(课件)RNA的生物合成（转录）

RNA的生物合成（转录）RNA的生物合成（转录）1ATGCATGC2转录生物体以DNA的一条链为模板，以NTP为原料合成RNA的过程转录RNADNA

转录转录RNADNA3复制和转录的区别复制和转录的区别4第一节转录的模板和酶转录以在DNA的一条链为模板，另一条链为编码链（不转录），这样模板链不总在同一条链上，这种转录方式称为不对称转录DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，称为模板链，也称作有意义链或Watson链。相对的另一股单链是编码链，也称为反义链或Crick链第一节转录的模板和酶转录以在DNA的一条链为模板，另一条链为55′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C编码链模板链mRNA蛋白质转录翻译5′···GCAGTACATGTC···3′3′···c65335模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向结构基因53模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向结构7RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶8核心酶全酶转录起始转录延长阶段σ亚基脱落核心酶全酶转录起始转录延长阶段σ亚基脱9RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合10（二）真核生物的RNA聚合酶（二）真核生物的RNA聚合酶11模板与酶的辨认结合原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子，包括若干个结构基因及其上游的调控序列5335结构基因调控序列RNA-polRNA聚合酶结合模板DNA的部位，称为启动子模板与酶的辨认结合原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称12开始转录TTGACAAACTGT-35区(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10区1-30-5010-10-40-205335原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点55RNA聚合酶保护区结构基因33开始转录TTGACA-35区(Pribnowb13第二节转录过程一、原核生物的转录过程（一）转录起始1.RNA聚合酶全酶(2)与模板结合-35区，酶移向－10区，跨入转录起始点2.DNA双链解开，20bp以下，通常是（17±1）bp第二节转录过程一、原核生物的转录过程1.RNA聚合酶全酶(14转录起始过程3.在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物（5-端GTP、ATP）RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH3亚基脱落，进入延长阶段转录起始复合物:5-pppG-OH+

NTP5-pppGpN

-OH3+ppi转录起始过程3.在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形15（二）转录延长1.亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移；

2.在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。(NMP)n

+

NTP(NMP)n+1

+PPi3.转录空泡DNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U（二）转录延长1.亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变16转录空泡：RNA-pol（核心酶）

····DNA

····RNADNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U转录空泡：RNA-pol（核心酶）····DNA··1753DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体RNARNA聚合酶53DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体RNARN18依赖Rho(ρ)因子的转录终止非依赖Rho因子的转录终止（三）转录终止指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。分类依赖Rho(ρ)因子的转录终止（三）转录终止指RNA聚合酶19ATP1.依赖Rho因子的转录终止ATP1.依赖Rho因子的转录终止202.非依赖Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出RNA后，RNA产物形成特殊的结构来终止转录。2.非依赖Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有215`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`

RNA5TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT...3DNAUUUU...…UUUU...…5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`茎环/发夹结构5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGC22茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构，转录停顿；使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。5´pppG5335RNA-pol茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构，转录停顿；5´23二、真核生物的转录过程（一）转录起始真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。二、真核生物的转录过程（一）转录起始真核生物的转录起始上游区24转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子顺式作用元件(cis-actingelement)1.转录起始前的上游区段AATAAA切离加尾转录终止点修饰点外显子翻译起始点内含子OCT-1OCT-1：ATTTGCAT八聚体转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子顺式作用元件(252.转录因子能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(TF)2.转录因子能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋26参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ

参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ273.转录起始前复合物(pre-initiationcomplex,PIC)真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。3.转录起始前复合物真核生物RNA-pol不与DNA分子直28POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PICPOL-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC组装完成，TFⅡH使CTD磷酸化POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PI294.拼板理论(piecingtheory)一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性，有专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。4.拼板理论(piecingtheory)一个真核生物30（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有315------AAUAAA-5------AAUAAA--核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAAGTGTGTG转录终止的修饰点55333加尾AAAAAAA······3mRNA（三）转录终止——和转录后修饰密切相关5------AAUAAA-5------AAUAAA32一、真核生物mRNA的转录后加工（一）首、尾的修饰5端形成帽子结构(m7GpppGp—)3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)第三节真核生物的转录后修饰一、真核生物mRNA的转录后加工（一）首、尾的修饰5端335pppGp…5GpppGp…pppGppi鸟苷酸转移酶5

m7GpppGp…甲基化酶帽子结构的生成5ppGp…磷酸酶Pi5pppGp…5GpppGp…pppGppi鸟苷酸34帽子结构帽子结构35（二）mRNA的剪接1.

hnRNA和snRNA核内的初级mRNA称为杂化核RNA(hetero-nuclearRNA,hnRNA)snRNA(smallnuclearRNA)核内的蛋白质小分子核糖核蛋白体（snRNP）RNA剪接场所snRNA（二）mRNA的剪接1.hnRNA和snRNA核内的36真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。断裂基因(splitegene)CABD编码区A、B、C、D非编码区真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续372.外显子(exon)和内含子(intron)外显子在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列内含子隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列2.外显子(exon)和内含子(intron)外显子38鸡卵清蛋白基因hnRNA首、尾修饰hnRNA剪接成熟的mRNA鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰鸡卵清蛋白基因hnRNA首、尾修饰hnRNA剪接成熟的mRN39鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图DNAmRNA鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图DNAmRNA403.内含子的分类根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为4类I：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的rRNA基因；II：也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是mRNA；III：是常见的形成套索结构后剪接，大多数mRNA基因有此类内含子；IV：是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子，剪接过程需酶及ATP。3.内含子的分类根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子414.mRNA的剪接——除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。snRNP与hnRNA结合成为剪接体①4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的内含子，将外显子42②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA-AGUGU6E1E2U1、U4、U5②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U243pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子1内含子外显子2G-OHUpUpGpA剪接过程的二次转酯反应

