肿瘤的基因诊断课件

肿瘤的基因诊断温州医学院检验医学院温州医学院附一医检验科陶志华肿瘤的基因诊断温州医学院检验医学院1

肿瘤是细胞的异常增生有结构、功能和代谢的异常具有超过正常细胞增生能力肿瘤概念肿瘤是细胞的异常增生肿瘤概念2

在细胞内核酸代谢的异常:肿瘤细胞和正常细胞的核酸代谢有显著的不同；不同类型肿瘤细胞的核酸代谢也有较大的差异；相同恶性程度肿瘤细胞的核酸代谢也有所不同。

肿瘤是一种分子病在细胞内核酸代谢的异常:肿瘤是一种分子病3

癌基因的激活抑癌基因的失活（或缺失）肿瘤发生机理癌基因的激活肿瘤发生机理4原癌基因癌基因病毒癌基因肿瘤抑制基因肿瘤转移相关基因肿瘤耐药基因等肿瘤相关基因原癌基因肿瘤相关基因5细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因癌基因在正常细胞的基因组中存在不表达状态表达水平不足以引起细胞的恶性转化癌基因：细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因癌基因：6定位功能癌基因，产物分泌蛋白生长因子sisPDGFβ链跨膜蛋白受体型酪氨酸激酶erbB,EGF受体erbB2,EGF样受体(neu)fms,CSF-1受体膜结合蛋白G-蛋白非受体型酪氨酸激酶rasp21rassrcpp60src胞浆可溶性蛋白非受体型酪氨酸激酶丝氨酸/苏氨酸激酶信号转导连接蛋白ab1rafcrk,SH2/SH3调节蛋白vav,SH2调节蛋白胞核蛋白转录因子mycmybfosjunerbA,T3受体表1细胞癌基因按其产物定位和功能分类定位功能癌基因，产物分泌蛋白生长因子sisPDGFβ链跨膜7能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常增殖的基因

目前研究较多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。

抑癌基因能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常抑癌基因8基因染色体定位相关肿瘤基因产物及功能RB13q14RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、结肠癌p105，控制生长WT11p13WT、横纹肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母细胞瘤WT-ZFP，负调控转录因子NF-117p12神经纤维瘤、嗜铬细胞瘤、雪旺氏细胞瘤、神经纤维肉瘤GAP，拮抗p21rasBDCC18q21.3结肠瘤P192,细胞粘附分子p5317p13星状细胞瘤、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷状细胞肺癌P53控制肿瘤生长erbA17q21ANLLT3受体，含锌指结构的转录因子表2已确定的几种抑癌基因

基因染色体定位相关肿瘤基因产物及功能RB13q14RB、成骨9野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞，促使细胞凋亡。抑制肿瘤细胞生长保持DNA完整性野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表10包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制基因。肿瘤转移相关基因包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制肿瘤转移相关基因11其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。

肿瘤耐药基因其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。肿瘤耐药基因12

血小板衍生生长因子（PDGF）表皮生长因子（EGF）VGF基因等肿瘤生长因子

血小板衍生生长因子（PDGF）肿瘤生长因子13

肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：肿瘤转移标志物肿瘤抗药基因突变的癌基因肿瘤相关的病毒基因肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：14标志分类机制分子标志应用于癌症诊断分子遗传性染色体易位

t(9；22)，t（14；18），t(11；12)等白血病、淋巴瘤等点突变p53,ERras等胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌等缺失BRCA1，BRCA2，DCC等乳腺癌、结肠癌改变拼接CD44，muc-1,VLA-4等结肠癌、肾癌、乳腺癌、脑瘤等扩增erb-B2,EGFR,N-myc,ras乳腺癌、脑瘤、神经母细胞瘤比例改变明胶酶A/TIMP2乳腺癌转移等病毒性病毒转化HPV,HCV,HBV，EBV宫颈癌、肝癌、鼻咽癌等组织性组织分化PSA,PSMA前列腺癌muc-18,酪氨酸酸酶，Mage-3黑素瘤AFP,白蛋白肝癌甲状腺球蛋白甲状腺癌NPGP9.5，酪氨酸羟化酶表面活性物质等神经母细胞瘤肿瘤性肿瘤细胞特征CEA肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌β-HCG黑素瘤等CK-19肺鳞癌端粒酶结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等微卫星体等结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等表3

