类风湿诊断与抗抗体检测正规版资料

类风湿诊断与抗抗体(kàngtǐ)检测第一页，共22页。概述(ɡàishù)类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病。由于一方面自身免疫的病理机制决定了这类疾病的疑难和复杂；另一方面由于这类疾病累及多个系统和器官，临床表现较为复杂。所以RA以往在临床上更多的表现为“疑难杂症”。风湿性疾病的现状可以概括为“四多”，累及脏器(zānɡqì)多；起病首发表现多；误诊误治多；致残多。从而也引发出另外一多“病人花费多”！由于风湿性疾病早期表现不典型，有些疾病有两种或两种以上表现相互重叠；同时，风湿性疾病存在相互转化的情形；所以风湿性疾病的早期诊断有一定的困难。因此，对风湿性疾病患者的随访和定期检查显得尤为重要，这也是验证我们早期的诊断是否正确的必由之路。正确的早期诊断是采取规范化治疗、提高患者的生活质量、改善预后的前提。第二页，共22页。风湿病学会（ACR）1987分类(fēnlèi)标准①晨僵;②3个或3个以上关节肿胀（软组织）;③手关节肿胀（近端指间关节，掌指关节或腕关节）;④对称性肿胀（软组织）;⑤皮下结节;⑥血清类风湿因子阳性;⑦骨关节X线片示手或腕关节侵蚀性缺损和（或）关节周围骨质疏松(shūsōnɡ)。以上1～4项必须为医师所见，持续6周或以上，具备上列7项标准中的4项，即可诊断类风湿关节炎。第三页，共22页。ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）年的RA分类标准和评分(píngfēn)系统类风湿关节炎的早期诊断和早期治疗已成为治疗类风湿关节炎迫切需要，以往的分类标准不能达到早期诊断的目的，分类标准不等于诊断标准。临床工作更需要一个可靠的疾病缓解标准（包括临床缓解与结构进展等问题(wèntí)）。但实际上制定一个早期类风湿关节炎的分类标准很困难，有人提出了炎性关节炎的概念，甚至提出了早期炎性关节炎的概念，正是因为这部分患者炎性关节炎不是全部，而是部分发展为类风湿关节炎，在新的分类标准中如果判断有可能发展为持续炎性关节炎或破坏性关节炎，这类关节炎就被认为是类风湿关节炎。第四页，共22页。年的RA分类标准(biāozhǔn)和评分系统必要条件至少一个关节肿痛，并有滑膜炎的证据（临床或超声或磁共振成像）在未分化关节炎中需要排除其他疾病引起(yǐnqǐ)的关节炎症状和体征。第五页，共22页。其他条件①血清学：抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）和类风湿因子（RF）;②受累关节的种类（小或大关节）和数量;③滑膜炎的病程;④急性血象(xuèxiàng)反应：红细胞沉降率（ESR）和C-反应蛋白（CRP）。第六页，共22页。1．敏感性和特异性：抗CCP抗体与RF具有相同的敏感性（抗CCP抗体：80％，RF：79％），但特异性更高（抗CCP抗体：96％，RF：63％）。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。RF或抗CCP至少(zhìshǎo)一项高滴度阳性3用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。检测结果：阴性、阳性在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。4~10