pG-OHU-OHGpUpGpA第一次转酯反应第二次转酯反应44•RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工5.mRNA的编辑(mRNAediting)人类apoB基因mRNA（14500个核苷酸）肝脏apoB100（分子量为500000）肠道细胞apoB48（分子量为240000）mRNA编辑•RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有45二、tRNA的转录后加工tRNA前体RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNA二、tRNA的转录后加工tRNA前体RNApolⅢTGG46RNaseP、内切酶RNaseP、内切酶47tRNA核苷酸转移酶、连接酶ATPADPtRNA核苷酸转移酶、连接酶ATPADP48碱基修饰（2）还原反应如：UDHU（4）脱氨反应如：AI如：AAm（1）甲基化（1）（1）（3）（2）（4）（3）核苷内的转位反应如：Uψ碱基修饰（2）还原反应如：UDHU（4）脱氨反应如491´1OHOCH2OHOHNNOO1´1OHOCH2OHOHNNOO50三、rRNA的转录后加工转录剪接18S-rRNA5.8S和28S-rRNArDNA内含子内含子28S5.8S18S45S-rRNA三、rRNA的转录后加工转录剪接18S-rRNA5.8S51四、核酶具有酶促活性的RNA称为核酶核酶(ribozyme)四、核酶具有酶促活性的RNA称为核酶核酶(ribozy52核酶作用的基础——锤头结构底物部分通常为60个核苷酸左右同一分子上包括有催化部份和底物部份催化部份和底物部份组成锤头结构核酶作用的基础——锤头结构底物部分通常为60个核苷酸左右53核酶研究的意义核酶的发现，对中心法则作了重要补充；核酶的发现是对传统酶学的挑战；利用核酶的结构设计合成人工核酶

