养殖对虾白斑综合征防治技术的研究进展

11/11养殖对虾白斑综合征防治技术的研究进展安徽农业科学，J.AnhuiAgric.Sci.2019,47(7):15-20,24

养殖对虾白斑综合征防治技术的研究进展

张超1>2,王印庚2*，张正2,孙金生1韦信贤3,马来4

(1.天津师范大学生命科学学院，天津300387;.中国水产科学研究院黄海水产研究所，农业部海水病害防治重点实验室，山东青岛266071;.广西水学研究院，广西南宁530021;.北海南生态养殖有，广西北海536000)

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物死亡。但该类消毒剂具有一定的挥发性，因此若使用高浓度的醛类消毒剂应避免直接接触或吸人，否则会对皮肤和黏膜造成一定的刺激性。

1.4醇类消毒剂醇类消毒剂有乙醇、异丙醇等，杀菌原理是使病原微生物的蛋白质发生变性或烷基化，最终导致微生物死亡。此类消毒剂对细菌、真菌、病毒和芽孢均有效果，但一般不用于养殖场消毒，多用于手部、皮肤、器械、注射器针头等消毒。武昌俊等[13]发现乙醇对铜绿假单胞菌

moraasaeragirnwa)和白色念珠菌（Carnii(iaaifiicaras)具有很强的杀灭效果，且对豚鼠皮肤无刺激作用。

1.5酣类消毒剂酚类消毒剂是一类表面活性物质，能损坏病原菌菌体的细胞膜，故有消毒作用。此外，此类消毒剂还可以通过抑制细菌重要酶活性（如脱氢酶和氧化酶）而产生抑菌作用。一般情况下，这类消毒剂仅用来进行环境及用具消毒，对大多数不产生芽孢的细菌和真菌具有杀灭作用，但对病毒和芽孢的作用并不显著。目前市场上的酚类消毒剂大部分是由2种或2种以上成分组成的化合物来扩展其效用范围。而且由于酚类物质会产生不良气味并污染环境，所以开发低毒、高效的酚类消毒剂应当受到重视。

16酸、碱类消毒剂酸类消毒剂是对虾养殖场地常用的消毒剂之一，如0.3%?0.5%硼酸可用于黏膜消毒[1];生石灰是一种常见的碱性消毒剂，其最大特点是价廉易得，多用于涂刷墙体、地面等，或者将石灰添加在需要消毒的液体中，或泼洒在潮湿的地面、污渠等处进行消毒处理[15]，这2类消毒剂的杀菌机理为使蛋白质变性、沉淀或溶解，但此类消毒剂(如硝酸、氢氧化钠等)的缺点在于具有强腐蚀性，会对皮肤或黏膜造成损害，使得此类消毒剂的使用存在一定局限性。

1.7表面活性剂类消毒剂表面活性剂类消毒剂包括胍类消毒剂和季铵盐类消毒剂，其中氯己定、聚六亚甲基胍(PHMG)属于常见的胍类消毒剂。氯己定属于低效消毒剂，多用于皮肤、黏膜等的消毒，此类消毒剂品种多样，但目前单方制剂的使用并不多见，大多是与其他制剂配比使用，才能达到更好的杀菌效果[1]。PHMG是一种新型高分子聚合物，具有安全高效、无毒副作用、无腐蚀性等优点，在医疗、化工、食品、饮水等方面得到广泛应用，此类化合物的作用机理为可以改变细菌细胞膜的通透性，高剂量的PHMG可使细胞膜破裂，引起细胞内物质外泄，从而达到杀菌目的?。郑飞龙等[1]证实1%聚六亚甲基胍对大肠杆菌（0mg/L的二氧化氯与病毒粗提液作用60min后，能使病毒完全丧失感染性，达到灭活的效果;在0.5?250mg/L的浓度范围内，过氧化氢和碘三氯对WSSV没有杀灭作用。Park等[23]使用含氯消毒剂连续处理海水，可有效地预防对虾感染WSSV。Chang等[24]研究发现使用最终浓度为100mg/L的次氯酸钠、聚维酮碘和75mg/L的苯扎溴铵与WSSV常温下混合作用10min,能使WSSV失。

