紫外可见分光光度计的应用课件

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紫外可见分光光度计的应用及日常维护和注意事项内容提要

一、紫外可见分光光度计的简单原理

二、影响紫外仪器质量的几个重要指标

三、紫外系列顶级产品介绍——19系列

四、19系列紫外可见分光光度计的特点

五、应用中的几个问题

一、紫外可见分光光度计的简单原理：朗伯定律（1760年）：物质对光的吸收与物质厚度成正比:A=f(b)比耳定律（1852年）：物质对光的吸收与物质浓度成正比:A=f(c)朗伯比耳定律：A=εbc；成立条件：①单色光②稀溶液注：朗伯比耳定律A=εbc,是一切UV-VISS设计者、制造者、使用者必须严格遵守的最基本、最重要的定律。

应用领域：

紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、使用很多的分析仪器，已在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。

可以说有实验室的地方就会有它。

二、影响紫外仪器质量的几个重要指标光度准确度与重复性定义：多次测量的光度平均值与真值之差为光度准确度（ΔT、ΔA）；最大值与最小值之差为光度重复性。测定方法：用标准滤色片或重铬酸钾溶液，进行波长扫描、峰值检出，连续测量三次。重要性：严重影响测定的准确度，是测定误差的主要来源。见下图：

2杂散光定义：单色器额定通带以外的透射辐射能量与总的透射能量之比，也就是光谱通带以外“不要的”光通量就是杂散光。测定方法：标准滤色片法或NaI(220 nm处)、NaNO2(340nm处)。主要来源：光栅、光学元件、电光源系统、化学发光、试池荧光、粒子散射等。重要性：限制测定浓度的上限从而影响分析的准确度。

举例：如对某生物酶检测：它的吸光度为1.95Abs,要求1%误差；仪器的SL=0.2%，行不行？不行！因其误差为3.6%！只有SL=0.05%,才可达1%!请见上图！

4稳定性（即漂移）定义：一小时内仪器自身的漂移量。重要性：如不好，影响测定的重现性与准确度，严重甚至根本无法测定。影响稳定性的主要因素：光源（氘灯：电源1%-光6.7%；钨灯：电源1%-光3.4%）、光电倍增管(电源1%-放大后的信号12%)、温度、环境等

6波长准确度与重复性波长准确度：多次测量平均值与真值之差。波长重复性：多次测量值中最大最小值之差。测定方法：用汞灯（871.60、546.07nm、253.65nm)、氘灯(656.1nm、486.0nm)或者用标准滤色片。重要性：吸光度是随波长而变化的，波长准确度不合格，测量的吸光度肯定也不准确。

1、性能指标（与国外同档次仪器的比较）

2、功能指标：光度测量：测量样品在指定波长下的吸光度或透过率。可进行单波长或多波长测量

并可对测量值进行简单的计算。

光谱扫描：测量样品在指定的波长范围内吸光度或透过率随波长变化的曲线可对扫描参数进行任意设置。

多文件管理；同时可实现对图谱进行峰值检出、四则运算、A-T转换、1—4次导数、三维图谱等多种功能。

可对校正曲线（工作曲线）自动进行1—4次的曲线拟合，并自动计算出未知样品的浓度。

时间扫描：测量样品在指定波长下吸光度随时间变化的曲线。常用于研究化学反应历程、化学动力学等。

DNA/蛋白质检测器：测量DNA/蛋白质的浓度。提供三种方法，快速测量DNA/蛋白质的浓度。四、我公司紫外可见分光光度计19系列主要特点杂散光小（1901-0.015%）：采用进口闪耀全息优质光栅和生产工艺，保证了整机的杂散光非常小，从而大大扩展了仪器分析测试样品浓度的上限，可减少分析测试误差，拓宽仪器的适应范围(DNA)。噪声小（1901-0.0004）：采用进口氘灯、光电倍增管和电子元件等，检测工艺先进，保证了整机的噪声非常小，进一步降低了仪器分析测试样品浓度的下限,扩展了仪器的适应范围3、光度准确度好（指标：±0.3%T；实测±0.1%T）：由于仪器的杂散光很小、噪声很小，所以，大大提高了仪器的光度准确性，保证了分析测试数据的可靠性。

五、紫外产品应用中可能遇到问题的处理方法１．开机后仪器无任何反应Ａ．电源线接触不良．Ｂ．没有供电电压．Ｃ．电源开关处的２Ａ保险管熔断．２．自检波长原点时电机有异常响声，波长电机自检错误．此故障为撞丝杆(正弦臂越过光电开关)．解决办法为关闭电源，打开仪器的底板，用手拨动正弦机构与电机的联结轴，把正弦臂转到丝杆的中间位置即可．

３．钨灯自检不过Ａ．样品池挡光．检查样品池中是否有异物，或光路中有其他物品挡光．(18和T6系列要设置正确的样品池模式)Ｂ．钨灯坏，更换．（注意，更换前要用干净的纸套将光源镜罩上）Ｃ．光源镜氧化生锈．光源镜的表面为金属镀膜，长期处于潮湿及有腐蚀气体的环境中，金属膜易氧化生锈．（联系我们，更换光源镜）Ｄ．钨灯与钨灯架接触不良，或钨灯架与钨灯座接触不良．解决方法是用小内六角或一字解刀分别紧固．

４．联机自检时，样品池原点定位错误Ａ．样品池为固定池，软件设置为多联池．将软件设置为固定池，重新开机自检．（反之亦然）Ｂ．多联池电机连线插头松动．Ｃ．多联池光电开关连线插头松动．５．联机自检时，氘灯定位错误，以及波长定位错误．Ａ．氘灯坏，更换．Ｂ．光源镜氧化生锈．Ｃ．灯电源板上的５００mA保险管熔断，解决方法是18打开仪器上盖，将灯电源板上的５００mA保险管更换．19的保险管在仪器后面。

８．基线指标超标Ａ．预热时间不够．Ｂ．仪器噪声大．注意：做基线前必须校基线，１８系列仪器基线校正时用中速，１９系列仪器基线校正时用慢速．９．仪器噪声大Ａ．供电电压不稳，需安装稳压器．Ｂ．光源镜氧化，更换光源镜．Ｃ．样品池挡光，需对样品池进行适当调整．Ｄ．没做暗电流．把黑挡块插入样品池，做暗电流．Ｅ．光路中镜子很脏，须处理干净．（注意：光源镜只能用洗耳球吹，不能用任何东西擦拭

１０．仪器无法与ＰＣ联机Ａ．RS232串口连线松动，重新插好，把两个螺丝拧紧．Ｂ．软件与实际联接的COM口不一致．Ｃ．地址可能被其他程序占用，可更换COM口解决此问题．Ｄ．ＰＣ机串口损坏．１１．仪器无法打印(指单机的18系列和T6系列)Ａ．并口打印电缆松动，重新接好.Ｂ．打印机型号不兼容．只支持HP并口打印机：激光型5L,6L,5100,1100,1200,5000LE喷墨型630C,5652等．六、日常维护与注意事项1、注意事项严格按照仪器操作手册安全使用仪器，严禁违规操作。不能擅自拆卸仪器零件，尤其不能碰伤光学镜面，也不可随意檫拭。严禁将腐蚀性的溶液泼撒在仪