体与膜的结合。33、Explainthenuclearporesareusedforbothimportandexportofmaterial.RNARNA的输入及输出。34、Thefunctionandmechanismofubiquitin?76要分解掉的蛋白质使其被水解。当附有泛素的蛋白质移动到桶状的蛋白酶的时去。质将被特异性地识别并迅速降解，泛素的这种标记作用是非底物特异性的。35Whatisitsmeaningforresearchubiquitin?代谢对于生命的正常功能至关重要。控制蛋白质降解的机制尚未阐明，现在已清楚细胞蛋白的降解是一个复杂本过程中扮演重要角色，蛋白质降解异常与许多疾病的发生密切相关。基因的功能是通过蛋白质的表达实现的，而泛素在蛋白质降解中的作用机36、Howdoesrhofactorwork?ρ因子是大肠杆菌的一种基本蛋白质，只在终止阶段发挥作用，由6275kDaNRNACATP水解域。ρRNA终止子上游一个伸展的单链区；ρ因子移动：结合到RNA上后，发挥ATPRNA能量，RNA聚合酶在终止子处停止，ρRNA-DNA区域；终止：ρ因子发挥解旋酶活性，使双链体结构解开。37、Toillustratecontrolcircuitscanbedesignedtoallowpositiveornegativecontrolofinductionorrepression(withgalactose、lactose、arabinoseetc.，CRPproteinhastobeused).当阻遏蛋白从操纵基因上脱离后，激活蛋白与启动子结合以及和RNA聚合酶的相互作用，帮助结构基因的转录起始，促进相应蛋白的合成。RNA基因的转录。正调控中，反式作用因子必须与顺式作用元件结合，才能使RNA聚合酶在启动子处起始转录。影响其与操纵基因的亲和力，这些小分子化合物称为效应物。阻遏物：即阻遏蛋白，是一种变构蛋白。下面以乳糖操纵子的正负调控为例进行阐述：（1）大肠杆菌乳糖操纵子负向调控：大肠杆菌乳糖操纵子(Lac操纵子)上依次排列着启动子、操纵基因lacZlacYlacAlacZ编码分解乳糖的β-lacA编码半乳糖苷乙酰基转移酶。操纵基因lacOlacI所编码的阻遏蛋白的结合部位。lacO上，于是转录便得以进行，从而使吸收和分解乳糖的酶被诱导产生。lacORNA向前移动，转录不能进行下去。当无乳糖时，乳糖操纵子中调节基因I编码的阻遏蛋白与操纵序列结合，阻RNAP结合，结构基因无表达。因此，这种调节称为负调控。负调I的少量β-半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。生成的半乳糖作为诱导物，可以形成阻遏蛋白-诱导物复合物。诱导物的结合改变了阻遏蛋白的构象，降低了它与RNARNADNA的转录。（2）大肠杆菌乳糖操纵子正向调控：ATP不能转化为cAMPCR（cAMP受体蛋白CRP-cAMP复合体（为正调控因子，可增强转录。CRP-cAMPlacODNADNARNARNA聚合酶与启动子结合，从而增强了转录。当乳糖作为能源时，激活了腺苷酸环化酶活性，导致cAMP进了CRP-cAMP的酶。当葡萄糖为能源时，抑制了CRP-cAMP能被转录。38TheE.colitryptophanoperoniscontrolledbyitsmechanismplease.大肠杆菌色氨酸衰减子调节机制为：色氨酸的前导肽存在两种碱基配对结124312区的配对受到阻遏时，会形成另一种不同的结构。在这种情况下，234夹结构就无法形成。当色氨酸充足时mRNA的前导区开12UGA234区配对，产生终止子发夹结构。在这种情况下，RNA聚合酶就会在衰减子处停止。当色氨酸缺乏时11区就被核2234区还未被转录之前进行配对，于是4区只能保持单链状态，由于无法形成终止子发夹结构，RNA聚合酶就能继续转录越过衰减子。39、AntisenseRNAoffersapowerfulapproachforturningoffgenesatwill，giveanexampleplease.反义基因是相对于启动子的方向，将基因反向从而转录出“反义”链，编码反义RNA。反义RNA事实上是一种合成的调节因子RNA，无论是在原核生物细胞还是真核生物细胞中，合成的反义RNA都能抑制靶RNA的表达。RNARNA(RNARNA的靶标)RNA引入真核生物细胞时，可以阻断其靶基因的表达。RNA技术提供了一种高效的按意愿关闭基因功能的方法，引入相应的RNARNA关，使得我们进而可以研究靶基因表达时的某一调控基因的重要性。例如反义胸苷激酶可以抑制内源胸苷激酶的合成。40、What’sRNAi?Giveanexampleplease.RNAiRNARNARNAmRNA降解。RNA沉默，描述双链RNA在植物中的双链RNA相关基因的表达。RNAiRNAisiRNAsiRNA索基因功能的重要研究手段。41、Trytoexplainphagelyticdevelopmentproceedsbyaregulatorycascade.为下一套基因表达所需的调控因子，利用这些连续控制形成一个级联反应，使不同基因在特定时期被开启（或被关闭。RNA聚合酶了用于噬菌体中期基因晚期基因42ThecⅡandcⅢgenesareneededtoestablishccⅢ是建立溶源态所必须的？）RNAPRECCⅢ。CCCⅡ蛋白不被降解。PRE开始的转录导致阻抑物的合成，同时它也封闭了cro的转录。43、Crobindstothesameoperatorsasrepressorbutwithdifferentaffinities，whichresultinwhatresult.Cro纵基因但亲和力不同，这导致了什么结果？CroO位点的亲和力顺序为：OR3OR2OR1OL3OL2。Cro蛋白和阻抑物结合相同的操纵基因