大肠杆菌培养课件

选修1《生物技术实践》2014年高考考试说明知识内容1-1微生物的利用（1）大肠杆菌的培养和分离（2）分离以尿素为氮源的微生物1-2酶的应用（1）果汁中的果胶和果胶酶（2）α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1-3生物技术在食品加工中的应用（1）果酒及果醋的制作（2）泡菜的研制和亚硝酸的测定1-4浅尝现代生物技术植物的组织培养锁定：（1）培养基的配比与制作（2）无菌技术（3）接种之平板划线操作（4）菌落观察

实验1大肠杆菌的培养和分离一、基础知识：（二）培养基

（1）按物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的运动，液体培养基常用于发酵工业。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。1.培养基的类型和用途2.不同的微生物往往采用不同的培养基配方，基本营养要素：水、碳源、和氮源、无机盐营养物质，还要考虑的因素？PH、渗透压等概念来源最常用来源作用碳源凡能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源：CO2NaHCO3等有机碳源：糖类脂肪酸、花生粉饼、石油等糖类、尤其是葡萄糖1、主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物2、异养微生物的营养物质2.微生物需要的五大类营养（主要是碳源和氮源）概念来源最常用来源作用氮源凡能为微生物提供所需氮元素的营养物质无机氮源：N2、氨、铵盐、硝酸盐等有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白栋、氨基酸等铵盐、硝酸盐主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物此外，还需要无机盐、水分和生长因子（如维生素等）细菌分类细菌革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌对青霉素更为敏感。金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌、链球菌等大肠杆菌（兼性厌氧型）二、无菌技术1.无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。2.消毒与灭菌的区别

消毒：利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生物的过程。灭菌：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。1、培养基配制灭菌：高压蒸汽灭菌：1Kg/cm2

压力、121℃下维持15min细菌培养基：蛋白胨和酵母提取物来配制，还有加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH:中性偏碱。霉菌：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁，PH:中性偏酸。尿素（加热会分解）：用G6玻璃砂漏斗过滤，121℃下用纸包灭菌培养基分装到各三角瓶、试管和培养皿等不能沾到培养基，否则容易发生污染实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染4、分离：划线分离法、涂布分离法划线分离法（方法简单）：用接种环取振荡培养后的菌液，只在菌液中蘸一次，在固体培养基平板上划线，由于划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大，每个细菌细胞产生一个菌落。若在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。涂布分离法（单菌落更易分开，操作复杂）：需将培养的菌液稀释，玻璃刮刀（灼烧灭菌），有20个以内的单菌落为合适。将培养皿倒置，防止培养基水分散失，空气中杂菌沉降。370C恒温培养箱中培养12~24h，观察菌落；5、菌种的保存：在无菌下将单个菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，370C培养24h，置于40C冰箱中保存。涂布分离法1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。5.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。6.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