肿瘤基因诊断的分子标志及其应用标志分类机制分子标志应用于癌症诊断分子遗传性染色体易位t(15

可分为四大类组织特异性基因标志肿瘤特异性基因标志血管生成因子其它与肿瘤转移相关的分子及基质蛋白酶及其抑制剂肿瘤转移基因标志物可分为四大类肿瘤转移基因标志物16组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体（EGFR）mRNA等。

.组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋17肿瘤特异性基因标志物存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于其他细胞。如CEAmRNA、AFPmRNA、PSAmRNA等。

肿瘤特异性基因标志物存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于18血管生成因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。

血管生成因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。19肿瘤抗药基因对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；还可以将肿瘤抗药基因导人骨髓细胞，特别是骨髓干细胞中，提高机体对于抗肿瘤化疗药物的耐受程度，如此可以加大抗肿瘤化疗药物的使用剂量，提高抗肿瘤化疗的治疗效果。肿瘤抗药基因对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；20肿瘤抗药基因多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。.其它一些与细胞内药物代谢有关的基因也可以看作是肿瘤抗药基因，如谷胱苷肽S一转移酶（GST），可使机体解毒功能增强；癌基因bcl-2的表达可抑制肿瘤化疗药物所诱导的肿瘤细胞程序化死亡等。

.

肿瘤抗药基因多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-21突变的癌基因癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见到较大范围片段的缺失或插人以及染色体转位之外，大多数情况下，都是少数核苷酸或单个碱基的突变。.癌基因点突变的检测单链构象多态性（SSCP）检测技术等.突变的癌基因癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见22肿瘤相关的病毒基因EB病毒（EBV）人乳头瘤病毒（HPV）乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染对于这些肿瘤组织细胞中相关病毒基因及其编码产物的检测，可以作为这些类型的肿瘤诊断的标志。致瘤病毒引起的恶性转化作用引起了人们极大的关注肿瘤相关的病毒基因EB病毒（EBV）对于这些肿瘤组织细胞中相23肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCRSouthernblot杂交技术、Northernblot杂交技术基因芯片基因测序。肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCR24肿瘤基因的分子诊断意义

1.肿瘤的早期诊断和筛选2.肿瘤疗效监测3.肿瘤的预后判断4.肿瘤微转移检测

肿瘤基因的分子诊断意义1.肿瘤的早期诊断和筛选25肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中

应用举例肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中

应用举例26肿瘤的基因诊断课件27前列腺癌特异性基因DD3PCA3

DD3PCA3是一种非编码RNA的基因，定位于9q21～22染色体。它为前列腺癌特异性基因之一，DD3PCA3mRNA仅在前列腺癌细胞中表达，而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。

前列腺癌特异性基因DD3PCA3DD3PCA3是一种非编码28DD3mRNA14外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA14外显子扩增结果M：50bpDNA29DD3mRNA13外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA13外显子扩增结果M：50bpDNA30DD3mRNA34外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA34外显子扩增结果M：50bpDNA31前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3mRNA检测结果前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3mRNA检测结果32

M：50bpDNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BPH；3：健康男性志愿者；4～10为PCa；11为试剂空白。

外周血DD3mRNA的RT-PCR扩增电泳图

M：50bpDNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BP33RT-PCR检测结果

44例PCa组中13例可见DD3mRNA阳性结果(其中B期、C期及D期分别有为0例、2例，11例)。30例BPH患者和18名健康男性志愿者标本中均未检出DD3mRNA。

RT-PCR检测结果44例PCa组中13例可见DD3mR34外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图

M：50bpDNA分子量标准；1：LNCaP阳性对照；2：阴性对照(女性)；3：BPH患者；4：健康男性志愿者；5～8：未治疗的PCa；9：试剂空白外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图M：5035巢式RT-PCR检测结果44例PCa组中21例可见DD3mRNA阳性结果(其中B期、C期、D期分别有1例、5例、15例)30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未见阳性结果

巢式RT-PCR检测结果44例PCa组中21例可见DD3m36两种方法对PCa患者外周血DD3mRNA检出率比较RT-PCR巢式RT-PCR+-+130-823注：χ2=20.2，P<0.001；Kappa＝0.629，P<0.001

两种方法对PCa患者外周血DD3mRNA检出率比较巢式RT37外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度

M:50bpDNA分子量标准；1～6:依次为105、104、103、102、101、1个LNCaP细胞/ml全血；7:阴性对照；8:试剂空白

外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度M:5038组别

DD3mRNA检出率(%，例数)

PCa（未治疗）

100%（11/11）

BPH

0%（0/30）

健康男性志愿者（对照）

0%（0/18）

注：经卡方检验，χ2＝59.0P<0.01不同前列腺疾病患者其外周血DD3mRNA检出率比较

巢式RT-PCR组别DD3mRNA检出率(%，例数)PCa（未治疗）39PCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3mRNA阳性率比较(%,例数)

临床分期DD3mRNA未治疗组内分泌治疗组B期100.0(1/1)0.0（0/2）C期100.0(3/3)25.0（2/8）*D期100.0(7/7)34.8(8/23)**合计100.0(11/11)30.3(10/33)**注：内分泌治疗组与未治疗组比较，*P<0.05，**P<0.01巢式RT-PCRPCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3mRNA阳性率比较40谢谢!谢谢!41树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-22Sunday,December18,2022人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。02:22:0402:22:0402:2212/18/20222:22:04AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2202:22:0402:22Dec-2218-Dec-22加强交通建设管理，确保工程建设质量。02:22:0402:22:0402:22Sunday,December18,2022安全在于心细，事故出在麻痹。12月-2212月-2202:22:0402:22:04December18,2022踏实肯干，努力奋斗。2022年12月18日2:22上午12月-2212月-22追求至善凭技术开拓市场，凭管理增创效益，凭服务树立形象。18十二月20222:22:04上午02:22:0412月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月222:22上午12月-2202:22December18,2022作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2022/12/182:22:0402:22:0418December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。2:22:04上午2:22上午02:22:0412月-22专注今天，好好努力，剩下的交给时间。12月-2212月-2202:2202:22:0402:22:04Dec-22牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2022/12/182:22:04Sunday,December18,2022相信相信得力量。12月-222022/12/182:22:0412月-22谢谢大家！树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-2242树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-22Sunday,December18,2022人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。02:22:0402:22:0402:2212/18/20222:22:04AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2202:22:0402:22Dec-2218-Dec-22加强交通建设管理，确保工程建设质量。02:22:0402:22:0402:22Sunday,December18,2022安全在于心细，事故出在麻痹。12月-2212月-2202:22:0402:22:04December18,2022踏实肯干，努力奋斗。2022年12月18日2:22上午12月-2212月-22追求至善凭技术开拓市场，凭管理增创效益，凭服务树立形象。18十二月20222:22:04上午02:22:0412月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月222:22上午12月-2202:22December18,2022作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2022/12/182:22:0402:22:0418December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。2:22:04上午2:22上午02:22:0412月-22专注今天，好好努力，剩下的交给时间。12月-2212月-2202:2202:22:0402:22:04Dec-22牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2022/12/182:22:04Sunday,December18,2022相信相信得力量。12月-222022/12/182:22:0412月-22谢谢大家！树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-2243踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就未来。12月-2212月-22Sunday,December18,2022弄虚作假要不得，踏实肯干第一名。02:22:0402:22:0402:2212/18/20222:22:04AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2202:22:0402:22Dec-2218-Dec-22重于泰山，轻于鸿毛。02:22:0402:22:0402:22Sunday,December18,2022不可麻痹大意，要防微杜渐。12月-2212月-2202:22:0402:22:04December18,2022加强自身建设，增强个人的休养。2022年12月18日2:22上午12月-2212月-22追求卓越，让自己更好，向上而生。18十二月20222:22:04上午02:22:0412月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月222:22上午12月-2202:22December18,2022重规矩，严要求，少危险。2022/12/182:22:0402:22:0418December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。2:22:04上午2:22上午02:22:0412月-22每天都是美好的一天，新的一天开启。12月-2212月-2202:2202:22:0402:22:04Dec-22务实，奋斗，成就，成功。2022/12/182:22:04Sunday,December18,2022抓住每一次机会不能轻易流失，这样我们才能真正强大。12月-222022/12/182:22:0412月-22谢谢大家！踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就未来。12月-2212月-244肿瘤的基因诊断温州医学院检验医学院温州医学院附一医检验科陶志华肿瘤的基因诊断温州医学院检验医学院45

