两种多囊卵巢综合征大鼠模型造模方法的比较

两种多囊卵巢综合征大鼠模型造模方法的比较贾莉婷;荣守华;刘艳丽;马葆靖;张展;李肖甫;赵德华;张秋菊淳B瑞莹;宋晓妍【摘要】Airti:Tocomparetwokindsofpolycysticovariessyndromeratmodelsinducedbyletrozoleanddehydroepiandrosterone.Methods:Ratsagedsixweeksand23days(each60cases)wereadministeredletrozoleandDHEArespectivelytoinducePCOSmodel.Increasedweightofrats,oestrouscycle,morphologyandhistologyofovary,serumhormonelevelsandtheexpressionofAR.LHRintheovarywereexamined.Results;①Thetwoexperimentalgroupsshowedlessgranularcelllayerandproliferatedmesenchymainovary.②Theincreasedweight,volume,andrelativequalityofovariesinletrozoleexperimentalgroupswerelargerthanthatincontrol(F=13.136,9.778and6.544,P<0.05);InDHEAgroup,thevolumeofovrianintheexperimentalgroupwassignificantlysmallerthanincontrols(F=19.383,P<0.001).③Thelevelofluteinizinghormone(LH)andtestosterone(T)ofletrozoleexperimentalgroupweresignificantlyhigherthanincontrols,serumfolliclestimulatinghormone(FSH),estradiol(E2)andprogesterone(P)ofletrozoleexperimentalgroupwassignificantlylowerthancontrols.TandE2ofDHEAexperimentalgroupweresignificantlyhigherthancontrols,FSHofDHEAexperimentalgroupweresignificantlylowerthancontrols(P<0.05).④TheexpressionofAR.LHRintheovaryofletrozoleexperimentalgroupweresignificantlyhigherthanincontrols(P<0.05).InDHEAgroup,theexpressionofARintheovarywassignificantlyhigherthanincontrols(P<0.05).Conclusion:©ComparedwithDHEAgroups,PCOSmodelinducedbyletrozoleinseveralwaysismoresimilartothehumandiseaseanditisarelativeperfectratmodel.(2)Theex-pressionofAR.LHRinratovarycanbeevaluatedindexesforproteinlevelinPCOSmodel.%目的：采用来曲唑和脱氢表雄酮(DHEA)建立多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型，并对2种模型进行比较。方法：6周龄和23日龄SD雌性大鼠各60只分别用于来曲唑和DHEA建模，均随机分为实验组、溶剂对照组和空白对照组各20只；从建模前后大鼠体质量增长、动情周期、卵巢变化、血清性激素水平、卵巢中雄激素受体(AR)和黄体生成素受体(LHR)等指标进行模型评价。结果：©2种造模方法的实验组大鼠卵巢颗粒细胞层明显减少，间质增生。②来曲唑造模的实验组实验前后体质量增加量、卵巢体积和相对质量均大于对照组(F=13.136F9.778和6.544,P均v0.05);DHEA造模的实验组仪卵巢体积小于对照组(F=19.383,P<0.001)。③来曲唑造模的实验组黄体生成素、睾酮(T)含量高于对照组，而卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)低于对照组(P<0.05);DHEA造模组的实验组血清T、E2高于对照组,FSH低于对照组(P<0.05)。④来曲唑造模的实验组AR、LHR含量均高于对照组(P<0.05);DHEA造模的实验组仅AR高于对照组(P<0.05)。结论：①来曲唑大鼠模型更接近于人PCOS特征，是相对理想的PCOS模型。②AR、LHR参与了多囊状卵巢的形成，可作为PCOS模型蛋白质水平的评价指标。【期刊名称】《郑州大学学报(医学版)》【年(卷)，期】2011(046)004【总页数】5页(P538-542)【关键词】多囊卵巢综合征；来曲唑；脱氢表雄酮；动物模型；雄激素受体；黄体生成素受体；大鼠【作者】贾莉婷;荣守华;刘艳丽;马葆靖;张展;李肖甫;赵德华;张秋菊淳B瑞莹;宋晓妍【作者单位】郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州I450052;郑州大学第三附属医院保健部，郑州I450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052;郑州大学第三附属医院检验科，郑州450052【正文语种】中文【中图分类】R711.75多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌疾病，其发病率在育龄妇女中为5%~10%［1］，发病机制至今尚未明确。