分析方法的确证实验

人用药品国际注册的药学研究技术要求浙江省药品检验所陈镇生第1页，共28页。分析方法的确证试验

（Q2A）Ⅰ简介：Ⅱ需要确证的分析方法类型：附件A:术语第2页，共28页。简介内容分析方法确证的参数术语和定义分析方法确证的目的证明该方法适合预期目的第3页，共28页。需要确证的分析方法类型鉴别试验杂质定量试验杂质限度试验原料或制剂中活性成分以及制剂中选定组分的定量测试第4页，共28页。典型的确证参数(Characteristics)准确性(Accuracy)精密度(Precision)重复性(Repeatablity)中间精密度(IntermediatePrecision)专属性(Specificity)检测限度(Detectionlimit)定量限度(Quantitationlimit)线性(Linearity)范围(Range)耐用性(Robustness)第5页，共28页。表：分析方法的类型定性鉴别杂质检查含量分析；溶出度(含量测定)；项目定量限度检测含量／效价准确度-+-+精密度重复性-+-+中间精密度-+①-+①专属性②++++检测限度--③+-定量限度-+--线性-+-+范围-+-+注意：-表示通常不需确证的项目；+表示通常需确证的项目；①假如测定了重现性（见术语表），中间精密度可不测定；②缺乏专属性的分析方法，应由其他分析方法来作补充；③有些情况下需要。第6页，共28页。下列情况需重新确证原料药合成方法的改变制剂组分的改变分析方法的改变术语表

1．分析方法（Ana1ytica1procedure）分析方法指的是进行分析的方式，应详细描述进行每个分析试验所必需的步骤。它包括（但不局限于）：样品、参比物、试剂的制备，仪器的使用，校准曲线的绘制，计算公式的运用等。第7页，共28页。2．专属性（Specificity）专属性是指在一些可能存在的组分如杂质、降解产物、基质等的存在下，对被分析物质的准确可靠的测定。一种分析方法缺乏专属性时，应由其他分析方法作补充。专属性有以下含义：定性鉴别：确保被分析物质符合其特性。纯度检查：确保采用的分析方法可检测出杂质，如有关物质、重金属、溶剂残留量等。含量测定（含量或效价）：可提供样品中被分析物的含量或效价的准确结果。第8页，共28页。3.准确性(Accuracy)准确性指的是真实值或认可的参考值与测量值之间相近程度。准确性有时也称真实度。4.精密度(Precision)精密度指的是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行一系列检测结果的一致程度（离散程度）。精密度可以从三方面考虑：重复性、中间精密度、重现性。精密度检查应使用同一匀质的、可信的样品。如果得不到，可用人工制得的样品或样品溶液进行研究。分析方法的精密度通常以测量法的变异性、标准偏差或变异系数来表达。第9页，共28页。4.1重复性(Repeatability)重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔的精密度：也称为日内差(Intra-assayprecision)。4.2中间精密度(IntermediatePrecision)中间精密度指的是试验室内部条件改变（如：不同天、不同分析测试者、不同仪器等）情况下的精密度。4.3重现性（Reproducibility）指不同试验室之间的精密度，常用于合作试验研究(collaborativestudies)中的方法学的标准化研究。5．检测限度（Detectionlimit）检测限度指的是样品中的被分析物质能够被检测到的最低量，通常无需定量。第10页，共28页。6．定量限度（Quantitationlimit）某种分析方法的定量限度是指具有合适准确性和精密度的条件下，能够定量测定分析组分的最低限量。它是样品中含量低的化合物定量分析的参数，特别适用于杂质和（或）降解产物的测定。

7．线性（Linearity）分析方法的线性是指所得检测结果与样品中被分析物的浓度（含量）成比例关系的性能。8．范围（Range）分析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度(量)和较低浓度(量)之间的区间、已证实区间内具有合适的准确性、精密度、线性。9．耐用性（Robustness）分析方法的耐用性是指试验参数适当地发生细小改变时，测量能力保持不受影响，可用于说明正常使用时的可靠性。第11页，共28页。分析方法的确证：方法学

