血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定

血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定实验原理使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了CK-MM（酸激酶的主要活性部分）CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活力为余下的CK-B的活力，相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2CK-MB的活力。ADP+磷酸肌酸

CK肌酸+ATPATP+葡萄糖 ADP+葡萄糖-6-磷酸己糖激酶(HK)葡萄糖-6-磷酸+NADP+标本：

6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+(G6P-DH)病人准备：无特殊。类型：血清，肝素或EDTA血浆。标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4（避光保存。活性损失：2～8保存24小时或18～221小时至少损失10%标本运输：常温条件下保存运输。标本拒收标准：细菌污染的标本。实验材料试剂利德曼CK测定试剂盒（试剂1 6×64ml试剂2 6×16ml）试剂组成试剂1（R1）+试剂2（R2：咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC） 20mmol/L乙酸镁 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/LAMP 5mmol/L二腺苷-5'-磷酸 10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH） ≥1500U/L已糖激酶（HK） ≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗体 ≥2000U/L试剂准备：试剂为即用式。试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。：贝克曼AU680生化分析仪操作步骤项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。计算方法：使用ΔA/min均值乘以计算因子得到CK-MB活力。计算因子见下表：ΔA/min×因子=CK活力[U/L]计算因子（37℃：340nm 8254334nm 841412.参考值范围10-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义12肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。在血清中CK形式为CK-MM，，和巨酶等的二聚物。在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的诊断和监视。操作性能线性范围＜1000U/L。批内精密度xsCV批间精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20批内精密度xsCV批间精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)样品130.70.431.40样品131.50.270.85样品282.60.500.61样品293.30.490.53样品31941.000.52样品31871.060.57方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对75个样品进行CK-MB活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x+3.78（U/L；r=0.998。灵敏度：本试剂的检测限为2U/L病人结果可报告范围：2-1000U/L。超出范围结果处理：本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。病危报警值的处理：无。方法局限性本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。1704mol/L684mol/L，血红蛋白2.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L 时没有观察干扰。补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。参考文献Stein W. Creatine kinase (total activity), creatine kinaseisoenzymes and variants. In: Thomas Led. Clinical laboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71 MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry. 3rW.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.

ed.Philadelphia:WurzburgU,HennrichN,OrthHD,LangH.Quantitative ofcreatinekinaseisoenzymecatalyticconcentrationinserumusingimmunologicalmethods.JClinChemClinBiochem1977;15:131-7.Recommendations oftheGerman Society forClinical Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivitiesinbiologicalfluids:Sta