血液学血细胞化学染色课件

第三章

血细胞化学染色

1医学ppt第三章

血细胞化学染色1医学ppt一、概述（一）研究对象

外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：

酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等

2医学ppt一、概述2医学ppt

（二）临床应用1.鉴别各类血细胞2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断3.观察疾病疗效和判断预后

3医学ppt

（二）临床应用1.鉴别各类血细胞3医学p

二、常用细胞化学染色方法

过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应α-醋酸萘酚酯酶染色铁染色

4医学ppt

过氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

5医学ppt过氧化物酶染色

（peroxidase,POX

新生态氧[O]↑过氧化氢（基质中）四甲基联苯胺（无色）联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁氰化钠蓝色颗粒（浆内酶部位）粒、单核细胞胞浆【原理】6医学pptPOX新生态氧过氧化氢四甲基联苯胺联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁【结果判断】

-、+、++、+++、++++弱阳性颗粒小，分布稀疏阳性颗粒稍粗，分布较密集强阳性颗粒粗大，密布于整个胞浆7医学ppt【结果判断】7医学ppt【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统

POX主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。

8医学ppt【正常血细胞染色反应】8医学ppt

2.单核细胞系统阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统红细胞系统巨核细胞系统阴性浆细胞组织细胞

9医学ppt9医学ppt10医学ppt10医学ppt【临床评价】

急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病

鉴别11医学ppt【临床评价】鉴别11医学ppt

1.急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病

阳性反应

（2）急性单核细胞白血病

弱阳性反应12医学ppt1.急性髓细胞白血病12医学ppt

2.急性淋巴细胞白血病

阴性反应或阳性率<3%(残留原粒细胞)13医学ppt2.急性淋巴细胞白血病13医学ppt

中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）14医学ppt中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrop磷酸萘酚钠（基质中）中性粒细胞胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝盐RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞浆中）水解【原理】Kaplow偶氮偶联法15医学ppt磷酸萘酚钠中性粒细胞胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚重氮盐＋紫黑【结果判断】

胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+~++++）16医学ppt【结果判断】16医学ppt【正常血细胞染色反应】1.中性成熟粒细胞阳性反应其他细胞呈阴性反应17医学ppt【正常血细胞染色反应】1.中性成熟粒细胞阳性反应17医18医学ppt18医学ppt

2.NAP积分值计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：

19医学ppt19医学ppt(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

阳性率全部阳性反应细胞之和

积分值各种阳性程度细胞的分值之和20医学ppt(-)0分20医学ppt3.参考值

积分值35-70分

(各实验室参考值不同)

21医学ppt3.参考值

积分值35-70分

(各实验室【临床评价】（1）细菌性感染与病毒性感染

（尤其是化脓性感染）

明显增加无明显变化22医学ppt22医学ppt(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病明显增加明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常23医学ppt(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病23医学ppt过碘酸-雪夫反应

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）24医学ppt过碘酸-雪夫反应

(糖原染色)

（periodica双醛基过碘酸雪夫试剂中的无色品红

紫红色化合物(附于含多糖类的胞浆内)乙二醇基(多糖类物质含有)氧化【原理】25医学ppt双醛基过碘酸雪夫试剂中紫红色化合物乙二醇基氧化【原理【结果判断】阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗粒状或块状。阴性胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。

26医学ppt【结果判断】阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗26医学pp【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞各阶段均呈阳性反应，阳性程度随细

胞的成熟逐渐增强。

阳性物呈细颗粒、均匀红色。27医学ppt【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统27医学ppt2.红细胞系统

阴性3.单核细胞系统

绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。28医学ppt2.红细胞系统28医学ppt4.淋巴细胞系统

大多数淋巴细胞呈阴性；

少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统

呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。29医学ppt29医学ppt【临床评价】1.红血病或红白血病幼红细胞阳性巨幼细胞性贫血幼红细胞阴性

30医学ppt【临床评价】1.红血病或红白血病幼红细胞阳性30医学p31医学ppt31医学ppt3.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病

阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。32医学ppt3.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病32医学（2）急性粒细胞白血病