肿瘤是细胞的异常增生有结构、功能和代谢的异常具有超过正常细胞增生能力肿瘤概念肿瘤是细胞的异常增生肿瘤概念46

在细胞内核酸代谢的异常:肿瘤细胞和正常细胞的核酸代谢有显著的不同；不同类型肿瘤细胞的核酸代谢也有较大的差异；相同恶性程度肿瘤细胞的核酸代谢也有所不同。

肿瘤是一种分子病在细胞内核酸代谢的异常:肿瘤是一种分子病47

癌基因的激活抑癌基因的失活（或缺失）肿瘤发生机理癌基因的激活肿瘤发生机理48原癌基因癌基因病毒癌基因肿瘤抑制基因肿瘤转移相关基因肿瘤耐药基因等肿瘤相关基因原癌基因肿瘤相关基因49细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因癌基因在正常细胞的基因组中存在不表达状态表达水平不足以引起细胞的恶性转化癌基因：细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因癌基因：50定位功能癌基因，产物分泌蛋白生长因子sisPDGFβ链跨膜蛋白受体型酪氨酸激酶erbB,EGF受体erbB2,EGF样受体(neu)fms,CSF-1受体膜结合蛋白G-蛋白非受体型酪氨酸激酶rasp21rassrcpp60src胞浆可溶性蛋白非受体型酪氨酸激酶丝氨酸/苏氨酸激酶信号转导连接蛋白ab1rafcrk,SH2/SH3调节蛋白vav,SH2调节蛋白胞核蛋白转录因子mycmybfosjunerbA,T3受体表1细胞癌基因按其产物定位和功能分类定位功能癌基因，产物分泌蛋白生长因子sisPDGFβ链跨膜51能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常增殖的基因

目前研究较多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。

抑癌基因能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常抑癌基因52基因染色体定位相关肿瘤基因产物及功能RB13q14RB、成骨肉瘤、胃癌、SCLC、乳癌、结肠癌p105，控制生长WT11p13WT、横纹肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母细胞瘤WT-ZFP，负调控转录因子NF-117p12神经纤维瘤、嗜铬细胞瘤、雪旺氏细胞瘤、神经纤维肉瘤GAP，拮抗p21rasBDCC18q21.3结肠瘤P192,细胞粘附分子p5317p13星状细胞瘤、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳癌、成骨肉瘤、SCLC、胃癌、磷状细胞肺癌P53控制肿瘤生长erbA17q21ANLLT3受体，含锌指结构的转录因子表2已确定的几种抑癌基因

基因染色体定位相关肿瘤基因产物及功能RB13q14RB、成骨53野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞，促使细胞凋亡。抑制肿瘤细胞生长保持DNA完整性野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表54包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制基因。肿瘤转移相关基因包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制肿瘤转移相关基因55其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。