现多采用动物模型［2-4］研究PCOS的病因、发病机制及临床诊断和治疗策略，但模型选择的正确与否直接影响研究结果。来曲唑建模法和脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建模法是国内外使用较多的2种造模方法:来曲唑通过抑制雄激素向雌激素转化的限速酶芳香化酶的活性，导致体内雄激素的增高，动物选用6周龄SD雌鼠(相当于女性育龄期);DHEA是胆固醇合成雄激素的中间产物，直接导致雄激素的水平增高，动物选用23日龄SD雌鼠(相当于女性青春前期)。目前对PCOS模型的评价多限于动情周期、卵巢形态和组织学以及血清激素水平等几个方面。作者采用来曲唑建模法和DHEA建模法，在上述评价指标基础上，加入雄激素受体(androgenreceptor,AR)和黄体生成素受体(luteinizinghormonereceptor，LHR)这2个指标，评价2种模型的差异。1材料与方法1.1实验动物分别选用6周龄和23日龄清洁级SD雌性大鼠各60只，均采用随机数字表分为实验组、溶剂对照组和空白对照组，每组20只［购于河南省实验动物中心，许可证号SCXK(豫)2005-0001］。清洁级饲养，环境温度20~24°C,湿度40%~60%，每天光照10h，自由饮水，喂以颗粒饲料。PCOS模型的建立1.2.1来曲唑法将来曲唑溶于10g/L羧甲基纤维素(CMC)中，实验组大鼠灌胃来曲唑1mg/(kg・d),溶剂对照组灌胃10g/LCMC，均于上午9时连续灌服21d,空白对照组正常饲养。DHEA法将DHEA溶于0.2mL甘油中，实验组大鼠皮下注射DHEA60mg/(kg・d),溶剂对照组皮下注射0.2mL甘油，均于上午10时连续皮下注射21d，空白对照组正常饲养。1.3大鼠动情周期及体质量检测每天对大鼠进行阴道涂片，巴氏染色后观察动情周期的变化;每3d测量大鼠的体质量并记录，绘制大鼠体质量的增长变化曲线。1.4大鼠血清性激素，卵巢体积、相对质量及组织学检查实验组在最后一次应用来曲唑和DHEA24h(并禁食12h)后，对大鼠称量后行乙醚麻醉，快速心脏取血法致死(对照组选取在动情间期)，取血清置-20C冻存备用，应用放射免疫法测定黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)，试剂盒购自天津九鼎医学生物工程有限公司。取双侧卵巢，观察卵巢形态学变化、称量，用游标卡尺测量卵巢长、宽和厚度，计算卵巢体积［5］；根据大鼠体质量和卵巢体质量计算卵巢相对质量［6］。一侧卵巢置于体积分数为10%甲醛溶液中固定，另一侧卵巢用PBS冲洗后-80C冻存备用。以卵巢最大平面作为待检平面行石蜡包埋，每个石蜡块分别以4pm厚度切片2次，行HE染色。1.5大鼠卵巢组织中AR、LHR蛋白的检测加入蛋白裂解液研磨大鼠卵巢组织，低温高速离心后取上清，采用考马斯亮蓝染料结合法检测蛋白浓度。100g/LSDS分离蛋白质，经20V1h将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，用50g/L脱脂奶粉封闭。AR多克隆抗体(SC-816)、LHR多克隆抗体(SC-25828)均购自美国SantaCruz公司，抗体均按1:200稀释;内参为&-actin(购自北京博奥森生物公司)，抗体按1:400稀释。经增强化学发光法显影，用BiosensDigitalSystem分析目的条带灰度值，以目的条带与P-actin灰度值比值作为目的蛋白的相对表达量。1.6大鼠卵巢组织中AR、LHR蛋白的定位应用SP法检测卵巢组织中AR、LHR蛋白的定位表达，一抗同免疫印迹法，抗体按1:100稀释。1.7统计学处理采用SPSS16.0进行分析，应用单因素方差分析和LSD-t检验分析各组大鼠实验前后体质量增加量、卵巢体积、卵巢相对质量、血清性激素水平、AR和LHR蛋白相对表达量的差异，检验水准a=0.05。2结果2.1PCOS模型大鼠动情周期观察来曲唑造模的实验组大鼠在灌胃12d后全部失去规律性动情周期，阴道涂片的细胞学特征为大量的白细胞，均处于动情间期时相;DHEA造模的实验组大鼠动情周期变化极不规律;各对照组均保持规律的动情周期。2.2各组大鼠实验前后体质量增加量、卵巢体积和卵巢相对质量比较见表1。表1各组大鼠实验前后体质量增加量、卵巢体积和卵巢相对质量比较*与实验组比较，P<0.05。来曲唑法DHEA法组别n实验前后体质量增加量/g卵巢体积/mm3质量/10-5实验前后体质量增加量/g卵巢相对卵巢体积/mm3卵巢相对质量/10-5±5.590.049±0.00617.95±2.19溶剂对照组2070.86±17.38*。1画曰侦6〜8必0、MMB谨反知BffiK-iHwtts回豆ttwsOIWBSH^SMia^s^§sslsis®8SMi、长辄巨sls^、低*CNgsi^isssMia^f、^xssss^^、ttws屈ti®rnCNdZ8ICNrn%.6I。6哭寸是98R69罚约RI.O1。。.0Vrn80.0寸。。.01。。.0V1。。.0VLnIcnCNI。8脂。8.68。。.2寸80.09LH.6旱。936。"®®锹u_以脂。寸.91*寸。。.孚贸。.。寸Ln.%LH9.9CNI*寸rnCNw。9.旨机。。.孚Lnzo.o&Z.寸旱ZO.M0CN®®反{n制孚.旱。8.91*9。。.孚9Ln0.098.Lnw06OOZI*何2。寸.91机。。.孚仁。.。Ln6CNrn(I■_l.6n)、(d)d(I■_l.6u)、&a)d(I■_l.n)、HSu_(I■_l.n)、H_l(I■_l.6n)、(l—)du园熙。Ln。.。Vd&莹黑®锹昕2dZZ6CNII%.6寸。1.3198.989Ln.寸寸孚Z6二。。.0V1。。.01。。.0Vrnoo.o昏。.01。。.0V"M.IW69.Z寸z.owS6.089.*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