少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3）急性单核细胞白血病

可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。33医学ppt（2）急性粒细胞白血病33医学pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）34医学pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholaα-醋酸萘酚酯酶（细胞内）α-醋酸萘酚（基质液中）α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝B）胞浆不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】35医学pptα-醋酸萘酚酯酶α-醋酸萘酚α-萘酚重氮盐胞浆不溶性灰黑色【结果判断】

胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。36医学ppt【结果判断】36医学ppt

氟化钠抑制试验

在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。37医学ppt37医学ppt

氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分100%38医学ppt氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分-抑制前阳性率或【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统

原始单核细胞

分化差阴性分化好阳性

幼稚及成熟单核细胞阳性被氟化钠抑制39医学ppt【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统被氟化钠抑制39医2.粒细胞系统

原粒细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统

多数阴性，少数弱阳性

不被氟化钠抑制40医学ppt2.粒细胞系统不被氟化钠抑制40医学ppt41医学ppt41医学ppt【临床评价】急单急粒急性早幼粒急粒单急淋α-NAE+++或-或++阳性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鉴别急性白血病类型42医学ppt【临床评价】急单急粒急性早幼粒急铁染色

（ferricstain）43医学ppt铁染色

（fer亚铁氰化钾亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含Fe部位)铁＋酸性环境普鲁士蓝反应骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁）骨髓中贮存铁幼红细胞内的Fe（细胞内铁）原理44医学ppt亚铁氰化钾亚铁氰化铁铁＋酸性环境普鲁士蓝【结果判断】

幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。

45医学ppt45医学ppt细胞外铁

低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团块状。

46医学ppt46医学ppt

再用油镜判断阳性程度，根据铁量多少分五级:（-）（+）（++）（+++）（++++）47医学ppt47医学ppt48医学ppt48医学ppt细胞内铁

存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁。

油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。49医学ppt细胞内铁49医学ppt

根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为四型:

Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型50医学ppt50医学ppt细胞内铁51医学ppt细胞内铁51医学ppt52医学ppt52医学ppt1.细胞外铁

+～++，约2/3人为++，约1/3人为+。2.细胞内铁

阳性率19%～44%Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型（无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞）【参考值】53医学ppt1.细胞外铁【参考值】53医学ppt

【临床评价】1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗

细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。54医学ppt【临床评价】54医学ppt

2.诊断铁粒幼细胞性贫血

铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增多，细胞外铁也常明显增多。55医学ppt55医学ppt1．掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。2．熟悉常用细胞化学染色方法的原理。本章目的要求56医学ppt1．掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。本章目的

完57医学ppt57医学ppt第三章

血细胞化学染色

58医学ppt第三章

血细胞化学染色1医学ppt一、概述（一）研究对象

外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：

酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等

59医学ppt一、概述2医学ppt

（二）临床应用1.鉴别各类血细胞2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断3.观察疾病疗效和判断预后

60医学ppt

（二）临床应用1.鉴别各类血细胞3医学p

二、常用细胞化学染色方法

过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色过碘酸-雪夫反应α-醋酸萘酚酯酶染色铁染色

61医学ppt

过氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

62医学ppt过氧化物酶染色

（peroxidase,POX

新生态氧[O]↑过氧化氢（基质中）四甲基联苯胺（无色）联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁氰化钠蓝色颗粒（浆内酶部位）粒、单核细胞胞浆【原理】63医学pptPOX新生态氧过氧化氢四甲基联苯胺联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁【结果判断】

-、+、++、+++、++++弱阳性颗粒小，分布稀疏阳性颗粒稍粗，分布较密集强阳性颗粒粗大，密布于整个胞浆64医学ppt【结果判断】7医学ppt【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统

POX主要存在于粒系细胞中。分化差的原粒细胞阴性;分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强。

65医学ppt【正常血细胞染色反应】8医学ppt

2.单核细胞系统阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统红细胞系统巨核细胞系统阴性浆细胞组织细胞