肿瘤耐药基因其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。肿瘤耐药基因56

血小板衍生生长因子（PDGF）表皮生长因子（EGF）VGF基因等肿瘤生长因子

血小板衍生生长因子（PDGF）肿瘤生长因子57

肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：肿瘤转移标志物肿瘤抗药基因突变的癌基因肿瘤相关的病毒基因肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：58标志分类机制分子标志应用于癌症诊断分子遗传性染色体易位

t(9；22)，t（14；18），t(11；12)等白血病、淋巴瘤等点突变p53,ERras等胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌等缺失BRCA1，BRCA2，DCC等乳腺癌、结肠癌改变拼接CD44，muc-1,VLA-4等结肠癌、肾癌、乳腺癌、脑瘤等扩增erb-B2,EGFR,N-myc,ras乳腺癌、脑瘤、神经母细胞瘤比例改变明胶酶A/TIMP2乳腺癌转移等病毒性病毒转化HPV,HCV,HBV，EBV宫颈癌、肝癌、鼻咽癌等组织性组织分化PSA,PSMA前列腺癌muc-18,酪氨酸酸酶，Mage-3黑素瘤AFP,白蛋白肝癌甲状腺球蛋白甲状腺癌NPGP9.5，酪氨酸羟化酶表面活性物质等神经母细胞瘤肿瘤性肿瘤细胞特征CEA肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌β-HCG黑素瘤等CK-19肺鳞癌端粒酶结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等微卫星体等结肠癌、乳腺癌、头颈部癌等表3

肿瘤基因诊断的分子标志及其应用标志分类机制分子标志应用于癌症诊断分子遗传性染色体易位t(59

可分为四大类组织特异性基因标志肿瘤特异性基因标志血管生成因子其它与肿瘤转移相关的分子及基质蛋白酶及其抑制剂肿瘤转移基因标志物可分为四大类肿瘤转移基因标志物60组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体（EGFR）mRNA等。

.组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋61肿瘤特异性基因标志物存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于其他细胞。如CEAmRNA、AFPmRNA、PSAmRNA等。

肿瘤特异性基因标志物存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于62血管生成因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。

血管生成因子如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。63肿瘤抗药基因对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；还可以将肿瘤抗药基因导人骨髓细胞，特别是骨髓干细胞中，提高机体对于抗肿瘤化疗药物的耐受程度，如此可以加大抗肿瘤化疗药物的使用剂量，提高抗肿瘤化疗的治疗效果。肿瘤抗药基因对于肿瘤化疗效果及预后进行推测；64肿瘤抗药基因多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。.其它一些与细胞内药物代谢有关的基因也可以看作是肿瘤抗药基因，如谷胱苷肽S一转移酶（GST），可使机体解毒功能增强；癌基因bcl-2的表达可抑制肿瘤化疗药物所诱导的肿瘤细胞程序化死亡等。

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肿瘤抗药基因多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-65突变的癌基因癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见到较大范围片段的缺失或插人以及染色体转位之外，大多数情况下，都是少数核苷酸或单个碱基的突变。.癌基因点突变的检测单链构象多态性（SSCP）检测技术等.突变的癌基因癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见66肿瘤相关的病毒基因EB病毒（EBV）人乳头瘤病毒（HPV）乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染对于这些肿瘤组织细胞中相关病毒基因及其编码产物的检测，可以作为这些类型的肿瘤诊断的标志。致瘤病毒引起的恶性转化作用引起了人们极大的关注肿瘤相关的病毒基因EB病毒（EBV）对于这些肿瘤组织细胞中相67肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCRSouthernblot杂交技术、Northernblot杂交技术基因芯片基因测序。肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCR68肿瘤基因的分子诊断意义

1.肿瘤的早期诊断和筛选2.肿瘤疗效监测3.肿瘤的预后判断4.肿瘤微转移检测

肿瘤基因的分子诊断意义1.肿瘤的早期诊断和筛选69肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中

应用举例肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中

应用举例70肿瘤的基因诊断课件71前列腺癌特异性基因DD3PCA3

DD3PCA3是一种非编码RNA的基因，定位于9q21～22染色体。它为前列腺癌特异性基因之一，DD3PCA3mRNA仅在前列腺癌细胞中表达，而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。

