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动物细胞程中目的杂细胞的两次筛在单克隆抗体的制备，获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞是关键已免的B淋巴胞与骨髓瘤细胞融合的过程中，将会形成多种胞的混合体，包括B淋细胞、骨髓瘤细胞BB融合细胞骨髓瘤——骨髓瘤融合细胞B—骨髓瘤融合细胞（杂交瘤细胞）和细胞多聚体（容易死亡，无需筛选如从混合细胞中提取到杂交瘤细胞呢？我们通过下面的例题行说明。下图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解答问题：（1）中有A、两次筛选过，其中A过程目的是筛选出，程的是筛选出。（2）请根据以下信息，设计一方法（考虑机械方法）从培养液中筛选出杂交细胞。已知细胞合成DNA有和S两种途径其中途径能被氨基呤阻断人淋巴细胞有这两种的合成途径，但一般分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两细胞在试管中混合，加聚乙二促融，获得杂种细胞。

方法：。原理：。【解析从不同种类胞中筛选出杂交瘤细胞一般要经过两次筛选。第一次筛选图中A过程前常用HAT选择培养基筛选杂交瘤细。其原理是：的成有D和S两种途径。淋细胞具有两种DNA合途径，但一般不分裂增殖；骨瘤细胞只有一种DNA合成途径，即D途径，可无限增殖；杂交瘤细具有和S两成途径，它利用其中何一个途径都可无限增殖于HAT选择培养基是在普通养液中加入次黄嘌（基呤（）和胸嘧啶核苷酸T）等物质配制而，由于氨基喋呤可阻断途径合成途径的骨髓瘤胞及其彼此融合的细胞不断增殖，且淋巴胞一般不增殖，淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后杂交瘤细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成而增殖。所以多不同形式细胞的混合体在择培养液中，只有杂瘤细胞能存活下来并不断增殖。第二次筛选（图B程于实验小鼠在注射目标抗原前，其体内已存大量的病原体，因此小鼠体内会存在大量的针对不同种类原的免疫淋细胞。所以在细胞融合时产生的杂交瘤胞才是所需要的。目前筛选出目标抗原的最常用方法是有稀释法，其基本过程是：将处于对数期的杂交瘤细胞用培液充分稀释后，接种在培养板中（B

过程图所示后酶联免疫吸附试验称ELISA，基本原理是酶分子与抗或抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的的免疫学性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可吸附在相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变有色的氧化型出现颜色反应此，可通过底物的颜色反来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本的中应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测进行定量测定样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗反应的特异性结合起来ELISA方法成为一种既特异又感的检测方法，利用上述方法选出针对目标抗原的抗体阳性杂交瘤细胞。答案1）交瘤细胞

能产生特定抗体的杂瘤细胞（2）法：培养液中加入氨基喋呤，集增殖的细胞原理加入氨基喋呤使D合成途径阻断仅有D

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