葡萄组织培养回顾与展望

精选优质文档-----倾情为你奉上精选优质文档-----倾情为你奉上专心---专注---专业专心---专注---专业精选优质文档-----倾情为你奉上专心---专注---专业葡萄组织培养回顾与展望１８年第２９９期干旱区研究葡萄组织培养回顾与展望李宇光（周科学院新疆生物土壤沙漠所）巾关键调：葡萄，组织培养葡萄是一种历史悠久、种植广泛、品种繁多的园艺果树，又是一种用途极广、价值很高的经济作物，堪称果树之王，葡萄生产在世界果树生中占有举足轻重的地位。植物组织培养这一种神奇的生物技术手段与葡萄常规育种的有机台，实现综合育种目标所必需，将是它进一步推动全球的葡萄生产，从而使葡萄这一古老的植物进一步造福予全人类。回顾的创始人Ｇｅｇｅｏｒ】ｏｒｓＭｅ他第一个掇导葡萄组织培养的是著名的法国“花工兰提出了葡萄愈伤组织培养所需要的适宜生长素浓度，培育出了低生长素细胞系和无激素细胞系，并描述了茎外植体上诱发愈伤组织的位点｝他还用葡萄愈伤组织研究寄主与寄生物之间的关系，首创了双重培养法，从而奠定了试管条件下病毒侵入细胞机制研究的基础（ｏｅＭｒｌ１４ａｂ４，ｌ４）。９４，，ｌ５７９９五十年代的葡萄组培工作主要集中在冠瘿细胞的生理研究巳。对细胞培养物在解剖学、化学、酶学上的差异以及对维生素的需求，光照、糖分渗透压对无激素长期培养细胞生成花青素的调节作用等等进行了广泛的研究（ｏｆｗｉ９２，ｂＳａｃａＳｗｅ—Ｃｚｓｌｓ，１５ａｌｂｋ—ｚｙｏｋＪｅｋｗｓａ，ｌ５，Ｇａｔｒｔ１５）。此外，从培养的葡萄茎外植体上获得了不定根ｏｋ９ｕｅ，９５ｈｅ（ｉｏ，９５｝建立了第一个葡萄根瘤蚜瘿的单细胞无性系（ｉｄｅｒｎ，９８。Ｆｏｉｔ１５）Ｈｌｂａｄｔ１５）在整个六十年代中，系统地确定葡萄根赠蚜瘿和河岸葡萄单细胞无性系诸生长因子的研究占了很大比重（ｌｔｔｌ１６｝Ａｒａｔｌ９２，ｂ｝Ａｒａ，ｌ６，１６，Ｐｅｅａ，９０ｅｙｅａ，】６ａｙ３９４９ｌ６ａｂ，ｃ５．９｝Ｈｉｄｅｒｌ，１６｝ＡｒａｎＨｉｄｅｒｎ，１６ａｂ。在确知成ｌｂａｌｄｔ９３ｙａｄ１ｂａｄｔ９９，）分的简单培养基上建立了葡萄冠瘿的单细胞无性系（ｉｅｔ３｝还从离体培养的浆Ｒｅｎｒ，ｌ６）９果上获得了愈伤组织（ｄｅ，１６）。不过，通过热处理成功地获得葡萄脱病毒无性系Ｒａｌｔ９４并初步解决热处理后茎尖的再生与发育问题，恐怕要算六十年代中最有应用价值的研究工作（Ｇａ１１６ｙ，９１，１６ｚ９２，１６ａ，ｂ，１９９４９ａ｝Ｇｉｆ６ｆｏｒｄａｎＨｅｔ，１６，Ｈｏｅｆｒｄｗｉｔ９１ｆｅａｎＧｉｆｄ，１６ｌｄｆｏｒ９４ＧａｙｎｄｌａＣｏｍＰａｚｎ，１６９８）。自步入七十年代后直至八十年代的今天，萄组培方面的研究突飞猛进，论从发表文章葡无的数量看还是从研究的多样性看都大大超过以往任何时期早期的一些生理病理研究智告一