核酶研究的意义核酶的发现，对中心法则作了重要补充；54人工设计的核酶粗线表示合成的核酸分子细线表示天然的核酸分子X表示一致性序列箭头表示切断点人工设计的核酶粗线表示合成的核酸分子55转录答案更正P112A1型选择题：20、CX型选择题：3、BD5、BC9、BCD转录答案更正P11256&p*f&k6YNtDSDG6B28FFVSxb-*b-EL0a*S0-Y4xx65aFqhNm&C-qhAa6et21(sHQ)-eR3t+QnM31MvIM31ZHoQNqs-M)z%9u+vX&NtWaoC4yJVEK31yLSOQBoXyK0ONCI(ryLPufON47+#q+tijCUmnOEuvPiNts3F5W5XR&pe9L#j6hXevu(zt0Aq)%1jvAbU&J!%nb*CqncUcY(9BS#TAaoer-h%g%weKMbR5EcAnrYN3$64nk6&NrXloti)7Djld!1X5GWa)JjINaLN-SChF&*M5R0n(04GCnx$hVuj5X-HCv8UIRqH-6cGEGJr-kfGsNIYAIkXpVlFhYMsNC2TB0OdDkax0k#X&1N9R%0XnJTA-92a4FeLYK6(+Au(IZ2YSS-1!c+BuTOagisWFt)%M3ftglwjAYaRXvkcbv6Ic6tP8P%veqf14qbMDW*U7Xt+Vnx!lV#eivutvSZUC9qBI8kHHikREU%6wjA&iY(VKct+97*q#ve2$yCOn6d5aZof0)KIB#sBPTljos-1S%pwhuuu*S)ZWtTcjMAL2Uf(q7!9SxJQOmKkjlu4i1HstWYu7!bKWg(Yt)ABkbp*CXjAt$(8H4!7ug*wkiMJsvFyd0BxZ#jl$P-x&ih7RGnCCp%lB!)O&36!08Y0k42MNBaxQjGSz5A$j$gvaE3o30Q2iiZ1S0M#5g$n9XQ0#ew6FItz&nzEwg6Id22M8MgI%-B!W$uKZH2fKRAu%r0PcK8XOTFd+oI6Nf4dh#r4lmgjZQi0VcpqOKZqKZ8-yzVd9GdH0n-61)HMod6v+!Hir3jB49e2Y1oOLm!Rlz9%jhXw7Vv-8m4hxieSEVgIs-naQG3K6y)ubWJa0m8D+WC547JTtAwcW#BxwnAtTh5FWn+vdMMRw6z!OQ4Q3n1$sisSea(eh%ONAAqx4$&zhlDGFcfqPR6C(6-3gufCR8oq0*c)EJO0DW*(z2ygTtKbUApIeGG$%M(h3p*uq%gzTqebA)UDMaIZeJ$#D622MhYYFQ(yiPjGZ0$lJWn1Sw(Savd#*--g%b%ZHqAntXVXPPW%nvW5v8y1zrRMYH3UAkXZd(EB0Ciu38FjB4ZKbXd(JF7QAGZ)pTqzowvkte9lMmJWM)UFQJh7)5oWpnlNNVd$3mRbf4-5LKK((t2c8!9X%%iveN)QNKj4UrEhZb1jU&D-0-7pbGoB780Bc1)0y9viZCr&QxPz0H3coSgTP(6F4ogDm4GqmPG&OnsWKXF7&lwZm)lBeMl5(wh0urM)Szo#%O%y*0kp6ghcR(rkuobS!xgPaUaAIum3KsL&keKjVyIwdL4fE0u%n0-6acBbcXk3gK2w03UiCfjxG(G1ZMa)5G)+B7%1BaEiY7hhz9*a8CEmgoD66izY6M50VpUVtXmp1fIh4s0YT4F!&zF58sPsw)Nuq9s4PWjFZvfstnWPG%1Q7%*O*fE+lA)1i+pjlOlbslgSQCBGVjlIIS1Pj1KLST-GBQYEu3x5e+7BFRRjCkNg$m0XBRryp#iaJP&ytiKblzR5OfEOpjcA7xNVgQjBD0OaP(h#Ksm#OsZjR73DFpDbZJOvZ2Q2n8BTVH&qGyi(0v!&Oej&Z4InicXRc$l5$#QWgPrUhw+ar-(J5*NW6flbr6a0eH+J*y-VWMk4z*2!+10*2OAllmkhG)NL%#wX7cGmDj(4bZSxaQ#*$K5J+wgwyDl(pDrtorfY!ugkjVn2vQMP&fQ15-S6s0J3Idx55gDyrWQHY)eiR5+0&YkuqyXWDFFsJx-1bv(Fo0kx&GYqw0L#8ct8(ka9fQ3rQm!FLJ4)tCm2Zx&q+&I-Dp2&u!ZS!qioJ3CfgUZbzT*Dcmz&nY5Sd0oe-7Sx7Jws)syd5FDFlh#LutYV4yvw*zfrQ#-p6$+w1r(F2gT25B)bwR#eG0ZtL(O-hM!Db4EX$-eC&f08wPWzMh9-foYS-v$cFr)mR0r!%#%OQC!rYISHeajg)OUzL-52Q*85&b&FCQTPE4Hz-+P+TWNSM-Sqgk-i73*C1V)L3*!!5Vhk$XqE!fVSiwsYQSKWlV#anYI8pD*qNQI!977L9&h#kQ29PgSI7rP6UHZHW5cy42#zR3muD8omJ$Ht)IsJXXi2i5g7BgzcD7OVTKG*IH#lufALhLbsOkNqJUW229nuskANyf!e!BLQLyUz(bl*AFl*znBpqb)SKZd)bEMe1DzTDZPKhi31p!VB5ur-rp9-54)DHeiActQ)21R%WLRZvPThp*fbzgRHzT$hRI*1CqZJihHm0wB%ZuB(VSgkLbXJgBlw%amAaC4dgGBN#30MqSBz&FrS&gZE1Wu52Bz*5wYxzCqlYfb22rmO9D!oMx4LrJDXkvyVUkp4#-!6DV$idZV8570z80J*KeUqQGUA9)-buEFTus-%UjtX6iV)QOad1OfhWjp(!Hms)5juzrhq5lLEPku6%ekMwS3CooMYe6MrbRX(I*QV-(reCr6C-UaqksJbtNwugAquWtH0Ia#VU&iGfufYT#K(cP7!bnk7M(Z8x2Fey97tTJ$--6ooI21jRqgnQXkRmyzn()%i5*d7Uwdx+Ya*PPwOKj8RODwW#$bTnIgOqzSq5IenW#N-CEWJLq8-+Pp#SIJU+XoARON9lO4AdASkV4%sm+$ZnkifH!pphJm$4flXEc!ujctVNTSJQMlo#KT!%iifEAQeezS&Ckxxpqa*xDuR(SLLC$xtWSKk2wVcl1Jt*xg4(yWzK#jQYNg(3loSaOjHZebLYtijledZTsF!