2中草药

中草药是一种纯天然物质，具备来源广泛、价格低廉、毒副作用小、不易导致病原菌产生耐药性等优点[25]，在水产养殖业中也得到了广泛的应用。中草药对水产动物的作用主要包括2个方面:①药物作用，具有抗菌、抗病毒等方面的作用;②免疫效果，能够调节机体平衡与生理功能(如增强体质、促进生长等作用)、提高机体特异性和非特异性免疫力等?。21药物作用许多研究结果表明，中草药对水生动物疾的和疗具有显效。中药效以为以下几类:①抗病毒类中草药，如板蓝根、射干、苦地丁等;②抗菌、抑菌类中草药，如百部、大黄、大青叶、白头翁等;③驱虫、杀虫类中草药，如仙鹤草、草果、常山、五信子等。

此外，在中草药提高对虾抵抗白斑综合征病毒能力上也有大量研究。国子娟等[27]通过对虾原代细胞培养技术筛选出了具有抗白斑综合征病毒作用的中草药。郭志勋等?研究表明，番石榴叶水提取物与WSSV作用超过12h后可使其灭活。江湧等[29]通过在饲料中添加中草药，可显著提高受到WSSV胁迫的凡纳滨对虾的抗病能力。陈辉辉等?研究了复方中草药（内含葛根、黄连、金银花、板蓝根等1味中草药)对感染了WSSV凡纳滨对虾的免疫特性，研究表明该复方中草药能提高对虾免疫性能和抗WSSV能力，且添加量为0.8%和1.2%时效果最佳。

Kumaran等[1]、Balasubramanian等[2]和Yogeeswaran等[3]研究表明，获取的中草药提取物都可以增强虾体对抗WSSV感染能力，存活率大幅提高;Balasubramanian等[3435]对20种药用植物进行了抗病毒药物的筛选工作，研究发现从木橘、苦瓜、狗牙根等植物中获得的提取物具有良好的抗WSSV活性;Bindhu等[6]利用开花蔷薇(AaAigraiMora)乙酸乙酯和甲醇提取物投喂已注射感染了WSSV的印度明对虾(Peraaeiuiraiciu)，试验组致死率是对照组的10%~20%，因此推断可能是提取物阻断病毒在虾体内的转录和翻译过程，进而抑制了WSSV的增殖，减少了对虾体内WSSV的负载

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量。Immanuel等[37]通过实时定量PCR验证了随着投喂的马尾藻密度增加，对虾体内病毒数目不断

降低，0.3%马尾藻投喂组WSSV拷贝数为11，而阳性对照组虾体内病毒数量达106。

2.2免疫效果中草药除了含抗病毒、杀菌抑菌等重要药物成分外，还含蛋白质、多糖、维生素和微量元素等诸多营养成分，因此中草药具备增强机体免疫能力和抗应激能力、调节机体的新陈代谢、促进生长等作用[3_41]，适合在水产养殖业广泛使用。刘波等[42]发现在饲料中添加2.0%杜仲三黄、1.0%三黄均可以提高凡纳滨对虾增重率，降低饵料系数，且能提高对?f抵抗溶藻弧菌(Fifirio感染的能力。

有大量研究表明多糖类制剂一黄芪多糖[43]、葡聚糖、肽聚糖[4_45]等也能提高对虾免疫力，具有抗菌抑菌或抗病毒的效力。将P-1，3葡聚糖添加在普通饲料中，连续投喂对虾20d后，通过肌肉注射进行WSSV人工感染，试验结果表明，p-1，3葡聚糖能提高对虾抗WSSV感染活性[4]。朱卫卫等[47]使用不同浓度的肽聚糖免疫凡纳滨对虾24h后感染WSSV，发现0.15mg/mL剂量组的免疫保护率最高。刘恒等[4]在饲料中添加从海藻中提取的免疫多糖饲喂凡纳滨对虾幼虾，10d后可提高对虾的酶活力和抗菌活力。江晓路等[49]利用海藻多糖(PV911)、北虫草多糖（CP)作为饲料添

