精细化学品分析实验

本文格式为Word版，下载可任意编辑——精细化学品分析实验精细化学品分析测验测验薄层色谱-染料的分开和鉴别一、测验目的学习薄层板的制备方法和操作技术。

二、测验原理1．吸附薄层色谱的原理及作用吸附薄层色谱的作用原理与吸附柱色谱一致，其识别在于吸附薄层色谱所用吸附的粒度较细小，且不是装在柱中，而是被平匀地涂布于玻璃板、塑料板或金属箔。形成确定厚度的薄层。被分开的样品制成溶液用毛细管点在薄层上靠近一端处，作为滚动相的溶剂（称为开展剂）那么靠毛细作用从点有样品的一端向另一端运动并带动样点前进。经过反复屡屡才吸附和溶解竞争后，受吸附力较弱而溶解度较大的组分将行进较长的路程。反之，吸附较强或溶解度较小的组分那么行程较短、从而使各组分间拉开距离。用刮刀分别刮下各组分的色点（或色带），各自以溶剂萃取。再蒸去溶剂后即得各组分的纯品。

吸附薄层色谱可用于少量（一般为0.5g以下）物质的分开，但更多应用于化合物的鉴定和其他分开手段的效果检测。

作为检测手段的理论依据是同种分子在极性、溶解度、分子大小和外形等方面完全一致，因而在薄层色谱中随开展剂爬升的高度亦应一致；

不同种分子在这诸方面中总会有一些轻微的区别，因而其爬升高度不会完全一致。假设将用其他分开手段所得的某一个组分在薄层板上点样开展后仍为一个点，那么说明该组分为同种分子。

即原来的分开方法达成了预期效果：假设开展后变成了几个斑点，那么说明该组分中仍有数种分子，即原分开手段未达成顶期效果。

吸附薄层色谱作为化合物鉴定的手段，其理论依据是每种化合物都有自己特定比移值。比移值也叫Rf值，是在薄层色谱中化合物样点移动的距离与开展剂前沿移动距离的比值，即例如，在下图所示的薄层板上，（b）中由A、B两种化合物组成的混合溶液被点在起始线上，用开展剂开展后，开展剂前沿爬升的高度为10，化合物A爬升高度为7，那么化合物A的Rf值是0.7。同理，化合物B的Rf值是0.4。

影响Rf值的因素好多，包括吸附剂的种类、活性等级、粒度、开展剂、温度等。因此即使同一化合物要在不同薄层板上重现统一Rf值很困难，因此仅凭Rf值来鉴定未知化合物是不成取的、还是理应用已知化合物在同一块薄层板上点样作对照对比稳当。如上图（C）所示，可以认为D和E为同一化合物，C那么与D和E不同。

薄层色谱吸附剂常见的有硅胶和氧化铝两类。薄层色谱用的硅胶分为：“硅胶H—不含胶劲剂；

‘硅胶G’一含煅石膏胶黏剂；

“硅胶HF254”一含荧光物质（可用于波长为254nm紫外光下查看荧光）；

“硅胶GF254”一既含煅石膏又含荧光剂等类型。

与硅胶好像，氧化铝也因含黏合剂或含荧光剂而分为氧化铝G、氧化铝HF254、氧化铝GF2542．薄层色谱的用途在测验室中，薄层色谱主要用于以下几种目的。

①作为柱色谱的先导。一般说来，使用某种固定相和滚动相可以在柱中分开的混合物，使用同种固定相和滚动相也可以在薄层板上分开开。所以常利用薄层色谱为柱色谱选择吸附剂和淋洗剂。

②监控回响进程。在回响过程中定时取样，将原料和回响混合物分别点在同一块薄层板上，开展后查看样点的相对浓度变化。若只有原料点，那么说明回响没有举行；

若原料点很快变淡，产物点很快变浓，那么说明回响在急速举行。若原料点根本消散，产物点变得很浓，那么说明回响根本完成。

③检测其他分开纯化过程。在柱色谱、结晶、萃取等分开纯化过程中，将分开出来的组分或纯化所得的产物溶样点板，开展后假设只有一个点，那么说明已经完全分开开了或已经纯化好了；

