兔场实验室细菌培养技术

Word-6-兔场实验室细菌培养技术细菌分别培养是兔场试验室诊断工作中一个非常重要的步骤，利用对细菌的分别和纯培养，能够按照菌落的形态、大小、结构、色泽、气味以及有无溶血等状况举行初步鉴定，然后利用进一步的染色镜检或者是特别培养举行鉴定或讨论，为病原确实诊提供依据。

1．培养基制备培养基是细菌学检查过程中十分重要的材料，它含有细菌生长所必须的养分物质，细菌经过培养基的纯培养，才干够举行精确     的检查，获得牢靠的结果。

(1)肉水的制作：

①材料：瘦牛肉500克，蒸馏水(或常水)1000毫升。

②办法：取瘦牛肉除去脂肪、肌腱，切成碎块或绞碎，按1千克牛肉2千毫升水的比例，加水浸泡一夜，煮沸一小时，用纱布初步滤去肉渣挤出肉水，再用滤纸滤过，补足原有水量，装入烧瓶中置高压灭菌器中120℃20分钟灭菌，制成肉水。

制作肉水的另一种办法是：取牛肉浸膏0.5-1.0克，加蒸馏水100毫升，加热溶解，滤纸滤过，并同上述办法举行灭菌即成。

③用途：制作各种培养基的基础。

(2)养分肉汤：

①材料：肉水1000毫升，蛋白胨I0克，氯化钠5克。

②办法：将蛋白胨和氯化钠加入肉水中，稍加热溶解，用氢氧化钠溶液调节pH值为7.4-7.6之间，再加温使溶液匀称。滤过分装后高压灭菌备用。

③用途：可供普通的细菌生长需要，检查细菌的生长表现，也可作为制作固体培养基的基础。

(3)养分琼脂：

①材料：养分琼脂粉40克，蒸馏水1000毫升。

②办法：将养分琼脂粉加入蒸馏水中，搅拌浸泡1小时，加热使充分溶解，高压灭菌备用。

③用途：分别细菌纯培养及作为其他特种培养基的基础。

(4)血液琼脂培养基：

①材料：脱纤维血5-10毫升，养分琼脂100毫升。

②办法：预备好灭菌并有玻璃珠的三角烧瓶，无菌采集血液，注入三角烧瓶中，不停地摇动，直至血纤维分别为止，普通需要10分钟。

高压灭菌好的养分琼脂溶化后，冷却至55-60℃时加人脱纤维血液，注重必需确保无菌操作，加入血液后轻轻摇动，不使产愤怒泡，立刻倒人无菌平皿或分装于灭菌试管中备用。

③用途：观看细菌的溶血状况，有的细菌的初次分别时需要此种培养基。

(5)厌氧肝片肉汤：

①材料：养分肉汤，动物肝块或肉渣，液体石蜡。

②办法：通过作肉汤的碎肉块、肉渣或者是动物肝脏少许，分装于试管中加养分肉汤5毫升，上层加液体石蜡0.5-1.0毫升．120℃20分钟灭菌备用。

③用途：厌氧菌的培养。

(6)麦康凯琼脂：

①材料：麦康凯琼脂粉38克，蒸馏水1000毫升。

②办法：将麦康凯琼脂粉加入蒸馏水中，搅拌浸泡1小时，加热使充分溶解，高压灭菌备用。

③用途：常用作大肠杆菌类细菌的分别培养。

2．细菌接种办法

(1)平板划线接种法：平板划线接种法是细菌分别培养中最常用的办法，能使细菌簇拥生长，形成单个菌落。左手持培养皿，用拇指、食指及中指将平皿揭开，角度不要超过20度，右手拿接种环，接种环与琼脂表面约呈45度角。取少许病料涂布于培养基边缘，火焰灭菌接种环，冷却后轻触培养基边缘的病料区，并向一边划出横线，能够延续划出一个小区，火焰灭菌接种环，冷却后将平皿转换角度，从第一个小区再向外划出一个小区，以后再根据同样办法分区将平板划满，注重只能在起始部位与前一个小区交错。

(2)琼脂斜面接种法：本办法多用于菌种的保存，也能够用于细菌的分别。左手持斜面培养基，右手持接种环，火焰灭菌冷却后挑取所需的菌落，以右手小拇指夹住棉塞或胶塞，轻转后取出，注重不要污染，立刻将管口和塞子火焰灭菌，将接种环伸入试管内，自斜面底部向管口方向划曲线，再经火焰消毒管口和塞子后盖严，举行培养。

(3)穿刺接种法：本法适用于半固体、固体培养基以及微量发酵管的接种，用来做细菌的生化和动力学试验。沿培养管中心直刺至距管底约0.5厘米处，然后再沿穿刺线退出接种针。

(4)液体培养基接种法：办法基本同斜面接种法，将接种环在培养管壁的液面下摩擦，然后再在液体中振动几次，塞好塞子。注重塞子和管口的灭菌操作。

3．细菌培养办法

细菌的培养办法按照细菌的生长特性、培养目的、要求等不同而不同。主要分为以下几种：

(1)需氧培养法：即普通培养法。细菌接种培养基后，置于37℃培养箱内培养即可。适用于需氧菌及兼性厌氧菌的分别培养。

(2)二氧化碳培养法：某些细菌要在一定的二氧化碳环境中才干良好生长。

①烛缸法：将接种的培养基置于干燥器内，点燃蜡烛后，密封好，连同容器一起置温箱中培养。

②化学法：每升容器中根据碳酸氢钠0.4克，盐酸3.5毫升的比例，分离装入两个小容器中，置于干燥器中，密封后使两药接触产生二氧化碳。

③二氧化碳培养箱法：将培养基置于特制的二氧化碳培养箱中培养，能够按照需要调整二氧化碳的浓度。

(3)厌氧培养法：

①换气法：将培养基放入干燥器内，将干燥器内抽成真空，然后充入氮气、氢气和二氧化碳的混合气体，放人温箱中培养。

②焦性没食子酸法：焦性没食子酸在碱性溶液中形成焦性没食子酸盐，能够汲取空气中的氧气，从而造成无氧的环境，适合厌氧菌生长。培养办法：将平皿去盖翻转，放置焦性没食子酸1克，再覆上一层脱脂棉，在脱脂棉上滴加I0%的氢氧化钠1毫升，然后将接种好的平皿笼罩在翻转的盖上，快速用蜡封固，置37℃温箱中培养2-4天，观看结果。接种的培养基假如是试管，可取大试管一支，底部放焦性没食子酸2克，并加玻璃珠10多粒，将培养基试管放在玻璃珠上，再沿大试管壁滴加10%氢氧化钠溶液2毫升，将大试管口用橡皮塞塞紧，置37℃温箱中培养。

③厌氧肝片肉汤接种：因肝片或肉渣内含有谷胱甘肽，可发生氧化反应而降低环境中的氧化势能，以利于厌氧菌的分别。接种办法是用接种环钩取病料，接种于培养基中，在37℃温箱中培养2-4天，观看结果。