微生物的实验室培养

微生物的实验室培养特点：小简低微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。1.分类一、微生物芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。放线菌⑴结构：单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖孢子丝

|孢子菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。

细菌的菌落特征因种而异菌落菌落单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的

重要依据。C、H、O、N、P、S五大营养物质碳源氮源生长因子水无机盐微生物化学元素组成：2.营养及功能二、培培养基基培养基基（培培养液液）是是由人人工方方法配配制而而成的的，专专供微微生物物生长长繁殖殖使用用的混混合营营养基基质。。（1））按物物理状状态分分：固体培培养基基和液液体培培养基基、半半固体体培养养基。（2））按功功能分分：选择培培养基基和鉴鉴别培培养基基。（3））按成成分分分：天然培培养基基和合合成培培养基基。1.培培养基基的类类型固体培培养基基：菌菌落液体培培养基基：表面生生长均匀混混浊生生长沉淀生生长半固体体培养养基：：2.不不同的的微生生物往往往需需要采采用不不同的的培养养基配配方3.不不管哪哪种培培养基基，一一般都都含有有水、碳碳源、、氮源源、无无机机盐等营养养物质质，另另外还还需要要满足足微生生物生生长对对pH、特殊殊营养物质质以及氧气气的要求。1000mL牛肉膏膏蛋白胨培培养基的营营养构成培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g氮源和维生素NaCl5g无机盐H2O定容在1000mL氢元素、氧元素4.培养基基的用途液体培养基基：增菌、、工业生产产固体培养基基：纯化（（分离），，鉴鉴定、活菌菌计数、保保藏藏菌种半固体培养养基：1.无菌技技术的概念念无菌操作泛泛指在培养养微生物的的操作中，，所有防止止杂菌污染染的方法。。成功地培养养微生物的的关键。三、无菌技技术（1）消毒毒定义：2.消毒与与灭菌的概概念及两者者的区别（2）灭菌菌的定义：：3.常用的的消毒与灭灭菌的方法法1.灼烧灭灭菌灭菌的方法法：2.干热热灭菌：160-170℃℃下加热1-2h。。3.高压压蒸气灭菌菌100kPa、121℃下下维持15-30min.2.请你判判断以下材材料或用具具是否需要要消毒或灭灭菌。如果果需要，请请选择合适适的方法。。（1）培培养细菌用用的培养基基与培养皿皿（2）玻玻棒、试管管、烧瓶和和吸管（3）实实验操作者者的双手2.请你判判断以下材材料或用具具是否需要要消毒或灭灭菌。如果果需要，请请选择合适适的方法。。（1）培培养细菌用用的培养基基与培养皿皿（2）玻玻棒、试管管、烧瓶和和吸管（3）实实验操作者者的双手答：（1））、（2））需要灭菌菌；（3））需要消毒毒。微生物实验验室培养的的基本操作作程序1.器具具的灭菌2.培养养基的配制制3.培养养基的灭菌菌4.倒平平板5.微生生物接种6.恒温温箱中培养养7.菌种种的保存牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL四、实验操操作1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．64．过滤：：这一步可可以省去。。5．分装：：分装过程程中注意不不要使培养养基沾在管管口或瓶口口上，以免免沾污棉塞塞而引起污污染。分装装三角烧瓶瓶的量以不不超过三角角烧瓶容积积的一半为为宜。6．加塞7．包扎操作步骤8．灭菌:将50ml培养基用用玻棒转移移至三角锥锥瓶中，塞塞上棉花塞塞，包上牛牛皮纸，再再放入高压压蒸气灭菌菌锅，在压压力为100kPa、温度为为121℃℃，灭菌15～30min。。将培养基基用旧报纸纸包裹，放放入干热灭灭菌箱内，，在160～170℃下灭灭菌2h。。9．倒平板板:待培养基冷冷却到50℃左右右时，在酒酒精灯附近近倒平板。。（倒平板板操作见课课本）2d后观察平平板，无杂杂菌污染才才可用来接接种。倒平板技术术①将灭过菌的的培养皿放放在火焰旁旁的桌面上上，右手拿拿装有培养养基的锥形形瓶，左手手拨出棉塞塞。1234倒平板技术术②右手拿锥形形瓶，使瓶瓶口迅速通通过火焰。。1234倒平板技术术1234③用左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。倒平板技术术1234④等待平板冷冷却凝固，，大约需5~10min。然然后，将平平板倒过来来放置，使使皿盖在下下，皿底在在上。9．倒平板板:待培养基冷冷却到50℃左右右时，在酒酒精灯附近近倒平板。。（倒平板板操作见课课本）2d后观察平平板，无杂杂菌污染才才可用来接接种。10．无菌菌检查：将灭菌的培培养基放入入37℃的的温室中培培养24——48小时时，以检查查灭菌是否否彻底。（二）纯化化大肠杆菌菌接种方法有有：平板划线法法和稀释涂涂布平板法法微生物的接接种技术：：平板划线的的操作方法法一旦划破，，会造成划划线不均匀匀，难以达达到分离单单菌落的目目的；二是存留在在划破处的的单个细胞胞无法形成成规矩的菌菌落，菌落落会沿着划划破处生长长，会形成成一个条状状的菌落。。