若开展后仍有两个或多个斑点，那么说明分开纯化尚未达成预期的效果。

④确定混合物中的组分数目。一般说来，混合物溶液点样开展后展现几个样点，就说明混合物中有几个组分。

⑤确定两个或多个样品是否为同一物质。将各样品点在同一块薄层板上开展后若各样点上升的高度一致，那么大体上可以认定为同一物质，若上升高度不同那么断定不是同一物质。

⑥根据薄层板上各组分斑点的相对浓度可粗略地判断各组分的相对含量。

⑦急速分开出少量纯真样品。为了尽快从回响混合物中分开出少量纯真样品做分析测试，可扩大薄层板的面积，加大薄层的厚度，并将混合物样液点成一条直线，一次可分开出几十毫克到约五百毫克的样品。

本测验以硅胶作为固定相，以乙酸乙酯一甲醇一水为滚动相。未知染料混合样和染料标准样分别点在薄层板上，用滚动相加以开展。染料色点可直接查看到无需举行显色处理。

染料组分可通过对比薄层板上各色点的位置或通过Rf值的测定举行鉴别。

三、仪器和试剂250mL广口瓶；

载玻片。烧杯；

玻璃棒；

烘箱；

毛细管；

铅笔；

直尺：滤纸。

罗丹明B、孔雀绿、品红等染料的乙醇溶液（1％左右）；

乙酸乙酯；

甲醇；

去离子水：青岛硅胶H60；

数甲基纤维素钠CMC-Na四、测验步骤1．薄层极的制备（1）取一400mL烧杯，参与250mL去离子水，再参与1.5gCMC-Na，放在煤气灯上小火加热，并用玻璃棒搅拌直至羧甲基纤维素钠溶解，放在一旁静置，冷却待用。

（2）取载玻片10块，用洗涤剂洗涤明净，标准是水能够在上面形成平匀薄膜。然后用纸擦净外观待用。

（3）称取硅胶H6010g置于100mL烧杯中，参与CMC澄清液，边加边磨，参与CMC溶液至提起玻璃棒时，残留液刚好是一滴一滴的而不是线状流下。

（4）将所得稠状物用药勺倒在载玻片上，然后振动使其平匀铺平，留神硅胶量不必太多，否那么铺出来的硅胶板太厚，在层折时速度慢，而且效果变差、平放使其自然琼干。

（5）将晾干的硅胶板提防放在一搪瓷托盘内，置于烘箱中经105℃活化30min。

（6）用纱手套将托盘从烘箱内取出，降温至50℃后转移到枯燥器内待用。

2、点样用毛细管在薄层板离底边1cm处点加各染料标准液和未知试样液。色点之间与色点到板边距离1cm。留神：点样量宜少。

3、开展（1）在一100mL锥形瓶内参与39mL乙酸乙酯、10mL甲醇和lmL水，晃动混合平匀得到开展剂。

（2）取一个250mL的广口瓶，在广口瓶底部放上一个比内腔直径略小的圆滤纸。

（3）把配好的开展剂倒入广口瓶中，留神广口瓶底部液层厚度应在0.5～0.8cm左右。盖上瓶盖，放置5～10min以保证瓶内平匀地被开展剂蒸气所饱和。

（4）把点过样的薄层板斜放入广口瓶中，略微倾斜靠在瓶壁上，尽快盖上顶底开展剂自下而上平匀上升。

（5）待开展剂前沿到达离板顶端约1cm处，取出薄层板，用铅笔在溶剂前沿处做一标记。

16）用电吹风机将薄层板上的溶剂吹干。

17）测量各染料样点移动的距离与开展剂前沿移动距离。

I（8）根据各染料样点移动的距离与开展剂前沿移动距离的比值测量并对比各染料色斑和未知样的Rf值，定出未知样的组成。

五、测验装置六、测验留神事项1．CMC-Na浓度在5‰～6‰为宜，太稀了硅胶层强度较差，轻易掉粉。

2．硅胶与CMC-Na混合要平匀，留神混合物内不要有包裹干硅胶的颗粒存在。3．硅胶与CMC-Na混合以稠状物能沿玻璃棒细直线往下流为宜，假设以滴状往下流那么大稀，应加硅胶。假设太稠不往下流那么应加水稀释。