加剂连续投喂中国明对虾20d，结果表明2种多糖能显著提高中国明对虾血细胞的吞噬能力、酚氧化酶等的活力，增强对虾的免疫能力。

3益生菌

3.1益生菌特征和益生菌制剂分类目前水产动物疾病防

治中使用的广谱抗生素能有效控制疾病的发生和蔓延，但它会干扰和破坏养殖环境和水产动物肠道中的正常菌群，导致水生动物对病原体的易感性，增强病原菌的耐药性[5]。因此提出使用益生菌制剂，它具有调节机体内微生态平衡、改善水体环境、促进机体生长等作用[51]，从而减少疾病的发生。

益生菌应当具备的特征有:①促进水产动物的生长，增强其抵抗病害的能力;②能在恶劣和不稳定的肠道环境中定殖、生存;③能在保藏条件下长时间地保持性能稳定并维持活力。目前在水产养殖上得到应用的益生菌制剂分为2类：①复合制剂，如由硝化细菌、假单胞菌和芽孢杆菌组成的复合益生菌，与单一制剂相比能显著降低氨氮含量和亚硝酸盐浓度[52];②单一制剂，如光合杆菌Samria)、乳酸菌②通过竞争作用与病原菌争夺黏附位点，进而M病原菌在消化道内定殖;③改变消化道的pH。

3.2.3提高水产动物机体免疫力。益生菌具备调节机体免疫系统的功能，这是益生菌最重要的益生特性[9]。诸多研究表明，益生菌制剂可增强水生动物机体免疫力[066]。朱学芝等[7]通过将由乳酸芽抱杆菌（LacticacidSacity)、地衣芽抱杆菌(Sacitysty/iera/orai)和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌制剂添加到饲料中或直接添加至水体，结果表明均可以促进凡纳滨对虾的生长，且能够降低水体中的氨氮、亚硝酸盐含量。

关于添加益生菌抗白斑综合征病毒方面国内外均有许多报道[68_73]，刘君等[7]研究表明使用益生菌制剂能显著提高凡纳滨免疫，在WSSV以起

一定的免疫保护作用。王晓琳等[7]研究表明，在浸泡和注射2种方式下，芽孢杆菌BZ5(Sa/ty.SpBZ5)能大幅提升对虾超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性，且能提高对虾抗WSSV感染能力。孙艳[76]分析了坚强芽孢杆菌PC024(Sa-c/us_/iram>sPC024)和溶藻弧菌LV463(F/rioaty/o/ty/usLV463)配合使用添加到饲料中，可通过提高对虾免疫水平和抗病基因表达来缓解WSSV在虾体内的繁殖，从而起到抗病毒的作用效果。Zha/等?发现将一株分离自中国对虾(FenneropenaeuscA/era/)肠道的益生菌(Z/atymoraasp.B12)添加到对*f饲料中能增强对虾抗病毒感染的能力。研究发现在饲料中添加由4种乳酸菌和1种酵母菌制成的复合益生菌，在对虾受到WSSV胁迫时能显著提高对存活率?。Hayan-ti?也对芽孢杆菌能提升机体抗WSSV的能力进行了报道。

4RNA干扰技术(RNAi)