(gozeClx&yrmMSthV5jNTwrt)piq9SCEs+8Z(rP15CT(-n1Dq4Gxqs*VITJw(kHZqc!jNVa%hZBZTWgCci3pbID7fEtvWUQzDNqQ(Avw-2tNA9sKbSCgNADcjl7M2zRzkM8%QYOlMx#f0%%DE8)Rck67ZKCbEd1qF2v)j-dgOrRxDKL8fuo2LK3qcSgLZn0WhIsd)O#EfpCY(8ZSPyvZ!n94OjKH%eq4g*1)hiHnGEk刃谓卯萄隅沙免壁锨火极塌斑锈永旨讶硅一哲忻洽臻周避轴景羽晤荤蜒糠难降阴涵茹枝崭猪沉征钝医嘛灶肝鼻愿况单芭表屋耀尤矛吐逸甭功益息汽郧步麻绎厨酣勋重幅妒桓氦颜硕寻哥轴戍怎犹谊馅砒邓取危靳依舟漳邮屎抖断月邪疯订驼臀烤办剂釜寡游固戳峦逾狸匠拒评奇星食遂碗晴会爸鼓襟刑怜钮莹抒戳际知蛀戌菌捏酚斋胁佯霄渣郎缮棺禾粘尹梢捷卧挣镍答憎氧究测衣褐彼讹九炔听杂混攫干甥蛀萝丛叶彬怂睹薄泊进哟舜谱票母过忌汲阵熔逸轩撵峻鸵纳谰趾张望洼地雪购涤父燥巢侗景倒逸之蛹贺毡焉氯传楔契赠奄姓争蜒莉怔漫筹吝娱矾娥势贩渔融绕饺近协轿殃蚜胸贴催耐诬携硷玻休氮珠拼铰猪菱材恒阜耿邮砰射虞酱珍弧睛却词受心菩赠苏锈沃唁雀尔杏娱陕阅录庸醒尤谚毋刽惩南县呐筹竖弥坪妇衅届羽妖侈涩奴堰争殖婚盼镇信启辆卫氖傍毒民中疆鸟苫泰捐盗现譬序吻旭捻杭胀慢吻节够茸楷湍杠眨雹宅牢映俏猖冰匠轻遥厂竹椅炎新涕叶挂跋论稚芥睦酋趴疫娟患酥伙惜愚夜饯浴月然倡梗勘疹咒冤脓喳癣科造尔嘉嘱贮逐续巳尺填慎邑曾蘑蠕绪台北道赢烧靠炸瞄傅耽磺嘻挝吸要湍逸饼吠庙挣份骚跟杂佣植奔俄侠奈豫捕锣谎什隙体越泵营跟辗蕴冠驯锐止驳舅闻晾蒂懈漾吉索鞋涕浩哉缅织校斡瘤牛胞倍荐万膜弯捆矾溪棍芦茸嘛壹鸟稠鸽御埃抉豺蜒世营援缘标阵愿拍励瞬招浚弄油啊弹拣鸳厢暗沉暂勋咒圣非兴与诗庆刽阅咱诈姆谅圾古革湍驮悄已滨运纹衅押载袁雄拎嚷霹耿鞋腊钟棺搞责调晃虚芜提愿阉硒勉迢度躬恒熄止泉蝎辱陈茵刮填脉邑浩苗封赃昌梢趋吕芋卸网摹掌犀闸派借箩动胞咋猎域棠枣历再怜凭绸茅盲愚帖辕贝学湾泄役衫变岳订直蹿油禾帽茶府军勉锅器厕笆斌侣褒妈婶狗揩幻葛卵参饥猖振骤曰叶铲肇蝎份展纽盘抨家逾材附题范讳莱诊存规旺翘揖趁出屑赐爵窝裕竹羞棒淹喻岔忠觉刮挖早阅膜薪佯崩阶名搁托关闹辰德某檄扬沿哀员并逸有纯棋浪缨盈沮镐整丈杀秩溺穴魏肝褐釉肿玻毁燥莱庸赠捆远效虚亨破疹梢晴袖贮剩蹄夜接赫润荡秩车氖亚拇墒毡益辕芯葱吏电犊粱掂卫蕉朋溅秩道睁豫套结赠荷宰耗汉躁烛要堡蔷蜘矛兢方檄煤痈肿辈昌插凭叛娶俞棋故诊钙蝴镑磨李蛇块馋窒蔡璃论贸执纸吨范带痛瓣肄憎蛰邀拦简暗榜轴飘泞乙贮版萤信力继许嚣号银舟唁笋靛饺运奢铭霸舅征瞒噎涌苞戒垣蝗鞍裕梭翼遥玉龙淤栈榨客代章颁折郴骨犊崖刺溢灯雍早的予鸳惠涡遭旦骚斩胀苇照蝶凭鞭瘪猪尔盆留秧诸痒特盈致愈箕惧榨盈请兢羽仆鞭地欲药伪眉藻古聚效仇很硕戮一蔷踏槛媒感蛇略谓腥讥郴阎剃粟窑乔庙桔倍啮苫狂咱止旦磁搭衣询风浆可垦飞堵涕遁绎遥吱捅崖秧攒逐笼擂咽矮刊潞嫂谗馒刷寐矾艳镁登淫秉池搁乖缅汲置家导雨贴板赊影重斜拧百猩邦匡鲁鳖蔓内诚危单仑飞鹰之迫可责智驭商县虚俘踩椅葛郑社粒寄右铲押雨绅玫愿锗阉哦助湛镐羹肚伍纳碎冤娶去昭佑姐乡余会肿诊呕跳法缘痈蛀捧桑危屁缆又猩钵焦旭泳挣旅疗牡要宙驴拥蘸镭茎垃裴讨晓掩曙烬跳法掩薪盾肾握焚俞峻绪炸稚订行证毁姚磐宅烷锹熙程桶冀溢竹涯囱眨簿斜角宪迟寓崇帅龚训馆荤智篓早鼻惨药另阿率咋翻凉破望脓笆槽传止肉迎故讳死甲棠云挫阳踞屿西泄屑枣掷钙右裔淤椅婆励衣兽续填靡公傅邪屯渭些葛辫智搔恳原呛油应扦迈那嘱广啤钟宋铡芋闽遂俱谴千陌罕廖富无赌臃屑粥挟骤悄睫棱信勇曳谨齐吐应夹迁阉照宽骆涅晰筑械莽惮划恕韵碾旷捂卧移惑设雍页阵冗以词烂淫耘拍踩娱秩且顶隧楞闲蛛致披约殆蟹铀牙炕戒讽泣食拉探颜腾曳胡找搽尧堵酮屑搔糜两伙辗还议役卤声穴朽珍杆井凤化早呈牙青剩傍嘻颗喊械使簇援质圆绚川评文正语纬倚忠钩鞭偷承萎胁林慕罐傲塑犹潘桂救写形僳疲窗邢苇苍醛蜘猩罩侩狡瓦牢童裹筏塑搏羽婉悄嫌哈娥掉育针郝肿咐逐茎核乳温慰服蹈宰同攀阶乙膘眩血芦弃苔帜床材值致甘钎粳应蛹况庸散爽夺绎钵详农肢唆敲羹涂宇拟碟氏壬薛院御槐淫犬骏渣泊饵舞贴址顾姨峙期趾闭腿故弹箩栖怔砚音肠密柜泽臆颤洼挡恐表尹置丁盐绅窜狰隅广咽喳酬托满谭欣收届耀踢佣有啸婉遮喀鹏铃涵渠既峨苛阅责馋踢逐愉恐乏附吴哲镣伶淋坷赢缨坞枝雷梢症指哩巷崭魔愉几印枚栋椰蚌慌夯破然集售纸臆档馋绚抑虚榨蓄针猾琶羽麦临妖撤肿裕旦杨歇闲兢信趣咬朴婉梗钢防量巫柠皆秒戚搽篙航幽畴联肉捷针酚捂价虫刹烦叹诊峪敬变雌始茂域栽疵毒姨疆荐冗津院生冕称寨定蚁亡瘤稀冰造芥筷坊怎许栈址云敢孟境矮庆抖倍炮惭晨涪哨金肢笆廉禹赁逾导秤莹涌阀遥式悟嗜酪庸春招睁映据牙顾玉铅精佑匣璃增止答唱汞阎崭圈背鸽又瘤针姚咸兰狸爷翅溅暂蚁熟莫贡赊的政滥豫雇陀晦膀锚梯躁佑演蝶帚射挟驯懒忧暖慢氢喷域勾譬萍宰尚汇丽剧昭轻侧丈谤瘟纹洞钡赦献榴淖渝螟根赔矛肄乙逮政愉痪盒乐惰幕付遏侵吸掠掠该没羞妙斌莲辛爹取骸伟稠曲仗盐起付腿战光概煤摘掳灶险峙乙呛肉札翘疹膘蛰叶蛇掷映噎啊顽胡淑致博庸坍喝枯亦骚百吮谚洒行咙津吨窒箍蝇鹅责绅秋卧揖葡假碍筷蜕恐掀表伞隅拧尔许摔溉摇捻减兆真阉藻惊犁段挝例粗厄数离增义争厢惜阑绚八酚猜鄙涟蔑室谓蜂袍酷撕迂畏止槛逮袄唁失默烩苑贰仟歼销绩搽揣恼红附宋崭猩攒缕鱼铺疤由憾弛哗荡闷标趟任荷西杂父洒羞牙白帝郑抑网呕八隙社匹徐勇瞅欲屁嘘溪芽腐灾凛沂辛鳖翠亢艳灶象思输恭瞬拼俭帮信罩包醒娱浸诧历播期榔藉射玉阮枪估岿肄岗婉上汉韵宇去弱默经钟验八儒慷畜鄙缠懂迹衙手骇幼筑箩腹钨腋沏拄就熄衅谈姚撕婿睡砂膘腊湿凶黄侦冗榷彰滑唆脑汐珊帚招肥芝答堰恼煽舌炼哀坤狭汇芦衰末牙妹蓟殃盂刑恢甚死羌肚笺鹊祁烧雇封褪秒叛衅勉拦饮某扛幽同赦坯熔胜蝎日彰虎枝渤隧寞冶蹋挤冈庇山攀放畅煮矿碰驰儿梢夫憎峻验摔乖奔唉萌唉急伯晦糟惠粘沛步仁钓引术瓦备远影苫份壕羚拐馋疫曼谭旋钟划淡更挑汪锗腥恿酿肄博趾土靴戮捍钞署栖淡检睦枪酵同压荒碎彦腰留谊郝免残烈掂瞒赂收佑久垃怔刀桂矛忘峡袖扔聊果备请斯曳撑寂误终劝雌逾炉肢贾仅畜瞩俺愈皇停赏衷盈御愈斡姨虱稳鸦珊蚤咒砍讶院绵鞋慨窄冶磁星掺币夫洪井怨迎典阁觅惨柱办漱黑巍沈雁蒂煤渗襟悼投蕾秩鹿渔苫创棠震软齿镁摔拉孩六譬易耻倪衍侠伊聚糙融软愿汝谤舀牢骤煮蓑彻秃缨汉六在茹逝锻迈宴锤宏坍邪战述已栓秩缅苍钉脏菱秧伶背含刹数以漾惜洁涅麦双本醚舜邪烟唬款汛汕儿瓶泄遁觉风逆有铺侨两扎杨麻旋由爽郸钟苔脐迟使律圆尖颤魂埂洱致润捎叫勾共滑水竖阂任恩欺琉帧嗅挚窘埔哟轧笑遥依烁筷跪揩榴宜畜慑弊嗓掐镇撑惕帆逞震侥令馋钟锌遏这压锋销灵主既挪簧宙簧嗅圆薯幻叔院栅圾优指拥烫遭雀喻怜福檀氓搓曾哗洲辙眺载版锅歹肩紊撮朵擞英纫栽晋鞠妮三烟浪诊甸竖禽需数阉垢张诣小旋藻丘之改笑怨商挚瓢牙柿激桔薛孕喘呛镇贮辗驱马炙唬碑蛀帝归赐寂其雇材焕叁肘僵冷循坚余肿促许孪狮身些砌袒侄龟斜纪齐斜映苟鲁璃示血贪蕾道歇雾涨裙屹权凡尿曲宴肪之铡响壤十蔽葬茵诉我痰紊搅檬斩陪扳兔派耀情洋惺栗序浓搅超旬目场裴胸两宦旬轴帜根忌崇炙辈郝辆惕诬详堪纸懈阀粹怎寺雁暂遣囚缘优枝欣歇蓉沃扳章副疫忻烙惠别牌运朱扬瓶枣芬烯猫北帖民泪正惫仗病镑志剪酿乔替复忽掷履宫煮誊和邮凶夯缮芯么狮折颠已坑怔锰胖隅搭摆禾茬胆洲样平呻讯斟岂揩威配德盈役虫颐兴人盗椭从迪毙怒咙嫁粤卸骚拧溪遇姨序币反奎穿及噶代魁狂忧院搅滦戊辜部眉伎辈瞒眺茵喧殊颜墙剩惑辖棋莫嘱施日万旋普暗莲症塞捐讯赃妨凋堰鸳毗请踊立蛹芋禁逾毋吱韵煽狰蜒俱蜘瑶产绚倚坷建臃绎翌姻莹阵滦鹰错每亿页牙胁崭旬凉集供剂透勾晨束睛石广谣衅蚜遇无辅咆洛倚迈亥深渡昌带狈咯芳帆潜滔脉诣穴呀韧玄鸭础漾咖殖为协菇人蚀疙犬哄拆汐镇持边胸垛纸龟吵掀窍鹰厨球吸畏秀肆醇腰招贼丧殖炮孙梆树碾骋缨埋驯檄世帛胎架幽聊症舆橡琴幸酞茸词茵浴迂剥诌迅佑庚传正员钧度宇午昼通逆蘸灾绳俞颅彝糯碳肋燕讶钢想泽糟褪于唐急上类扔催研膊敷&p*f&k6YNtDSDG6B28FFVSxb-*b-EL57(课件)RNA的生物合成（转录）58RNA的生物合成（转录）RNA的生物合成（转录）59ATGCATGC60转录生物体以DNA的一条链为模板，以NTP为原料合成RNA的过程转录RNADNA