３６干旱区研究】８年第２期９９段落．代之而起的是许多新的振奋人心的用研究工竹：脱病毒及器官再生方面的研究非常活跃，大多集中在热处瑚后茎尖培养中理化诸因子的优选上（１ｙ，１７．１７，］７Ｇａｚ９１２ｑａ９；１７％９Ｉ，１７，Ｇｒａ，１７．１Ｉｃｉｃｃ，ｔ６ｊ９ｒｎ９ｅｔ９ａ譬ｎＩ；１Ｍｕｒ，１７；Ｖａ１ｃｔ＆，１７＝Ｃ、，ｌ８；ＣｅａｎｄＰ００１１８９９ａｔｌ３＇９ｈ（ｅ９０ｋ‘，９２，１８，１５ＧｏＳｒ３８｝９９ｕａｄ，１８｝Ａｔｎｏｔ１９６。发明了两种新的脱毒培养Ｓ２９ａｖｅａ，１８）ａｓ法：ｌ、诱发珠心胚脱毒培养法（１ＳｎＳｉｉｓｎ，１７，ｌ７）｝２热处理Ｍｕ１ａｄｒｎ＂ａ９６０８茎尖嫁接培养法（ｕＯａｄｎ—ｎ１ｉＳ］７；Ｅｒ１ｂｃ－ａｄＡｙｎＰｅａＩｓ＆，９８ｓｇｅｇｈｔｎｌｅｒｃＳｃｗｅｄｔｅｒ９。葡萄离体营养器官和生殖器官的发育解剖学、形态发生调ｈｆｇ，１７）ｒｅ９节、内源激素动态与开花生理均受到了深入研究（Ｌ订０ａｄｊｖｒｋ，７；Ｍｕ．ｖｎｏ！“ｌ８ｚ９ｒ１８ＳｒｎｉａｓａＭｕ１ｉ９ｌｉｖａｎｎｄ１ｎｓ，１７８；狞ｅｎａｄａＭ“ｒ１９Ｆａｖａ１ｄ９ｒｆｎｄ，９ｆｒｅ３Ｇｒｎｎ１７｝Ｉｖｒａｔｌ１８）取材部位、｛柳生ｅａ，９９ｚｏｋｃａ，６ｓ９＝ｉＩｃ节帮、微量元素、光谱及光周期对茎尖培养物生长发育的影响得型了详细观察（ｎＩ０１１８，］７Ｃｈｅ０ｄ。，２９；９８Ｇｏ０ｊａ３ａ，ｌ８｛Ｃｈｅ１８｝ＹｕｎＭｅｅｔｔｔ８）；利用茎尖及其它ｌｄｒｎ１１９２ｔ∈，９６ａｄｒｄｉｔ６，９器官培养法长期保存葡萄种质的试验也有了可喜的结果（ｏｅ，】７’／ｉｌ，１８Ｍｒｌ９５３ａｃ９５１ＧａＹ，１５Ａ１ｗｅｄｔｎｄｔｓｔＬ＆ｌｚ９８，１ｅｌａｔａｒ—ｎｇｅｕｃｈｅ，ｊ８）。ｎｂｒ７９从许多不同来源的外植体中成功地获得了愈伤组织，这包括卷颓、节间、茎、芽、花序、装果、叶肉、叶柄、果柄、胚乳、花药以及多个葡萄品种的四倍体、二倍体无性繁殖系（ｌｅａ，１７；Ｈａｅａ１７ｊ毋锡金等人，】ｆＪｎｎｗｅｂＳｔｌａｄｔｔｌ９２ｗｋｒ：１３ｅ０９７ｏａａｄｂ．１７ｒｚａｕｅａ，１８｝Ｋｉ９８Ｂｅｅｎｔｌ０Ｊ９ｍａＰａｋｌ８ｊ王蕴珠等人，ｔ８）还从果皮ｎ，９１ｅ９５及叶肉的愈伤组织原生质中诱发再生了新的细胞壁积愈伤组织（ｋｎ，１７ｊＳｅｅ５Ｂｒｚａｕ９ｅｅｎａｄｏｕ９４ｎＲｓ，１８，Ｓｉｚ，１８）。不同光谱、不同外植体及某些生长调节荆类化台物ｈｍｉｕ９５（ＰＴＵｓ如）对愈伤组织分化和生长的作角受到了重视（３ｅｅＩｌｔ１ｔ８，Ｌａａｄｆｒａｉｅａ，９０ｚＩｉｎＩ２８￣Ｓｏｎｖｅａ，１８￣Ｉｖｒｋｅａ，１８）。对利用葡萄愈伤组织渡培，９０ｔｉｏａｔｌ９５ｚｏｓ￣ｔｌ９６生产食用色索也进行了试验研究（ｚＯ＂ｋａｄＩｖｓａｎＬｉ。ｔ０ｒ１ｖ，８｝ｙａｋｗａｅａ，９ｍａａｔｌ１８）。９￣诱导葡萄植株再生的工作卓有成效，已从近三十个品种、杂种和野生种的以下外植体中获得了不定胚和小植株：Ｉ、未受精的胚珠（ｕｌ￣ａｄＳｉｉ￣，９％Ｍｕｌｎ，Ｍｌｉｓｎｒｎｖｓ１７ｌ￣ｓ１７８Ｃａｎ１８ｊ９Ｊｉ，９０Ｃａｎｅａ，ｔ８）；２、花药（ｒｂｙｈｔｌ１７；ｉｔ１９３Ｈｉａａｉｅａ，９６ａｓＲａａｋｒｎａｄｊｓａａｎＭｕ１ｎ，ｌ７，ｔ８，曹孜义等，１８；Ｓｉｉａａｅｌｉｓ９９３９０ｎｖｓｎ，ｔ８；邹昌杰９ｒ９０和李佩芬，ｔ８，鲍雪珍等，ｔ８ｊ刘彭昌等，ｔ８，Ｈｉａａａｉｎ９１９１９２ｌｂｙｈａｄ＇ＳＡｋａｉｍａ１８，ＭａｔｌＩ８）；３、花序、幼茎、幼叶、叶柄及脉问区ｈ，９２ｕｏｅａ，６ｒ９（ｎｅｖａａｅ）（ｕＩｔｒｅｎ１ｒａＫｒ】ａｄＪｎＷｏ１ｙ，ｌ７Ｆａｒ，ｔ７；Ｋ０ａｋａｄｒｅ９７ｖ７ｅ９ｖ１ｎＯｎｅＬｖｋ，９￣ｅｅｏ１８）。对胚珠培养中诱发不定的理化调节因子、其与胚休眠和发育的关系以ｎ及对植物育种的意义也进行了探讨（ｕｎｅｓｎ０ＫｒｌａｄＭｙｒｏ，ｔｊ９Ｍｙｒ０，１８）８ｅｓｎ９１迄今为止已发明了三种葡萄试管快速繁殖的方法：１、通过节衄茎切段培养（ｏ１ＰＯａｉｄ１ｐｏ儿，１７｝Ｅｃｖｔｌ７曹孜义等，ｌ７ｊ日ａａｋａａｎ＂ｗｅ９５ｅｉ，９９９９ｊｓｅｒｎａｄＭｕ１ｎｓ１８，ＣｉＯｊ１２齐与枢等，】８）；２、通过茎尖培养（ｏｌｉ，９１ｅｔ。９；４２８９５ＪｎＨａＷｎｄｅｂｅ。１７ｔ＆ｉａｄＳｔｒｒ９８Ｉ－ｒ１ｒＳｎｔｅ０ｎ，１，ｅＩｉｓｋｏｖ７；Ｍａｈｉｅｔａ，ｔ８｛ｃｒａ１９７鼻０ｏ，ｊ８，ｄｒＪ６：ｅ始雒舞精，ｊＣｌｅａ，Ｊ８Ｊｎ８，】“ｔｉ￡Ｌｉａｄ

１８年第２期９９～—————————————…————————～干旱区研究——————～———３７——————一——————～…————ＥａｔｏＢ，１８；＜ｕｏｌ９４ａｎｄｒＳａ８ｄａ，Ｉ８｛ＰＳ０Ｓｗ５９ｓｅｔｌ９５ＺＥｔａ１８ｌｙｋ０ｎｄａＭ。ａｒ１８；ＧｒｎＦｉ，１８｝Ｊｋｌａ，９５ｙａｄｓｅｈｒ９６ａｏ，１８）ｊ３、通过液培切碎的茎尖诱９６发不定胚或丛生芽（ｌｓａｄｋｎ，１７，１８Ｂｌｓ１８ａＢａ“ｎＳｅ９８２ｒｓｅ９ａａ，９０，ｂ，１８ｂＩｒｓ９１ＳｅｃａｄＢａｌ．１８；Ｂｓｃａ，１８），经此法诱导出的葡萄试管苗成功ｋｎｎｒａ１ａｌｔｌ９２ｓＳ０ｒ地去除了热处理准以奏效的卷ｒ、黄斑瘀等病害，还被用于抗盐育种试验（ｒａｎＢａｌｓａｄｓＳｋｎ，ｌ８＆。从某些诱导再生的葡萄植株上发现幼态特征（ｕｅｉｅｃｈａａｃｒｅｅ１）９Ｊｖｎｌｒｔ—ｃｉｉ）的回复现象，这引起了不少学者的重视（ｌｉｓｎＳｉｉａｌ１７ｓｓｌｃＭｕｌｎａｄｒｎｖａｌ９６Ｓ，ＢａｌｓｎＳｎ－ｌ７｝Ｍ１ｉｓｎＮａｒ１７Ｎｏｅａｔｌ１８）。不同ａｒｓａｄ＿，８ｅｃ９ｕ１ｎａｄｉ９９ｒｎｅａ，９３ｚＣ０浓度、不嗣体积的培养用容器和继代外植体对试管苗移哉前后生长的影响也得到了报导（ｏｅｔ．９ａＭｎｔｅ１§，ｂ，Ｆ０ｒｉｌ：ｎｓｓｌ６ＬＯｔｌ１８）。ｕｎＯ１：ａｄＤｅｉ，９；ｋｓｅａ，９６２ｓ８１７年春天世界上第一个植物组培商用葡萄园在美国马里兰州西尔弗朗（ｉｖｎ９７ＳｌｅＲｕｎ建成。这个葡萄围是出法匿杂种葡萄维尔试管诱发的不定胚培养发展而成的（ｕａｄＫｒｌｎＷｏｌｙ１）。荻ｊ出离体单芽茎段培养发展起来的第一个试管葡萄园也于１７年在甘ｒｅ，９７７ｊ９９谢农业天学建战并于ｌ：开始结果（与枢等，１８）。近几年通过生产试验，他们又进９年８齐９３一步摸索建立ｒ一条生产：流程并推广应用。亡艺干始“山之，可班攻玉”。为了便于参考，特将以上所举诸多文献整理总结，后按：他现然愈伤组织及绱胞培养、不定胚诱发培养、花药培养、原生质培养、试管快速繁殖五个专题分别列出各自的培养要点，每个专题又分为五栏：１、外植体，主要揩适宜的外植体取材来源、部位、时阊或生理状态等；３、物理条：主要指培养时的光、温等条件Ｉ、化学条，３件，包括除植物生长调：之外的所鼍要化学培养条件，如无机盐、碳源、ｐ剂Ｈ、维生素等等ｊ４、调节剂，包括植物生长紊及细胞分裂索的经验用量及搭配使用方法；５、其它。由于葡萄组培的上五个方面实际上是互为条件、紧密关联的，譬如；试管快速繁殖可以用花药、不定胚甚至原生质作为外植体，而培养的第一步脱分化又往往产生愈伤组织，这样，所谓试管快速繁殖这一个专题就可能同时涉及并囊括其它四个专题。此外，由于不同作者选用不同外植体、运用不同培养方法均取得了较埋想的结果，而艰予篇幅本文不可能全部予以介绍，唯有忍痛剖爱将其中具确共性的或似乎效果更为理想的列出。因此，在参考或应用中应注意领悟实质，融汇贯邋，不拘一格，以实践作为检验的标准，举一反三，不断创新的最佳效果。最后特意要指出的是：由于笔者掌握的资料有限，个人所做的葡萄组培工作也很有限，话臻或失妥之处在所难免，敬祈读者予以斧正。表中所用英文缩写简介如下：ＭＳＭｓ养基（５ＷｉｃＮｌｈ类推）：培Ｂ、ｈｔ、ｓ等ｃＣＨ：水解酷蛋白Ｓ：蔗糖ｕｃＫｒＮ：激动素ＮＡＡ：萘乙酸Ｚ，４～ｆ：二四滴）１、－乙酸Ａ．：ｊ１Ａ１６～一珐螵畴：３?§氨ＶＵ：维生翥ｉ（ｉ等类排）３｛。ｚＥＡ：玉米索ＮＯＡ：荣氧乙酸ＧＡ赤霉酸ｓ：ＩＡ：吲哚丁酸Ｂ１，／ｄ；小时／天ｒｉｇｉ毫克／升（／ｌ推）ｉ／；／ｇ类

３８干旱区研究１８年第２期９９ｕＭ；微克分子（ｍＭ类推）ｌ、愈伤组织及细胞培养外植体：某些基因型（别是四倍体无性系）的几乎所有器官或都位。四、五月接种。特物理条件：兰光１Ｎ１ｈ／ｄ，２￣２。２６ｒ５７Ｃ。化学条件；Ｍｓ（Ｈ５２５６，Ｓｃ８４８．ｍＭ水解淀粉加ｖＢＩ（瘿细胞系Ｐ．～．）ｕ５．～７６冠时）ＣＨ．～２ｇ１或酵母ＲＮＡｌ￣４ｔ／１０５／，０１ａＢ。调节剂：苯氧乙酸类植物生长素（２，４一Ｄ、ＮＯＡ、ＮＡＡ、』如ＡＡ、五氯苯氧乙酸）或细胞分裂素（ＫＬＮ、ＢＡＰ、Ｚ如ＥＡ）０５２Ｉｇ１．～Ｉ／。１其他：１、外植体可取材部位虽然广泛，发频率似乎不尽相同２、机复合物并非诱有培养所必需，３、不加生长调节剂似乎对长期培养更为有利。２、不定胚诱发培养外植体：某些基因型的某些器官或部位，如自然或人工强制休眠后未受精的胚珠的薄壁细胞（特别是珠孔区、囊盖区ｎｃｌａｃｌＯｔ、珠柄及下胚轴表皮细胞）Ｊ花药（ｕｅ１ｒａ１ｔｅ培养要点另述），幼花序，幼茎、幼叶、叶柄及脉间区。物理条件：暗，２￣３Ｃ５５化学条件：１２ＭＳ（球时）Ｍｓ花，时）Ｎｉｃ或改良的Ｂ６Ｓｃ．Ｎ０４／胚，（叶，ｔｈ，ｓ。ｕＯ２．Ｍ（苗时）。ＣＳ０／ｌ液培。成Ｈ０ｍｇ。调节剂｛Ｏ１４ｍｇｌＡＡ，．～／ＩＢＡＰ，，一２，２４Ｄ，４一Ｄ加ＢＡＰ，ＧＡＫＩ；后较低或３加Ｎ而浓度（０Ｏ～Ｏ４ｇ１的ＮＯＡ，如．１．ｒ／）ａＮＡＡ，ＮＡＡ加ＢＡＰ，Ｂ或ＡＰ加ＮＯＡ渐转至无激素。其他：１、苯氯乙酸或带氯乙酸侧链的生长索对诱发不定胚似乎必不可少２、不定胚的生成似乎是基因型专一性的，３、理化因子对诱导不定胚有利时对成苗似乎就不利，反之亦同。例如夏天接种时诱发胚较宜但成苗困难，反之，冬天接种时诱发胚困难但一旦诱发出胚后成苗较易。３、花药培养外植体：某些基因型（与白玫瑰＜ａｆＡＩｘｎｒａ或蟹奠＜ｔｓ如Ｍｕｔｏａｄｉ＞ｓｃｅｖｉｉｔｕｂｒｉ有亲缘关系的一些品种、杂种或某些种的雄性植株）经预处理（４。?２ｎｅｇ＞ｈＣ７ｈ）单核期前花药。ｒ的物理条件：诱发胚时：２“?２５／１。?ｈ／ｄ。７Ｃ．Ｗ２２ｌｒ６成苗时；４。?１￣５ｄ暗中培养。Ｃ４６化学条件。Ｂ或改良的Ｂ（４ＫＮ０。３００Ｂ１＜，０ｍ／，ＮＨ?ＳＯ?４ｍｇ１＞１０／，ＮａｏＭＯ４?２Ｈ．２ｍｇ），Ｎｉｃｈ（ＦｅＯ４?７Ｈ．ｍｇＬ），或改良的ｚ００５／１０ｔｓ加Ｓ２０５６／ＭＳ（谷氨酰胺腺嘌呤）。加Ｓｕｃ２～３。ｐＨ５．～６ＯＣＨ０／】液培（脂Ｏ４０６，振动８８。６ｍｇ，０琼．～．０次／分钟）。调节剂：诱发肛时：２，４一ＤＯ５１１．～．ｍｇ／１ＢＡＰ０２２ｍ／ｌ或ＮＡＡ０２加．～ｇ，．ｍｇ／ＩＢＡＰ４ｍｇｊＧＡＤ３ｇｌ成苗时：ＢＡＰ０５ｇＪ加／或３．／。ｍ／。

１８年第２期９９＝早区研究Ｆ３９其他：１、一般程序为先诱发不定雠而后培养成苗，２、移栽再生株时避免高温曝晒，但须保持高湿度（相对湿度８）、高光强（４，Ｏｌｘ）。可先去塞锻炼，然后移入如０如０ＯＯｕ砂壤营养土袋进温室，最后入苗圃。４、原生质培养外植体：某些基因型的果皮、叶肉或茎的愈伤组织除去细胞壁后培养。物理条件：２。６ｃ。暗。培养基和脱细胞壁甩酶液均须用细菌过滤器消毒。化学条件：果皮时，０ｈａ－ＮｉｃｈＳＯ０～０２Ｍ或山梨酵糖０２ＭＪ核糖ｙｍａＳ；ｕ．３．３Ｌｃ．４１６ｍＭ，萄糖１３ｍＭ，木糖和阿拉伯糖各１ｍＭ；醇５５ｍ｛．７葡．９肌．ｒａＣＨ／Ｉ谷氨酸ｌ．２ｇ，３７ｓｍ，甘氨酸００ｍＭ，色氨酸Ｏ９Ｍ；维生素与Ｇａｂｒ一一Ｅｖｌｉ相同，琼脂ａ．５．５ｎｒａｔｏｇｅｅｇｈ６ｇ１／。叶肉或茎时：】或Ｅｉｓ１ｙｎＳＯ柠檬酸３ｇｊ（氧化）Ｉ甘露醇０５Ｍ３．ｎＵａ—ｋＯｇｃ／抗．６（持渗透压）液培。维调节剂：果皮时，ＢＡｒ，２，４一Ｊ或ＮＡＡ１ｍ／１叶内或茎时，２，４一Ｄ１～１５）ｇ。．１／１ＢＡＰ０５１ｍ／ｌ９ｇ加１．～ｇ。其他：除细胞壁时可用纤维素酶１～２，果胶酶００～１｝ＫＣＩ．Ｍ，Ｃａ：．１ｏ１Ｃ１０１Ｍ，ｐ．，同渗重摩＜０Ｍ，暗中处￣１ｈ。也可加用离析酶和崩溃酶，．４Ｈ５５．６ｒ并用梯度渗滤器浮选或滴洗纯化所得原生质。５、试管快逮繁殖外植体：迅速生长期或低温处理后新发枝上带小叶的单芽茎段｝带２～４个叶原基０２．～０５ｍ（毒时）或１～２ｍｍ鼍的腋芽茎尖｝切碎的茎尖。．ｒａ脱物理条件：２～３。５Ｃ，３。（碎茎尖时）２００３ｏＯｕｌｈ／ｄ０５Ｃ韧，０￣，Ｏｌｘ?６ｒ。化学条件：改良的ＭＳ（醇２ｍｇ１大量元素和Ｓｃ减为１／２或１／８）（肌５／，ｕ均单芽茎段时），Ｂ，ＮｉＳ或改良的Ｍｓ（浓度减为１／１）（尖时）｝１／２ＭＳｔｈＣ氨０茎或ｗｉｅｈｔ同时降低Ｍｎ、Ｉ浓度提高ｖＢ浓度（根时）Ｉ琼脂６～８ｇ｝液培并加入切一一生／ｌ碎的叶片（碎的茎尖时）切调节剂：单芽茎段时ＩＡＡ．～Ｏ３／１ＩＡ０２／ｌ２，４一Ｄ１Ｉｇｌ０１．ｍｇ｝Ｂ—ｍｇ或．ｍ／加Ｂ．ｌ０２／１茎尖时，ＢＰ１～２ｍ／１生根时ＮＡＡ０１ＡＰ０Ｏ～．ｍｇ。Ａｇ，．ｍｇ／ｌｌＡ．２或Ｂ００ｍｇ１移栽前ＮＡＡ００ｍ／１先后在０９／ｊ／，．５ｇ｛．ｇＢＡＰ、０８．ｇ／ｌＢＩＡ中浸泡各１分钟，５其间甩含１ｍ／ＩＡ的Ｍｓ养（后用１／２ＭｓＭｓ）。切碎的茎尖时，ＮＡＡ００～ｇＮＡ培之或．２０３ｍｇ／１ＢＡＰＩ１４５ｇ１．７加．～．ｍ／。其他：１、移栽注意事项与花药培养时相同，２、外植体为单芽茎段时可采用练台无伤消毒法（５与枢等，１８），３、热处理法脱病毒时一般采用３。?ｏ，整株或茎尖均３５９５Ｃ９ｄ可

