人工受精的实验室关键技术课件

猪人工授精－实验室关键技术

育种部报告内容猪人工授精的历史及现状猪人工授精的实验室设备猪人工授精的意义猪精液的人工采集猪精液的品质检查猪精液的保存处理猪精液处理后输精猪人工授精的历史及现状该技术始于20世纪30年代，已有70多年的历史我国始于上世纪50年代，未达到理想的推广程度20世纪90年代后，该技术得到迅速普及目前该技术已成为猪配种繁殖的主要手段之一猪人工授精的实验室设备

仪器显微镜、精子密度测定仪、电子天平、恒温水浴锅、恒温精液保存箱、pH计（试纸）、精子计数数器、移液器等

器皿温度计、量筒、烧杯、保温瓶、采精杯、玻璃棒等

消耗品纱布、输精瓶、输精管、乳胶手套、采精袋、稀稀释粉等猪精液的采集采集前的准备工作猪精液采精的方法精液采集前的准备工作实验室的准备精液稀释液准备操作人员的准备采精器皿的准备检测仪器的准备分装器皿的准备采精公猪的准备猪的人工采精方法电刺激采精法手握采精法假阴道采精法猪精液的品质检查品质检查的目的精液显微镜检查精液外观检查活率=直线运动的精子数/总精子数精子活率检查玻片升温至37℃取精液10µl制片

于37℃恒温台上

相差显微镜下

400倍观察精子

与受精能力相关精子活率精液品质的指标按0.1~1.0的十级评分法进行评估目测估测法活率要求

鲜精活率＞0.7才可进行稀释配制

保存精液活率＞0.6才可以使用精子计数注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释后精液注入计数室共有两个对称的计数室精子计数精子计数室及一个中方格精子计数方法以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。计算公式1ml原精液内的精子数＝5个中方个数的精子数×5×10×1000×稀释倍数

（如为原精液则不×稀释倍数）样本仪器观察精子活力及膜的完整性A.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阴性。B.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阳性。C.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阴性。D.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阳性。A)H33342标记所有精子细胞核呈现蓝色荧光；PI标记死精子的细胞核呈现红色荧光；发生顶体反应或顶体膜破损的精子被FITC-PNA标记,呈现绿色顶体。荧光显微镜下观察精子的活力和顶体状态流式细胞仪观察精子的活力和顶体状态B)C)猪精液的保存处理精液的稀释精液的分装精液的保存精液的冷冻及解冻精液的运输精液的分装精液的分装瓶装管装袋装分装简单方便用于冷冻保存输精方便，但需分装机分装后标注公猪品种公猪耳号生产日期稀释液名称稀释后分装的猪精液精液的保存保存温度常温（17℃等）低温（4℃等）冷冻（-196℃）生产上：常温17℃常温保存要求精液需缓慢降温，室温1~2h或纱布包裹每12h将精液摇匀1次，要轻缓均匀注意冰箱内温度的变化防止温度升高或降低减少保存箱开关次数，以减少对精子的影响使用前检查活率，活率＜0.6精液应弃之用稀释液保存的精液，应尽快用完精液的运输精液运输关键保温、防震、避光运输注意事项运输前应检查活率，低于0.7的精液严禁调出包装瓶（袋）应排尽空气，以减少运输震荡运输过程中，放入保温箱中保温（16~18℃）到达目的地，检查精子活率，合格方可接收运输过程中，应严格避光输精输精的时间输精的方法填写输精记录人工授精

（Artificalinsemination：AI）借助于专门的器械，用人工的方法采取公畜精液，经体外检查与处理后，再输入发情母畜的生殖道内，使其受胎的一种繁殖技术。人工授精技术包括：采精精液品质评定稀释保存运输输精等环节。输精的时间输精时间第一次输精：出现静立反射后12h左右进行第二次输精：第一次输精后8~12h进行竖耳，阴部红肿，出现静立反射母猪接收公猪或其它母猪的爬跨有爬跨其它母猪的行为发情母猪表现猪发情症状与人工授精最佳时间受精率：

静立前一天：10%；静立第一天：70%；静立第二天：98%；静立第三天：15%最佳时间：静立后12~24h输精方法子宫颈输精法intra-cervicalinsemination，intra-CAI子宫内输精法post-cervicalinsemination，post-CAI子宫角输精法deeputerineinsemination，DUI

宫颈输精法

消毒清洁双手，戴上消毒手套

清洁母猪外阴、尾根及臀部周围

取出灭菌后的输精管，在其前端涂上润滑剂

将输精管45℃向上插入母猪生殖道内直到子宫颈

取出精液轻轻摇匀，去除瓶嘴，接输精管，输精

输精完毕后抽出输精管输精流程输精次数

一个情期内输精两次(间隔8~12h)猪人工授精

精子在母畜生殖道运行中的损耗

射精后的精子在母畜生殖道内要通过三道屏障：子宫颈子宫腺窝与宫管结合部壶峡连接部精子在受精前的准备

（精子获能与顶体反应）

精子在母畜生殖道内存活时间

和维持受精能力的时间动物品种牛猪羊马维持存活时间15～56h50h48h6d维持受精能力18～20h8～12h12～16h4～20h各种家畜精液的稀释倍数和输精剂量家畜种类稀释比例输精计量（ml）有效精子数（亿）猪1:1~330~5010~20牛1:10~401~1.50.1~0.5马1:1~320~302.5~5.0羊1:1~30.10.2~0.5冻精解冻和输精过程中应注意的事项解冻水浴温度应为39℃适宜;三防(寒、热、光)