（Q2B）第12页，共28页。1：简介目的：对每一种分析方法中参数的确证提供指导和建议申报中建立数据的表示方式注意：整个方法学确证中，必须采用经过完全确认的、纯度已知的参比物质来确证。参比物质的纯度要求与使用目的应一致第13页，共28页。2：专属性鉴别通过与参比物（结构相同）比较得到正结果或负结果通过与被测物结构相似或相关物质比较得不到正结果含量测定和杂质检查色谱方法色谱图(标出每一成分)分离度—专属性的标准非专属性方法用其他支持性的分析方法来辅助可得到杂质用加入法得不到杂质强力破坏后用不同方法比较测定峰的纯度(二级管阵列、质谱)第14页，共28页。3：线性原料药（标准储备液）至少5个混匀的制剂组方浓度系列采集信号测定统计（线性关系或函数关系）第15页，共28页。4：范围在尽可能大的浓度范围内均能获得良好的线性、精密度和准确性最小的规定范围：对原料药或制剂的含量测定80～120%对含量均匀度70～130%对溶出度规定值的±20%对杂质检查为报告的杂质水平至所订限度的120%对已知有异常功效或有毒杂质与其“水平”相当同法测含量和杂质(且用100%标准品)从杂质量到120%第16页，共28页。5：准确性含量测定原料药用该方法去测已知纯度的物质将该法与另一成熟方法比较在精密度、线性和专属性建立后得出制剂用该方法去测按处方量制成的混合物（加入已知量被测物）在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较在精密度、线性和专属性建立后得出第17页，共28页。杂质（定量）在样品（原料/制剂）中加入已知量的杂质无法得到杂质/降解物的，与采用其他方法测得的结果比较，可以使用原料的响应值申报数据在规定的线性范围，对3个浓度测9个数据来评价回收率或平均值与真值的差异及它们的置信区间来评价第18页，共28页。6：精密度含量测定和杂质的定量测定均应作精密度考察重复性在规定范围内测9次（3种浓度/每种重复3次）或在试验浓度100%时测6次中间精密度确定随机事件(日期、分析者、仪器等)对精密度的影响重现性试验室之间申报数据均应报标准差、相对标准差和置信区间第19页，共28页。7：检测限度根据直观评价（用于仪器或非仪器）根据信噪比（用于有基线噪音的方法）已知低浓度被测物的信号32空白样品的信号11根据响应值的标准偏差和斜率检测限度（DL）=3.3σ/sσ：响应值的标准偏差（通过空白样品测背景响应值或Y轴截距）s：校正曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）=或第20页，共28页。申报数据检测限度检测限度的测定方法DL是由直观评价或信噪比得来（报相关的色谱图）DL是由计算或外推法得来的估计值，则应专门对一些已知接近或就在限度上的样品进行分析σσACs=1σ=0.1DL=0.33

s=1/2σ=0.3DL=1.98

第21页，共28页。8：定量限度直观评价在准确度和精密度符合要求的前提下，能测得的最小量根据信噪比（用于有基线噪音的方法）已知低浓度被测物的信号10空白样品的信号1根据响应值和斜率的标准偏差定量限度（QL）=10σ/s=第22页，共28页。σ：响应值的标准差（通过一组空白样品的分析或根据校正曲线）s：校正曲线的斜率申报数据定量的限度定量限度的测定方法分析一些已知接近限度或限度上的样品来证实第23页，共28页。9：耐用性证实在某些参数由微小的变异后，分析方法仍可靠典型例子：供试液的稳定性萃取时间在HPLC中流动相的pH值的变化流动相组分的变化柱子不同（不同批号和供应商）温度不同流速不同第24页，共28页。在GC中不同柱子（不同批号和供应商）

温度不同流速不同如分析方法对分析参数变化是敏感的，则该分析参数就应适当控制或在方法中注明。第25页，共28页。Q2：方法学一九九九年九月完第26页，共28页。精密度试验应使用同一均质、可信的样品多次取样进行一系列试验称量溶解(回流提取、超声)加各种试剂反应温度、时间、光照等时间影响供试液测定第27页，共28页。内容梗概人用药品国际注册的药学研究技术要求。注意：-表示通常不需确证的项目。①假如测定了重现性（见术语表），中间精密度可不测定。一种分析方法缺乏专属性时，应由其他分析方法作补充。精密度指的是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行一系列检测结果的一致程度（离散程度）。如果得不到，可用人工制得的样品或样品溶液进行研究。重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔的精密度：也称为日内差(Intra-assayprecision)。6．定量限度（Quantitationlimit）。分析方法的确