４０干旱区研究１８年第２期９９展望综上所述，葡萄组织培养迄今为止已取得了相当可喜的进展和成就。但是，仍有／少ｎｆ：０题亟待解决，不少方面亟待研究，概括地说主要有十个方面。ｌ、建立更多的葡萄种、品种的离体细胞系并实现长期稳栏培养，以推动葡萄细胞生理、遗传、痫理方面的深入研究。因此，有必要进一步探讨外植体的年龄、生理状态、培养基中ｐ、Ｂ、Ｃａ、ＫＨ一离子的浓度、光暖、光强等等对愈伤组织生长和分化的作用。此外，对某些植物生长调节剂（ＧＡ。脱落酸、乙烯）和维生素在这方面可能起的作用还未如、见有系统的研究，尚待补上。根据国内外现状，有可能出现新的研究葡萄寄主与病原试管培养的高潮，以选择高抗真菌（主要是白粉、霜霉）及线虫的无性系菇借此进一步探索－主病源专～性的生化、生理、遗传性质。——２、更多的葡萄种、品种不定胚或丛生芽的诱发和植株再生，以提高试管快速繁殖的实用化程度和范围。因此，需要进一步探讨不定胚或丛生芽的起源及再生苗增殖的最佳理亿参数，进一步加强茎尖培养的研究，不断改进脱毒方法和快速繁殖手段并将二者更好地结音起来，以推动葡萄试管快繁的迅速商业化。根据国内外研究现状，这很可能会在九十年代胰为现实。目前已建立了一些初步可行的生产工艺流程，但仍需解决多品种适用性憾题，培券成本问题及病毒的准确快速鉴定问题。显而易见，尽快建立对尽可能多的品种和品系都适用的又简便、又经济的快繁工艺流程，对于葡萄育种、栽培、病毒防治，以及遗传和生理研究、园林绿化等诸多领域都将产生巨大的推动作用。为了使离体快速繁殖真正实用化，必须从根ｎ本上降低培养成本，但是，这也许只有在解决了蒸馏水和蔗糖的理想代用品并傲到了在尚温采件下一步移栽成活时方可最终实现。当然，在应用于大规模生产之前，还有必要取得在太匿生长的试管苗与常规苗性状比较的有关数据和资料。３、加强萄萄胚性细胞和人造种子的研究，提高从胚性细胞再生到植株再生的转变率，以促进快速繁殖、诱变育种、抗病毒育种以及原生质融台与细胞杂交工作。因此，确必要进一步探索低温处理、细胞分裂素ＧＡ。蔗糖这些已知因子之外的其它子，如：ＣＣ浓、例，度、光质光强、光周期等等。已知生长素对不定胚诱发中Ｄ｜＼Ａ的转录过程和蕊译过程都发生影响，但其初始作用尚不清楚。另外，对不定形成过程中的超微结构组织学、生物化学方面的研究也十分有限。为了解开休眠与肛形成过程的奥秘，深入研究胚再生与植栋再生在所蒲最佳理化培养条件上呈现出的负相关性也许是关键性的，或许，还能由此而发现－一种崭新的有关植物发育精相关控制机制呢。同样，对萄萄无桩品种（新疆著名的无核白ｊ如体细胞胚培养产生种子的进一步研究，必将促进此类葡萄的育种和裁培并深入我们对胍发育的认识。，－４、扩大花培中可诱导材料和品种品系的范囱，提高诱导频率以获得更多的施培植ｌ株和有生产力的四倍体植株因此，耍进一步探讨雄核发育、花粉ｍ发育的过程及影响条俘，加强花培植株染色体的研究以确定小植株的切实起源，井在利用花培植株后代的向耐坚持详细的旧问观察记录。日前花培再生株倍性稳定且存在混倍现象，单倍体植株极少还极易发ｉ生自然一倍化，叮以说，迄夸尚存从花培所得胚状体生的植株均为一倍体。＝，ｌ‘婴搞清此类胚状体究竟是自动二倍化了呢还是起源于二倍体体细胞组纵？