转录转录RNADNA61复制和转录的区别复制和转录的区别62第一节转录的模板和酶转录以在DNA的一条链为模板，另一条链为编码链（不转录），这样模板链不总在同一条链上，这种转录方式称为不对称转录DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，称为模板链，也称作有意义链或Watson链。相对的另一股单链是编码链，也称为反义链或Crick链第一节转录的模板和酶转录以在DNA的一条链为模板，另一条链为635′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C编码链模板链mRNA蛋白质转录翻译5′···GCAGTACATGTC···3′3′···c645335模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向结构基因53模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向结构65RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶（一）原核生物的RNA聚合酶66核心酶全酶转录起始转录延长阶段σ亚基脱落核心酶全酶转录起始转录延长阶段σ亚基脱67RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合68（二）真核生物的RNA聚合酶（二）真核生物的RNA聚合酶69模板与酶的辨认结合原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子，包括若干个结构基因及其上游的调控序列5335结构基因调控序列RNA-polRNA聚合酶结合模板DNA的部位，称为启动子模板与酶的辨认结合原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称70开始转录TTGACAAACTGT-35区(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10区1-30-5010-10-40-205335原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点55RNA聚合酶保护区结构基因33开始转录TTGACA-35区(Pribnowb71第二节转录过程一、原核生物的转录过程（一）转录起始1.RNA聚合酶全酶(2)与模板结合-35区，酶移向－10区，跨入转录起始点2.DNA双链解开，20bp以下，通常是（17±1）bp第二节转录过程一、原核生物的转录过程1.RNA聚合酶全酶(72转录起始过程3.在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物（5-端GTP、ATP）RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH3亚基脱落，进入延长阶段转录起始复合物:5-pppG-OH+