近年来研究表明，RNA干扰技术同样可以抑制对虾白斑综毒在中的和，和控

白斑综合征病毒的感染。

Kim等[0]将白斑综合征病毒VP28和VP281的dsRNA肌肉注射给受到WSSV胁迫的对虾，结果发现和对照组相比，能提高对虾的存活率。Xu等[81]用VP28特异性siRNA和在大肠杆菌中表达的VP28-siRNA处理凡纳滨对虾，结果表明两者均能得到较好的免疫保护效果。Westenber/等[82]也通过研究发现dsRNA能够提高对虾的抗病毒能力。Alen-ton等[3]研究表明，dsRNA(VP9与GFP)都能显著增强对虾抵抗WSSV的。

5疫苗的应用

接种疫苗是水产养殖中预防疾病的有效措施，具有特异

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性免疫反应，能够特异性地防治相应的某种疾病，但现阶段疫苗的制备及其在实际生产中的广泛应用仍存在着困难[8]，尤其是对对虾这种体积较小的水产动物而言。

5.1DNA疫苗DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是把主要抗原基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注人动物体内，使外源基因通过宿主细胞合成抗原蛋白，进而诱导宿主产生特异性免疫应答的过程[②在虾池旁边修建蓄水池是改善虾池水质有效的方法，以控制某些病原体的传播，达到净化水质的目的，有条件的地方也可使用沙滤或消毒海水及深层海水[18];③严格监测养殖水体的pH、氨氮含量、亚硝酸盐浓度等水质指标^9—110，若指标偏离正常水平，应该及时采取措施进行科学改良。

6.4混养模式混养是一种有效提高养殖效益的模式[m_113]。混养模式不仅能充分利用不同水层空间，增加池塘负载力，而且能合理利用水体中的天然饵料资源[14]。各种养殖品种的生活习性和食性有所不同，可利用不同水层空间[115_116]。若合理混合多个不同养殖种类，既可以充分利用整个养殖池塘的空间，增大单位面积水体的养殖承载量，又可使各种天然饵料资源都合理的配置，更好地发挥养殖池塘生态效益[117—118]。

混养模式还能发挥养殖种类之间的协同作用[119]，一些鱼类通过摄食活动，清除池塘中水产动物(对虾)的残饵和粪便，减少沉积[120]，提高饵料利用率，改善池塘养殖条件，也可通过摄食活动，搅动底层池水[121]，促进上、下水层的对流，有利于养殖池塘底层的物质循环及营养流通，提高全池养殖动物的生长和产量[12]。

7小结

对白斑综合征病毒不同防治方法进行了综述，但这些防治手段各有其优缺点。如传统的治疗和预防水产动物疾病的方法是大量使用抗生素和化学药物，但频繁使用这些药物极易引起养殖和水体环境的污染、药物残留、病原微生物产生耐药性和破坏机体内微生态平衡等诸多负面影响[123];而中草药具有天然、毒副作用小、无抗药性、无残留和耐药性、资源丰富等独特优势，完全符合发展无公害水产业、生产绿色水产品的病害防治原则[124]。益生菌制剂也具有促进水产动物生长，降低生产成本，提高产品质量，减少疾病的发生，改善水体污染等特点，因此益生菌制剂将来有可能成为抗生

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素的替代品，有着较好的发展前景[125]。采用RNAi技术和疫苗来注射免疫对虾，对于水产养殖实际生产来说耗费成本太高，所以这种防治方法不适合大规模地投人到实际生产应用中，而且水产疫苗要得到更好的推广和应用，需要具备用量少、效价高、保护力强、免疫期长及使用安全方便等优点，同时，疫苗相关新兽药证书的申请也是个十分耗时的过程。

病原体、虾体和养殖环境是产生虾病的重要因素，三者相互影响，是虾病产生与否的基础。因此，应当从这三方面

综合考虑，采取切实有效的防治措施。主要包括利用中草药这一绿色、环保药物和益生菌等添加剂来提高虾体自身非特异性免疫能力;结合混养吞食鱼类摄食病虾、死虾的防控技术，能够及时消灭传播源，有效控制对虾白斑综合征病毒的蔓延;采取综合的防治措施，减少渔药的使用，生产绿色对虾产品，促进对虾产业可持续发展。

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