小关节3④对称性肿胀（软组织）;因此，对风湿性疾病患者的随访和定期检查显得尤为重要，这也是验证我们早期的诊断是否正确的必由之路。检测(jiǎncè)方法实验室检查(jiǎnchá)不同的关节受累情况再加上区域辨别条件中的任何项目，评分大于6分提示为确定的类风湿关节炎其中，抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体检测对早期RA诊断的敏感性和特异性高，是目前(mùqián)最常用的早期诊断指标。诊断第二步如没有常规典型放射学类风湿关节炎骨破坏的改变，需要进入以下分类评分系统，请记住(jìzhù)以下分值表中的得分。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对类风湿性关节炎（RA）具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。血清：标本(biāoběn)请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本(biāoběn)放于-20℃保存，但应避免反复冻融。⑦骨关节X线片示手或腕关节侵蚀性缺损和（或）关节周围骨质疏松(shūsōnɡ)。其他条件①血清学：抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）和类风湿因子（RF）;②受累关节的种类（小或大关节）和数量;③滑膜炎的病程;④急性血象(xuèxiàng)反应：红细胞沉降率（ESR）和C-反应蛋白（CRP）。以上1～4项必须为医师所见，持续6周或以上，具备上列7项标准中的4项，即可诊断类风湿关节炎。增强(zēngqiáng)化学发光法原理类风湿关节炎的诊断(zhěnduàn)ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）年的RA分类标准和评分(píngfēn)系统诊断第二步如没有常规典型放射学类风湿关节炎骨破坏的改变，需要进入以下分类评分系统，请记住(jìzhù)以下分值表中的得分。目前临床上对于RA的疑似患者所采取的初步筛查实验室检测手段多为常规风湿四项，为血沉检测（ESR）、C反映蛋白(dànbái)检测（CRP）、类风湿因子检测（RF）、抗“O”检测（ASO）。在未分化关节炎中需要排除其他疾病引起(yǐnqǐ)的关节炎症状和体征。1

中大关节0不同的关节受累情况再加上区域辨别条件中的任何项目，评分大于6分提示为确定的类风湿关节炎RF是目前最为常用的RA诊断指标，但目前常用的RF检测多为检测IgM型，而IgM-RF在RA诊断中的敏感性只有40～70%，特异性只有70%左右，同时尚可见于5%的正常老年人、其它自身免疫性疾病、肝炎、结核等疾病。这三项检测对于RA疑似患者的早期诊断意义不大。血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本(biāoběn)采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本(biāoběn)放于-20℃保存，但应避免反复冻融。概述(ɡàishù)目前临床上对于RA的疑似患者所采取的初步筛查实验室检测手段多为常规风湿四项，为血沉检测（ESR）、C反映蛋白(dànbái)检测（CRP）、类风湿因子检测（RF）、抗“O”检测（ASO）。类风湿关节炎的诊断(zhěnduàn)诊断第一步满足(mǎnzú)2项必要条件，并有常规典型放射学RA骨破坏的改变，可明确诊断为类风湿关节炎，第七页，共22页。类风湿关节炎的诊断(zhěnduàn)诊断第二步如没有常规典型放射学类风湿关节炎骨破坏的改变，需要进入以下分类评分系统，请记住(jìzhù)以下分值表中的得分。不同的关节受累情况再加上区域辨别条件中的任何项目，评分大于6分提示为确定的类风湿关节炎第八页，共22页。ACR和欧洲抗风湿病联盟(liánméng)（EULAR）年的RA分类标准和评分系统受累关节数分值（0~5分）1