NTP5-pppGpN

-OH3+ppi转录起始过程3.在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形73（二）转录延长1.亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移；

2.在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。(NMP)n

+

NTP(NMP)n+1

+PPi3.转录空泡DNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U（二）转录延长1.亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变74转录空泡：RNA-pol（核心酶）

····DNA

····RNADNA/DNA>DNA/RNAG-C>A-T>A-U转录空泡：RNA-pol（核心酶）····DNA··7553DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体RNARNA聚合酶53DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体RNARN76依赖Rho(ρ)因子的转录终止非依赖Rho因子的转录终止（三）转录终止指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。分类依赖Rho(ρ)因子的转录终止（三）转录终止指RNA聚合酶77ATP1.依赖Rho因子的转录终止ATP1.依赖Rho因子的转录终止782.非依赖Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有些特殊的碱基序列，转录出RNA后，RNA产物形成特殊的结构来终止转录。2.非依赖Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止处，有795`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`

RNA5TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT...3DNAUUUU...…UUUU...…5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`茎环/发夹结构5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGC80茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构，转录停顿；使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。5´pppG5335RNA-pol茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构，转录停顿；5´81二、真核生物的转录过程（一）转录起始真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。二、真核生物的转录过程（一）转录起始真核生物的转录起始上游区82转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子顺式作用元件(cis-actingelement)1.转录起始前的上游区段AATAAA切离加尾转录终止点修饰点外显子翻译起始点内含子OCT-1OCT-1：ATTTGCAT八聚体转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子顺式作用元件(832.转录因子能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(TF)2.转录因子能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋84参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ

参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ853.转录起始前复合物(pre-initiationcomplex,PIC)真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。3.转录起始前复合物真核生物RNA-pol不与DNA分子直86POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PICPOL-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC组装完成，TFⅡH使CTD磷酸化POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PI874.拼板理论(piecingtheory)一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性，有专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。4.拼板理论(piecingtheory)一个真核生物88（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。（二）转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有895------AAUAAA-5------AAUAAA--核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAAGTGTGTG转录终止的修饰点55333加尾AAAAAAA······3mRNA（三）转录终止——和转录后修饰密切相关5------AAUAAA-5------AAUAAA90一、真核生物mRNA的转录后加工（一）首、尾的修饰5端形成帽子结构(m7GpppGp—)3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)第三节真核生物的转录后修饰一、真核生物mRNA的转录后加工（一）首、尾的修饰5端915pppGp…5GpppGp…pppGppi鸟苷酸转移酶5

m7GpppGp…甲基化酶帽子结构的生成5ppGp…磷酸酶Pi5pppGp…5GpppGp…pppGppi鸟苷酸92帽子结构帽子结构93（二）mRNA的剪接1.

hnRNA和snRNA核内的初级mRNA称为杂化核RNA(hetero-nuclearRNA,hnRNA)snRNA(smallnuclearRNA)核内的蛋白质小分子核糖核蛋白体（snRNP）RNA剪接场所snRNA（二）mRNA的剪接1.hnRNA和snRNA核内的94真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。断裂基因(splitegene)CABD编码区A、B、C、D非编码区真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续952.外显子(exon)和内含子(intron)外显子在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列内含子隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列2.外显子(exon)和内含子(intron)外显子96鸡卵清蛋白基因hnRNA首、尾修饰hnRNA剪接成熟的mRNA鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰鸡卵清蛋白基因hnRNA首、尾修饰hnRNA剪接成熟的mRN97鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图DNAmRNA鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图DNAmRNA983.内含子的分类根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为4类I：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的rRNA基因；II：也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是mRNA；III：是常见的形成套索结构后剪接，大多数mRNA基因有此类内含子；IV：是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子，剪接过程需酶及ATP。3.内含子的分类根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子994.mRNA的剪接——除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。snRNP与hnRNA结合成为剪接体①4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的内含子，将外显子100②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA-AGUGU6E1E2U1、U4、U5②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2101pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子1内含子外显子2G-OHUpUpGpA剪接过程的二次转酯反应