66医学ppt9医学ppt67医学ppt10医学ppt【临床评价】

急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病

鉴别68医学ppt【临床评价】鉴别11医学ppt

1.急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病

阳性反应

（2）急性单核细胞白血病

弱阳性反应69医学ppt1.急性髓细胞白血病12医学ppt

2.急性淋巴细胞白血病

阴性反应或阳性率<3%(残留原粒细胞)70医学ppt2.急性淋巴细胞白血病13医学ppt

中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）71医学ppt中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrop磷酸萘酚钠（基质中）中性粒细胞胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝盐RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞浆中）水解【原理】Kaplow偶氮偶联法72医学ppt磷酸萘酚钠中性粒细胞胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚重氮盐＋紫黑【结果判断】

胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+~++++）73医学ppt【结果判断】16医学ppt【正常血细胞染色反应】1.中性成熟粒细胞阳性反应其他细胞呈阴性反应74医学ppt【正常血细胞染色反应】1.中性成熟粒细胞阳性反应17医75医学ppt18医学ppt

2.NAP积分值计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：

76医学ppt19医学ppt(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

阳性率全部阳性反应细胞之和

积分值各种阳性程度细胞的分值之和77医学ppt(-)0分20医学ppt3.参考值

积分值35-70分

(各实验室参考值不同)

78医学ppt3.参考值

积分值35-70分

(各实验室【临床评价】（1）细菌性感染与病毒性感染

（尤其是化脓性感染）

明显增加无明显变化79医学ppt22医学ppt(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病明显增加明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常80医学ppt(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病23医学ppt过碘酸-雪夫反应

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）81医学ppt过碘酸-雪夫反应

(糖原染色)

（periodica双醛基过碘酸雪夫试剂中的无色品红

紫红色化合物(附于含多糖类的胞浆内)乙二醇基(多糖类物质含有)氧化【原理】82医学ppt双醛基过碘酸雪夫试剂中紫红色化合物乙二醇基氧化【原理【结果判断】阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗粒状或块状。阴性胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。

83医学ppt【结果判断】阳性胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗26医学pp【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞各阶段均呈阳性反应，阳性程度随细

胞的成熟逐渐增强。

阳性物呈细颗粒、均匀红色。84医学ppt【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统27医学ppt2.红细胞系统

阴性3.单核细胞系统

绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。85医学ppt2.红细胞系统28医学ppt4.淋巴细胞系统

大多数淋巴细胞呈阴性；

少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。5.巨核细胞系统

呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。86医学ppt29医学ppt【临床评价】1.红血病或红白血病幼红细胞阳性巨幼细胞性贫血幼红细胞阴性

87医学ppt【临床评价】1.红血病或红白血病幼红细胞阳性30医学p88医学ppt31医学ppt3.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病

阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状。89医学ppt3.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病32医学（2）急性粒细胞白血病

少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。（3）急性单核细胞白血病

可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大。90医学ppt（2）急性粒细胞白血病33医学pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）91医学pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholaα-醋酸萘酚酯酶（细胞内）α-醋酸萘酚（基质液中）α-萘酚

重氮盐（坚牢蓝B）胞浆不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】92医学pptα-醋酸萘酚酯酶α-醋酸萘酚α-萘酚重氮盐胞浆不溶性灰黑色【结果判断】

胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。93医学ppt【结果判断】36医学ppt

氟化钠抑制试验

在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。94医学ppt37医学ppt

氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分100%95医学ppt氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分-抑制前阳性率或【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统

原始单核细胞

分化差阴性分化好阳性

幼稚及成熟单核细胞阳性被氟化钠抑制96医学ppt【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统被氟化钠抑制39医2.粒细胞系统

原粒细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统

多数阴性，少数弱阳性

不被氟化钠抑制97医学ppt2.粒细胞系统不被氟化钠抑制40医学ppt98医学ppt41医学ppt【临床评价】急单急粒急性早幼粒急粒单急淋α-NAE+++或-或++阳性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鉴别急性白血病类型99医学ppt【临床评价】急单急粒急性早幼粒急铁染色

（ferricstain）100医学ppt铁染色

（fer亚铁氰化钾亚铁氰化铁(蓝色沉淀在含Fe部位)铁＋酸性环境普鲁士蓝反应