4．硅胶铺在载玻片硅胶层厚度要适中，太厚轻易使硅胶板中间高两边低；

太薄那么轻易引起边沿高，中间低，两种处境都会影响使用效果。

七、斟酌题1．制备薄层板是参与羧甲基纤维素钠的作用是什么？假设不加会展现什么处境？2．点样的浓度太浓时在开展的过程中会展现什么处境？3．薄层色谱板为何要举行“活化”？4．开展前层析缸内空间为什么要用溶剂蒸气预先举行饱和？测验醋酸甲酯、环己烷、甲醇等混合样品的色谱测定一、[目的要求]1、进一步掌管色谱定量分析的原理2、了解校正因子的含义，用途和测定方法3、学会面积归一化定量方法二、[根本原理]色谱定量分析的依据是，在确定条件下，被测物质的重量w与检测器的响应值成正比，即：

Ai:被测组分的峰面积；

hi:被测组分的峰高；

Fi:比例常数（以峰面积表示时）

Fih:比例常数（以峰高表示时）

所以定量时需要：

（1）切实测量响应信号A或h。

A或h是最根本的定量数据，h可以直接测得，A和其他参数计算求得。

如：A=1.065hW1/2（2）切实求得校正因子F响应值除正比于组分含量外，与样品的性质也有关，即在一致的条件下，数量相等的不同物质产生的信号的大小可能不同。因此，在举行定量分析时需加以校正。

由前述可知：

即单位峰面积所代表的样品重量，由于受操作条件影响较大，F的测定较困难。所以在实际操作中都采用相对校正因子f′。f′为组分i和标准物质s的十足校正因子之比：

Wi、Ws分别为待测物和标准物之重量；

As、Ai分别为待测物和标准物之峰面积。f′与检测器类型有关，而与检测器布局特性及操作条件无关。

因物质的量可以用重量或摩尔表示，故：

其中Mi，Ms——分别为待测物和标准物的分子量f′、f可以从文献查得，亦可直接测量。切实称量确定重量的待测物质和标准物质，混匀后进样，分别测得峰面积，即可求其校正因子。

（3）选择适合的定量方法常用的定量方法有好多种，本测验采用归一法。

归一法就是分别求出样品中全体组分的峰面积和校正因子，然后依次求各组分的百分含量。

归一法优点：干脆；

进样量无需切实；

条件变化时对结果影响不大。

缺点：混合物中全体组分务必全出峰；

务必测出全体峰面积。

[仪器试剂]气相色谱仪（附TCD、FID）；

微量注射器：1μL、5μL；

三组分混合样：甲醇，醋酸甲酯，环己烷[色谱条件]色谱柱：GDX-102(60—80目)。

温度：Tc——100-120℃；

TD——150℃；

Ti——150℃载气：H245mL/min三、[测验步骤]按上述条件开机调试，待仪器稳定后依次举行。

1、定性分析（1）调记录纸速为5cm/min，用1μL注射器进分别进甲醇，醋酸甲酯，环己烷0.1μL，记录色谱图，切实测量各峰的留存时间（tR）。

（2）在一致条件下进0.1μL—0.2μL三组分混合样记录色谱图，切实测量各峰的留存时间（tR）。

2、测量校正因子于分析天平上切实称取三标准试样与同一小瓶中混匀，在设定的条件下进样0.1μL—0.2μL，记录峰面积。

3、