临床血液学检验技术-实验课仁济-09异常骨髓片

《临床血液学检验》

实验九、异常骨髓片检验（三）血液学检验教研室

贫血骨髓片的检验上次实验情况

以小组为单位，观察贫血的骨髓涂片，并做Fe、

NAP及PAS染色讲解Fe、NAP及PAS染色，实验课目的要求、注意事项布置及实验报告内容

学生汇报结果，教师讲解

（一）上次实验情况

（二）小组看片并做细胞化学染色

观察贫血骨髓片

做Fe染色并观察

做NAP染色并观察做PAS染色并观察

（三）讲解贫血的细胞化学染色结合《骨髓检查教学课件》等讲解Fe染色结合《骨髓检查教学课件》等讲解NAP染色

结合《骨髓检查教学课件》等

讲解PAS染色Fe染色步骤及原理:细胞：红色复染阳性：蓝色亚铁氰化铁（普鲁士蓝）骨髓Fe3+固定亚铁氰化钾盐酸酸性亚铁氰化钾滴加在血膜上中性红滴加在血膜上1min冲洗20min冲洗细胞外铁晾干镜检细胞内铁铁染色试剂等：酸性亚铁氰化钾

200g/L亚铁氰化钾（用蒸馏水配制）5ml

浓盐酸1ml细胞外铁：细胞内铁:骨髓小粒中、晚幼红细胞细胞外铁：

分型特点（-）无颗粒（+）有少数铁颗粒或偶见铁小珠（++）有较多的铁颗粒或小珠（+++）有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状（++++）有极多铁颗粒、小珠，并有很多小块细胞内铁：

分型铁颗粒Ⅰ型铁颗粒1～2颗Ⅱ型铁颗粒3～5颗Ⅲ型铁颗粒6～10颗或粗大颗粒1～4颗Ⅳ型铁颗粒＞10颗或粗大颗粒≥5颗环铁铁颗粒5颗以上，围绕核周三分之一以上

FE染色的注意事项选择有骨髓小粒的涂片进行铁染色加浓盐酸要缓慢地加入并同时摇动试管观察细胞外铁时，应在复染前观察骨髓小粒。可在复染一半血膜后，细胞内铁和细胞外铁一同观察。环境中的污染铁常干扰结果观察，尤其是细胞内铁，有时使内铁无法观察。要注意两者的鉴别观察内铁时应注意调节微调

NAP染色步骤及原理:60s37℃45min10min晾干镜检冲洗冲洗冲洗固定液滴加在血膜上工作液滴加在血膜上甲基绿滴加在血膜上含萘酚底物细胞NAP释放萘酚固紫B固定细胞：绿色复染阳性：红色

NAP染色试剂：固定液（保存在4。C冰箱）二甲基甲酰胺（溶解底物）底物0.05M缓冲液（pH９.４-９.６）重氮盐（固紫B）10g/L甲基绿（自备）工作液NAP染色的结果判断：分级分值特点（-）0分胞质呈淡蓝色，无阳性染色颗粒（+）1分胞质呈均匀淡红色，无颗粒或含少量颗粒，但不超过胞质1/4（++）2分全部胞质中均匀红色或出现较粗的红色颗粒，不超过胞质1/2（+++）3分胞质中基本充满红色颗粒，但颗粒之间有空隙（++++）4分全部胞质中充满粗大红色颗粒或呈紫红色，颗粒基本掩盖胞核NAP染色的结果报告：数100个NUE结果：NAP阳性率为90%，200分（-）10个0×10＝0分（+）20个1×20＝20分（++）40个2×40＝80分（+++）20个3×20＝60分（++++）10个4×10＝40分阳性率90%200分

NAP染色的注意事项用新鲜的血片（一周之内）。固定等时，务必要辨认涂片的正反面染色每一步骤加试剂时，务必覆盖整个血膜，并要放置在水平的位置。冲洗时不应将反应液倒掉后冲洗染色前要做记号，以免出现差错要有阳性对照：其他片子或同一片中的其他细胞现假设该病人NAP阳性率为85%，积分为213分PAS染色步骤及原理:晾干镜检固定液滴加在血膜上HIO4滴加在血膜上雪夫氏液滴加在血膜上美兰滴加在血膜上5min15min（37℃）20min冲洗冲洗冲洗2min冲洗阳性：红色复染固定细胞：蓝色HIO4细胞糖类双醛基无色品红有色品红

PAS染色试剂：固定液：95%乙醇

10g/LHIO4

雪夫氏液（Schiff）：主要由碱性品红和偏重亚硫酸钠组成复染液：10g/L美兰

PAS染色的注意事项通过观察中性成熟粒细胞的阳性情况可得知本次染色是否成功观察各系细胞阳性情况PAS染色所用的骨髓片可以是陈旧的片子

细胞化学染色常规注意事项要有阳性对照：其他片子或同一片中的其他细胞。固定前务必要辨认涂片的正反面。细胞化学染色中的每一步骤中，加试剂时务必要覆盖整个血膜，并要放置在水平的位置。冲洗时不应将反应液倒掉后冲洗，以免杂质沉积。染色前要做记号，以免出现差错。

（四）目的要求掌握：常见红系疾病的骨髓象特点。掌握：铁染色及NAP染色。熟悉：贫血患者的骨髓诊断过程及PAS染色（尤其是原理及临床