前列腺癌特异性基因DD3PCA3DD3PCA3是一种非编码72DD3mRNA14外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA14外显子扩增结果M：50bpDNA73DD3mRNA13外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA13外显子扩增结果M：50bpDNA74DD3mRNA34外显子扩增结果M：50bpDNALadder；1：LNCaP阳性对照；2～3：PCa；4：PIN；5～6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。DD3mRNA34外显子扩增结果M：50bpDNA75前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3mRNA检测结果前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3mRNA检测结果76

M：50bpDNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BPH；3：健康男性志愿者；4～10为PCa；11为试剂空白。

外周血DD3mRNA的RT-PCR扩增电泳图

M：50bpDNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BP77RT-PCR检测结果

44例PCa组中13例可见DD3mRNA阳性结果(其中B期、C期及D期分别有为0例、2例，11例)。30例BPH患者和18名健康男性志愿者标本中均未检出DD3mRNA。

RT-PCR检测结果44例PCa组中13例可见DD3mR78外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图

M：50bpDNA分子量标准；1：LNCaP阳性对照；2：阴性对照(女性)；3：BPH患者；4：健康男性志愿者；5～8：未治疗的PCa；9：试剂空白外周血DD3mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图M：5079巢式RT-PCR检测结果44例PCa组中21例可见DD3mRNA阳性结果(其中B期、C期、D期分别有1例、5例、15例)30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未见阳性结果

巢式RT-PCR检测结果44例PCa组中21例可见DD3m80两种方法对PCa患者外周血DD3mRNA检出率比较RT-PCR巢式RT-PCR+-+130-823注：χ2=20.2，P<0.001；Kappa＝0.629，P<0.001

两种方法对PCa患者外周血DD3mRNA检出率比较巢式RT81外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度

M:50bpDNA分子量标准；1～6:依次为105、104、103、102、101、1个LNCaP细胞/ml全血；7:阴性对照；8:试剂空白

外周血DD3mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度M:5082组别

DD3mRNA检出率(%，例数)

PCa（未治疗）

100%（11/11）

BPH

0%（0/30）

健康男性志愿者（对照）

0%（0/18）

注：经卡方检验，χ2＝59.0P<0.01不同前列腺疾病患者其外周血DD3mRNA检出率比较

巢式RT-PCR组别DD3mRNA检出率(%，例数)PCa（未治疗）83PCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3mRNA阳性率比较(%,例数)

临床分期DD3mRNA未治疗组内分泌治疗组B期100.0(1/1)0.0（0/2）C期100.0(3/3)25.0（2/8）*D期100.0(7/7)34.8(8/23)**合计100.0(11/11)30.3(10/33)**注：内分泌治疗组与未治疗组比较，*P<0.05，**P<0.01巢式RT-PCRPCa不同临床分期未治疗组和治疗组DD3mRNA阳性率比较84谢谢!谢谢!85树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-22Sunday,December18,2022人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。02:22:0402:22:0402:2212/18/20222:22:04AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2202:22:0402:22Dec-2218-Dec-22加强交通建设管理，确保工程建设质量。02:22:0402:22:0402:22Sunday,December18,2022安全在于心细，事故出在麻痹。12月-2212月-2202:22:0402:22:04December18,2022踏实肯干，努力奋斗。2022年12月18日2:22上午12月-2212月-22追求至善凭技术开拓市场，凭管理增创效益，凭服务树立形象。18十二月20222:22:04上午02:22:0412月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月222:22上午12月-2202:22December18,2022作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2022/12/182:22:0402:22:0418December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。2:22:04上午2:22上午02:22:0412月-22专注今天，好好努力，剩下的交给时间。12月-2212月-2202:2202:22:0402:22:04Dec-22牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2022/12/182:22:04Sunday,December18,2022相信相信得力量。12月-222022/12/182:22:0412月-22谢谢大家！树立质量法制观念、提高