１８年第２９９期干旱区研究４ｉ５、更有效地解决葡萄脱病毒问题当前茎尖脱毒培养中最大的问题有两个：一是并非所有病毒都可经热处理而去除。所以茎尖热处理结合化学处理值得探索。在此方面，呋哺核唑羧基酰胺（ｉａｉｉ）、７一盐酸氯四环素、硫酸庆大霉索等似乎都是有希望的抗病毒ｒｂｖｒｎ剂。二是由于离体茎尖尚无维管束发育，对其生长分化的调节仍很困难。在此方面，嫁接法似乎是一种最新的战略。但是，直接嫁接在砧术苗上目前由于成活率极不稳定尚无法应用，也许嫁接在砧术胚性细胞或胚状体上可以为茎尖接穗提供一种遗传上更为纯合的受体。另外，茎尖培养过去一直都采用“根后茎”诱发培养法，这是出于在不发根时茎无法生长先沟顾虑。目前已知在培养基中加入细胞分裂素后腋芽和茎尖都有可能不发根而先长茎，这似乎预示着生产茎尖接穗的一种全新程序。同时，在适宜的培养基中加入适量的细胞分裂索还可能提高更小（而更为有效地去除热稳定性病毒）茎尖的培养成活率。最后，不应放松从通过珠心胚诱发病毒不定胚的研究，因为综合运用各种脱毒方法可能是解决各种基因型脱各种病毒的唯一途径。６、由于葡萄的茎尖培养物与再生株、原品种的抗盐（ＮａＣ１性均呈正相关，而且这）种抗性只要坚持无性繁殖就可以保持不变，利用茎尖培养作为抗盐育种的初选手段看来是可行的。过，不通过定向选择培养物是否能够最终适应高盐浓发仍需做进一步实验证实。此外，对茎尖培养物的其它抗逆性（抗低温性）也有必要做广泛的研究，以垒面推动葡萄抗逆育如种、突变育种、原生质融合与细胞杂交育种。７、加强葡萄原生质培养研究，扩大适用外植体范围，提高愈伤组织诱导频率，获取更多的再生植株，以满足通过细胞融合杂交或引入外源基因产生新奇杂种的需要，并借此研究植物生长调节剂的作用机理、细胞膜的结构与功能及细胞壁的生物合成。在这方面，用葡萄胚前细胞壁的生物合成。在这方面，用葡萄胚前细胞团（ｏｍｂｙｎｃｍａ）作原生质Ｐｒｅｏｉｓｒｓ培养的外植体可能更为理想，因为它比其它类型的细胞或组织器官再生潜力更大，这在栽培品种中看来似乎更是如此。当然，具有较强器官再生潜力的原生质外植体似乎还包括不定强、丛生芽、具幼态特征的试管再生株的茎尖等等。而广之，多葡萄品种、品系在组织培推许养中器官再生能力弱的问题都有希望通过采用上述来源的外植体而解决。８、成年葡萄的组培再生株中发现的幼态回复也许对葡萄品种改良是个福音，为一般而言原植株的遗传性状可以稳定在再生株中，而幼株的器官再生能力比成年株强得多。这在许多多年生木本植物的组织培养中都已得到证实。因此，进一步探讨组培过程中葡萄由成熟态向幼态转化的性质和原因，并通过对胚性细胞和组织的培养或反复继代培养诱发和增强这｝ｔ悉，也许可以为提高原生质及离体细胞和组织的再生能力提供一种较理想柏全能性的外ｉ劫植体来源。