一旦划破，，会造成划划线不均匀匀，难以达达到分离单单菌落的目目的；二是存留在在划破处的的单个细胞胞无法形成成规矩的菌菌落，菌落落会沿着划划破处生长长，会形成成一个条状状的菌落。。稀释涂布平平板法1.将分别别盛有9mL水的6支试管灭灭菌，并按按101~106的顺序编号号。2.用移液液管吸取1mL培养养的菌液，，注入第二二支试管中中。用手指指轻压移液液管上的橡橡皮头，吹吹吸三次，，使菌液与与水充分混混匀。3.从101倍稀释的试试管中吸取取1mL稀稀释液，注注入102倍稀释的试试管中，重重复第2步步的操作。。依次类推推，直到完完成最后一一支试管的的稀释。注意：移液管需要要经过灭菌菌。操作时时，试管口口和移液管管离火焰1~2cm处.涂布平板的的所有操作作都应在火火焰附近进进行。结合合平板划线线与系列稀稀释的无菌菌操作要求求，想一想想，第2步步应如何进进行无菌操操作？问题讨论涂布平板的所所有操作都应应在火焰附近近进行。结合合平板划线与与系列稀释的的无菌操作要要求，想一想想，第2步应应如何进行无无菌操作？应从操作的各各个细节保证证“无菌”。。例如，酒精精灯与培养皿皿的距离要合合适、吸管头头不要接触任任何其他物体体、吸管要在在酒精灯火焰焰周围等等。。问题讨论微生物的恒温温培养微生物的恒温温培养微生物的恒温温培养菌种的保存1.临时保藏：接种到固体斜斜面培养基，，菌落长成后后置于4℃冰冰箱保存。2.长期保存：甘油冷冻管藏藏法四、课题成果果评价（一）培养基基的制作是否否合格如果未接种的的培养基在恒恒温箱中保温温1～2d后无菌落生生长，说明培培养基的制备备是成功的，，否则需要重重新制备。（二）接种操操作是否符合合无菌要求如果培养基上上生长的菌落落的颜色、形形状、大小基基本一致，并并符合大肠杆杆菌菌落的特特点，则说明明接种操作是是符合要求的的；如果培养养基上出现了了其他菌落，，则说明接种种过程中，无无菌操作还未未达到要求，，需要分析原原因，再次练练习。（三）是否进进行了及时细细致的观察与与记录培养12h与24h后的大肠杆杆菌菌落的大大小会有明显显不同，及时时观察记录的的同学会发现现这一点，并并能观察到其其他一些细微微的变化。这这一步的要求求主要是培养养学生良好的的科学态度与与习惯。从细胞的化学学元素组成来来看，培养基基中为什么都都含有这些营营养成分？C、H、O、、N、P、S五大营养物质质碳源氮源生长因子水无机盐微生物化学元元素组成：思考1无菌技术除了了用来防止实实验室的培养养物被其他外外来微生物污污染外，还有有什么目的？？答：无菌技术术还能有效避避免操作者自自身被微生物物感染。思考21.培养基灭灭菌后，需要要冷却到50℃左右时时，才能用来来倒平板。你你用什么办法法来估计培养养基的温度？？答：可以用手手触摸盛有培培养基的锥形形瓶，感觉锥锥形瓶的温度度下降到刚刚刚不烫手时，，就可以进行行倒平板了。。问题讨论需要使锥形瓶瓶的瓶口通过过火焰的目的的是什么？思考3答：通过灼烧烧灭菌，防止止瓶口的微生生物污染培养养基。平板冷凝后，，为什么要将将平板倒置？？答：平板冷凝凝后，皿盖上上会凝结水珠珠，凝固后的的培养基表面面的湿度也比比较高，将平平板倒置，既既可以使培养养基表面的水水分更好地挥挥发，又可以以防止皿盖上上的水珠落入入培养基，造造成污染。思考4在倒平板的过过程中，如果果不小心将培培养基溅在皿皿盖与皿底之之间的部位，，这个平板还还能用来培养养微生物吗？？为什么？思考5答：空气中的的微生物可能能在皿盖与皿皿底之间的培培养基上滋生生，因此最好好不要用这个个平板培养微微生物。1.为什么在在操作的第一一步以及每次次划线之前都都要灼烧接种种环？在划线线操作结束时时,仍然需要要灼烧接种环环吗？为什么么？思考6答：第一步灼灼烧是为了避避免接种环上上可能存在的的微生物污染染培养物；每每次划线前灼灼烧是为了杀杀死上次划线线结束后，接接种环上残留留的菌种，使使下一次划线线时，接种环环上的菌种直直接来源上次次划线的末端端，从而通过过划线次数的的增加，使每每次划线时菌菌种的数目逐逐渐减少，以以便得到菌落落。划线结束束后灼烧，能能及时杀死接接种环上残留留的菌种，避避免细菌污染染环境和感染染操作者。2.在灼烧接接种环之后，，为什么要等等其冷却后再再进行划线？？答：以免接种种环温度太高高，杀死菌种种。思考7答：划线后，，线条末端细细菌的数目比比线条起始处处要少，每次次从上一次划划线的末端开开始，能使细细菌的数目随随着划线次数数的增加而逐逐步减少，最最终能得到由由单个细菌繁繁殖而来的菌菌落。在作第二次以以及其后的划划线操作时，，为什么总是是从上一次划划线的末端开开始划线？思考8配制斜面培养养基的作用是是什么？试管管为什么要加加棉塞？思考9增大接种面积积。棉塞保持通气气并防止杂菌菌感染等例1.有关关微生物营养养物质的叙述述中，正确确的()A.是碳源的的物质不可能能同时是氮源源B.凡碳源都都提供能量C.除水以外外的无机物只只提供无机盐盐D.无机氮源源也能提供能能量典例解析例1.有关关微生物营养养物质的叙述述中，正确确的()A.是碳源的的物质不可能能同时是氮源源B.凡碳源都都提供能量C.除水以外外的无机物只只提供无机盐盐D.无机氮源源也能提供能能量典例解析D例2.下面面对灭菌的理理解不正确的的是()A.防止杂杂菌污染B.消灭杂杂菌C.培养基