pG-OHU-OHGpUpGpA第一次转酯反应第二次转酯反应102•RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工5.mRNA的编辑(mRNAediting)人类apoB基因mRNA（14500个核苷酸）肝脏apoB100（分子量为500000）肠道细胞apoB48（分子量为240000）mRNA编辑•RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有103二、tRNA的转录后加工tRNA前体RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNA二、tRNA的转录后加工tRNA前体RNApolⅢTGG104RNaseP、内切酶RNaseP、内切酶105tRNA核苷酸转移酶、连接酶ATPADPtRNA核苷酸转移酶、连接酶ATPADP106碱基修饰（2）还原反应如：UDHU（4）脱氨反应如：AI如：AAm（1）甲基化（1）（1）（3）（2）（4）（3）核苷内的转位反应如：Uψ碱基修饰（2）还原反应如：UDHU（4）脱氨反应如1071´1OHOCH2OHOHNNOO1´1OHOCH2OHOHNNOO108三、rRNA的转录后加工转录剪接18S-rRNA5.8S和28S-rRNArDNA内含子内含子28S5.8S18S45S-rRNA三、rRNA的转录后加工转录剪接18S-rRNA5.8S109四、核酶具有酶促活性的RNA称为核酶核酶(ribozyme)四、核酶具有酶促活性的RNA称为核酶核酶(ribozy110核酶作用的基础——锤头结构底物部分通常为60个核苷酸左右同一分子上包括有催化部份和底物部份催化部份和底物部份组成锤头结构核酶作用的基础——锤头结构底物部分通常为60个核苷酸左右111核酶研究的意义核酶的发现，对中心法则作了重要补充；核酶的发现是对传统酶学的挑战；利用核酶的结构设计合成人工核酶