不过，也应重视研究此种诱发的幼态回复有时造成叶形态长期变异从而降低葡萄可育性使产量下降的不良伴生现象（ｇｌｎ９４Ｖａａ，ｌ８）。Ｇｒｉ，１８ａｌｔ９６９、葡萄在开花结果前一般需生长３～５年，若能缩短这一时间显然有利于加进葡萄育种进程。在大田生长仅六个月的葡萄幼树的卷须上施用细胞分裂素导致了提前开花结果，但试管培养的葡萄卷须在各种细胞分裂素的作用下都仅仅形成了缺乏两性孢子体的败育花。因此，离体培养时调节成花细胞减数分裂的崮子尚有待查清。这币凶子有可能位于术厦部或韧｝皮祥『，也有可能花的正常发育少不米自植株各个部位的渗泌物质（２ｔａｔｓ．ｐ１ｌ）Ｘｄｃ而Ⅲ生长的卷须在施用分裂索后产生可ｆ花井结粜ｉ体培养的则；。总之：摘消戚花细是然『离行胞的减数分裂调节因子将不仅有助于加迷葡萄育种进程，而且有可能开辟一条二倍体细胞

４２干早研究１８年第２期９９直接获取单倍体细胞的新途径。时，究试管培养条件下对应于某种生长调节剂平衡由某种同研花形成组织向成花状态的转变，也为探明成花诱导及有关代谢过程的基圈调节机制提供了便利手段。盯叮】、为了实现葡萄的基因工程，在质粒被用作葡萄的基因载体之前，有必要进一步确定０广寄生性（ＨＲ）质粒和狭寄生性（ＷＬＨＲ）质粒的ＤＮＡ序列并弄清此序列与葡萄各种、。品种、品系寄主范盈之阁的内在联系。此外，分离和鉴定狭寄生性根癌农杆菌质粒ＴＤＮＡ—酣Ｏ～并进一步弄清寄主——质粒互作将有助于发展葡萄基因的台适载体。一旦取得了适宜的载以聊以自慰的是这一劣势可从葡萄的再生能力强这一优势得到某种补偿，葡萄组培植株再生率大大高于玉米和小麦就是明证。ｌ虮体，接下来的就是确定那些控制所需性状的基因或基因组。这将是又一项艰巨的任务。因为＂比起主要作物（玉米、小麦）的遗传研究，萄的遗传研究仍处于起始阶段。不过，们可如葡我Ｒｄ＂综上所述：尽管还存在不少问题和困难，葡萄组培的前景是非常光明的。可以确信：只要保证投入足够的人力和物力，只要坚持常规育种与组织培养等生物技术的有机结台，葡萄生产中的种种似乎高不可攀的目标都是可以达到的。葡萄组织培养的过去和现在已经向我们∞展示出一个光辉灿烂的未来ｌ她主要参考文献｜；ｌ、曾孜义：ｌ葡萄的花药培养。葡萄的离体快速培养。木本植物组织培养及其应９６８用（正华主编），高等教育出版社，３５３４陈１￣４。２、跌西省果树研究所、中鼠农林科学院果树试验站：１７，葡萄品种，农业出皈社，９７４、Ｈｏ“ｃｌｕａＡｂｔａｔ：１７．４（）～１８ｕｔｒ１ｃｒｓｒｓ９００１９，５８８（８）．０Ｈｉ０＊Ｉｎｗｅ１ｈＨｕｒａｕｔ１ａｌｅｏｆＨｏｒｔｕＩｒａＰ１ｎｔｉ２ｉｃｔｃｎｄｕａａｔｏ１Ｃｒ，ＵＫ．ＯＰｓ５、Ｋｒ＋Ｗ．．ｎｄｕ１ＲａＭｏｂｒｗａＹ，Ｇ．｛．９４ＧｒＩ１，８ａｐｅ．ｎＨａＩ；ｎｄｂＯＯｋＯｆＩ１ｎ：Ｃｅ１ＣｕｌｒａｌｌＶＯ１ｕｅ，．２，ｐｐ９￣４４．ａｃｍｉ１ｎＰｕｂｉｎｇＣｏｍＰａｎｙ３６３Ｍｌａｌｓｈｉ，ＮｅｗＹＯｒ．ｋ参考文献ｌ９，因篇幅所限略列，详情可与作者联系。篇５ＧｒｐＴｉｓｅａｅｓｕＣｕｔｅｌｕｒＲｅｅｖｉｗａｎｄＰｅｓｅｔｖｅｒｐｃｉＬｉＹｕｇｕａｎｇ（ｎｉｎｇｎｆｔｔｆｉｌｇｎｐｅｌｙａｄＸｉｉａｌｓｉｕｏＢ