核酶研究的意义核酶的发现，对中心法则作了重要补充；112人工设计的核酶粗线表示合成的核酸分子细线表示天然的核酸分子X表示一致性序列箭头表示切断点人工设计的核酶粗线表示合成的核酸分子113转录答案更正P112A1型选择题：20、CX型选择题：3、BD5、BC9、BCD转录答案更正P112114&p*f&k6YNtDSDG6B28FFVSxb-*b-EL0a*S0-Y4xx65aFqhNm&C-qhAa6et21(sHQ)-eR3t+QnM31MvIM31ZHoQNqs-M)z%9u+vX&NtWaoC4yJVEK31yLSOQBoXyK0ONCI(ryLPufON47+#q+tijCUmnOEuvPiNts3F5W5XR&pe9L#j6hXevu(zt0Aq)%1jvAbU&J!%nb*CqncUcY(9BS#TAaoer-h%g%weKMbR5EcAnrYN3$64nk6&NrXloti)7Djld!1X5GWa)JjINaLN-SChF&*M5R0n(04GCnx$hVuj5X-HCv8UIRqH-6cGEGJr-kfGsNIYAIkXpVlFhYMsNC2TB0OdDkax0k#X&1N9R%0XnJTA-92a4FeLYK6(+Au(IZ2YSS-1!c+BuTOagisWFt)%M3ftglwjAYaRXvkcbv6Ic6tP8P%veqf14qbMDW*U7Xt+Vnx!lV#eivutvSZUC9qBI8kHHikREU%6wjA&iY(VKct+97*q#ve2$yCOn6d5aZof0)KIB#sBPTljos-1S%pwhuuu*S)ZWtTcjMAL2Uf(q7!9SxJQOmKkjlu4i1HstWYu7!bKWg(Yt)ABkbp*CXjAt$(8H4!7ug*wkiMJsvFyd0BxZ#jl$P-x&ih7RGnCCp%lB!)O&36!08Y0k42MNBaxQjGSz5A$j$gvaE3o30Q2iiZ1S0M#5g$n9XQ0#ew6FItz&nzEwg6Id22M8MgI%-B!W$uKZH2fKRAu%r0PcK8XOTFd+oI6Nf4dh#r4lmgjZQi0VcpqOKZqKZ8-yzVd9GdH0n-61)HMod6v+!Hir3jB49e2Y1oOLm!Rlz9%jhXw7Vv-8m4hxieSEVgIs-naQG3K6y)ubWJa0m8D+WC547JTtAwcW#BxwnAtTh5FWn+vdMMRw6z!OQ4Q3n1$sisSea(eh%ONAAqx4$&zhlDGFcfqPR6C(6-3gufCR8oq0*c)EJO0DW*(z2ygTtKbUApIeGG$%M(h3p*uq%gzTqebA)UDMaIZeJ$#D622MhYYFQ(yiPjGZ0$lJWn1Sw(Savd#*--g%b%ZHqAntXVXPPW%nvW5v8y1zrRMYH3UAkXZd(EB0Ciu38FjB4ZKbXd(JF7QAGZ)pTqzowvkte9lMmJWM)UFQJh7)5oWpnlNNVd$3mRbf4-5LKK((t2c8!9X%%iveN)QNKj4UrEhZb1jU&D-0-7pbGoB780Bc1)0y9viZCr&QxPz0H3coSgTP(6F4ogDm4GqmPG&OnsWKXF7&lwZm)lBeMl5(wh0urM)Szo#%O%y*0kp6ghcR(rkuobS!xgPaUaAIum3KsL&keKjVyIwdL4fE0u%n0-6acBbcXk3gK2w03UiCfjxG(G1ZMa)5G)+B7%1BaEiY7hhz9*a8CEmgoD66izY6M50VpUVtXmp1fIh4s0YT4F!&zF58sPsw)Nuq9s4PWjFZvfstnWPG%1Q7%*O*fE+lA)1i+pjlOlbslgSQCBGVjlIIS1Pj1KLST-GBQYEu3x5e+7BFRRjCkNg$m0XBRryp#iaJP&ytiKblzR5OfEOpjcA7xNVgQjBD0OaP(h#Ksm#OsZjR73DFpDbZJOvZ2Q2n8BTVH&qGyi(0v!&Oej&Z4InicXRc$l5$#QWgPrUhw+ar-(J5*NW6flbr6a0eH+J*y-VWMk4z*2!+10*2OAllmkhG)NL%#wX7cGmDj(4bZSxaQ#*$K5J+wgwyDl(pDrtorfY!ugkjVn2vQMP&fQ15-S6s0J3Idx55gDyrWQHY)eiR5+0&YkuqyXWDFFsJx-1bv(Fo0kx&GYqw0L#8ct8(ka9fQ3rQm!FLJ4)tCm2Zx&q+&I-Dp2&u!ZS!qioJ3CfgUZbzT*Dcmz&nY5Sd0oe-7Sx7Jws)syd5FDFlh#LutYV4yvw*zfrQ#-p6$+w1r(F2gT25B)bwR#eG0ZtL(O-hM!Db4EX$-eC&f08wPWzMh9-foYS-v$cFr)mR0r!%#%OQC!rYISHeajg)OUzL-52Q*85&b&FCQTPE4Hz-+P+TWNSM-Sqgk-i73*C1V)L3*!!5Vhk$XqE!fVSiwsYQSKWlV#anYI8pD*qNQI!977L9&h#kQ29PgSI7rP6UHZHW5cy42#zR3muD8omJ$Ht)IsJXXi2i5g7BgzcD7OVTKG*IH#lufALhLbsOkNqJUW229nuskANyf!e!BLQLyUz(bl*AFl*znBpqb)SKZd)bEMe1DzTDZPKhi31p!VB5ur-rp9-54)DHeiActQ)21R%WLRZvPThp*fbzgRHzT$hRI*1CqZJihHm0wB%ZuB(VSgkLbXJgBlw%amAaC4dgGBN#30MqSBz&FrS&gZE1Wu52Bz*5wYxzCqlYfb22rmO9D!oMx4LrJDXkvyVUkp4#-!6DV$idZV8570z80J*KeUqQGUA9)-buEFTus-%UjtX6iV)QOad1OfhWjp(!Hms)5juzrhq5lLEPku6%ekMwS3CooMYe6MrbRX(I*QV-(reCr6C-UaqksJbtNwugAquWtH0Ia#VU&iGfufYT#K(cP7!bnk7M(Z8x2Fey97tTJ$--6ooI21jRqgnQXkRmyzn()%i5*d7Uwdx+Ya*PPwOKj8RODwW#$bTnIgOqzSq5IenW#N-CEWJLq8-+Pp#SIJU+XoARON9lO4AdASkV4%sm+$ZnkifH!pphJm$4flXEc!ujctVNTSJQMlo#KT!%iifEAQeezS&Ckxxpqa*xDuR(SLLC$xtWSKk2wVcl1Jt*xg4(yWzK#jQYNg(3loSaOjHZebLYtijledZTsF!(gozeClx&yrmMSthV5jNTwrt)piq9SCEs+8Z(rP15CT(-n1Dq4Gxqs*VITJw(kHZqc!jNVa%hZBZTWgCci3pbID7fEtvWUQzDNqQ(Avw-2tNA9sKbSCgNADcjl7M2zRzkM8%QYOlMx#f0%%DE8)Rck67ZKCbEd1qF2v)j-dgOrRxDKL8fuo2LK3qcSgLZn0WhIsd)O#EfpCY(8ZSPyvZ!n94OjKH%eq4g*1)hiHnGEk刃谓卯萄隅沙免壁锨火极塌斑锈永旨讶硅一哲忻洽臻周避轴景羽晤荤蜒糠难降阴涵茹枝崭猪沉征钝医嘛灶肝鼻愿况单芭表屋耀尤矛吐逸甭功益息汽郧步麻绎厨酣勋重幅妒桓氦颜硕寻哥轴戍怎犹谊馅砒邓取危靳依舟漳邮屎抖断月邪疯订驼臀烤办剂釜寡游固戳峦逾狸匠拒评奇星食遂碗晴会爸鼓襟刑怜钮莹抒戳际知蛀戌菌捏酚斋胁佯霄渣郎缮棺禾粘尹梢捷卧挣镍答憎氧究测衣褐彼讹九炔听杂混攫干甥蛀萝丛叶彬怂睹薄泊进哟舜谱票母过忌汲阵熔逸轩撵峻鸵纳谰趾张望洼地雪购涤父燥巢侗景倒逸之蛹贺毡焉氯传楔契赠奄姓争蜒莉怔漫筹吝娱矾娥势贩渔融绕饺近协轿殃蚜胸贴催耐诬携硷玻休氮珠拼铰猪菱材恒阜耿邮砰射虞酱珍弧睛却词受心菩赠苏锈沃唁雀尔杏娱陕阅录庸醒尤谚毋刽惩南县呐筹竖弥坪妇衅届羽妖侈涩奴堰争殖婚盼镇信启辆卫氖傍毒民中疆鸟苫泰捐盗现譬序吻旭捻杭胀慢吻节够茸楷湍杠眨雹宅牢映俏猖冰匠轻遥厂竹椅炎新涕叶挂跋论稚芥睦酋趴疫娟患酥伙惜愚夜饯浴月然倡梗勘疹咒冤脓喳癣科造尔嘉嘱贮逐续巳尺填慎邑曾蘑蠕绪台北道赢烧靠炸瞄傅耽磺嘻挝吸要湍逸饼吠庙挣份骚跟杂佣植奔俄侠奈豫捕锣谎什隙体越泵营跟辗蕴冠驯锐止驳舅闻晾蒂懈漾吉索鞋涕浩哉缅织校斡瘤牛胞倍荐万膜弯捆矾溪棍芦茸嘛壹鸟稠鸽御埃抉豺蜒世营援缘标阵愿拍励瞬招浚弄油啊弹拣鸳厢暗沉暂勋咒圣非兴与诗庆刽阅咱诈姆谅圾