中大关节02~10

中大关节11~3

小关节24~10

小关节3>10

至少(zhìshǎo)一个为小关节5血清学抗体检测（0~3分）RF或抗CCP均阴性0RF或抗CCP至少(zhìshǎo)一项低滴度阳性2RF或抗CCP至少(zhìshǎo)一项高滴度阳性3滑膜炎持续时间（0~1分）<6周0≧6周1急性期反应物（0~1分）CRP或ESR均正常0CRP或ESR增高16分或以上肯定RA诊断第九页，共22页。类风湿关节炎的诊断(zhěnduàn)诊断第三步树枝计算法，根据关节受累情况：①》10个关节（至少(zhìshǎo)1个小关节）;②4～10个小关节;③1～3个小关节;④2～10个中大关节;按图2是或否继续分类。树枝计算法用文字描述：①如满足受累关节大于10个关节（至少(zhìshǎo)1个小关节）（5分）同时满足血清学阳性（或滑膜炎病程≥6周，或ESR/CRP升高），评分≥6分;②如满足4～10个小关节受累（3分）同时需要满足血清学高滴度阳性，或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程≥6周（或+ESR/CRP升高），评分≥6分;第十页，共22页。类风湿关节炎的诊断(zhěnduàn)③如满足1～3个小关节(guānjié)受累（2分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程≥6周（或+ESR/CRP升高），或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程≥6周+ESR/CRP升高，评分≥6分;④如满足2～10个中大关节(guānjié)受累（1分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程≥6周+ESR/CRP升高，评分≥6分。所以只要满足以上任何一种情况，即提示为确定的类风湿关节(guānjié)炎。第十一页，共22页。实验室检查(jiǎnchá)目前临床上对于RA的疑似患者所采取的初步筛查实验室检测手段多为常规风湿四项，为血沉检测（ESR）、C反映蛋白(dànbái)检测（CRP）、类风湿因子检测（RF）、抗“O”检测（ASO）。ESR和CRP与RA的活动性有关，其检测结果受多因素的影响，故只作为病情活动性的参考指标；ASO是一项排除性指标。这三项检测对于RA疑似患者的早期诊断意义不大。RF是目前最为常用的RA诊断指标，但目前常用的RF检测多为检测IgM型，而IgM-RF在RA诊断中的敏感性只有40～70%，特异性只有70%左右，同时尚可见于5%的正常老年人、其它自身免疫性疾病、肝炎、结核等疾病。RF阴性并不能排除RA的诊断，约30%的早期RA患者RF为阴性。所以单纯依靠常规风湿四项检测对于RA作出早期诊断并指导临床治疗还远远不够。第十二页，共22页。实验室检查(jiǎnchá)近年来形成了一些敏感性和特异性都非常高的RA诊断技术，如抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）检测、抗角蛋白抗体（AKA）检测、抗RA33/RA36抗体检测、抗Sa抗体检测、抗核周因子抗体检测等。以上抗体中两项同时阳性者RA的可能性高达91.3%。其中，抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体检测对早期RA诊断的敏感性和特异性高，是目前(mùqián)最常用的早期诊断指标。第十三页，共22页。抗CCP抗体(kàngtǐ)的定义：一种自身抗体。是类风湿性关节炎特异而敏感的早期诊断指标，可鉴别(jiànbié)侵蚀性、非侵蚀性类风湿性关节炎，阳性者通常出现或易发展为严重的关节骨质破坏。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对类风湿性关节炎（RA）具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。第十四页，共22页。研究(yánjiū)简史抗环瓜氨酸肽抗体(kàngtǐ)（CCP）ELISA法是1998年Schellkens等建立起来辅助诊断RA的检测方法，该技术一出现，立即备受关注，现已有商品供应。按照前丝集蛋白cDNA序列，人工合成可能具有抗原表位的9~19个氨基酸短肽，并经胍氨酸化修饰，经ELISA筛选出具有抗原性片段。第十五页，共22页。检测(jiǎncè)方法现有ELISA法、增强化学发光法、胶体金法目前国内已有许多(xǔduō)厂家有商品试剂盒供应。第十六页，共22页。ELISA检测(jiǎncè)原理应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中CCP水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CCP抗原、生物素化的抗人CCP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅(shēnqiǎn)和样品中的CCP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。检测范围：

3.9ng/ml-250ng/ml

第十七页，共22页。增强(zēngqiáng)化学发光法原理利用抗原抗体特异性结合及酶底物Luminol发光体系定量检测(jiǎncè)CCP。

1．灵敏度：10U/ml

2．特异性：与1mg/ml的脂蛋白、25mg/ml的球蛋白、的血红蛋白、的透明质酸、2mg/ml的粘蛋白、的β2-微球蛋白不发生交叉反应。

3．精密度：批内CV值小于10%、批间CV值小于15%。

4．线性范围：0～160U/ml

第十八页，共22页。胶体金法原理(yuánlǐ)采用胶体金免疫(miǎnyì)层析技术，以间接法检测血清中的自身抗体。检测结果：阴性、阳性第十九页，共22页。标本的采集(cǎijí)及保存1.

细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本(biāoběn)保存于-20℃，且应避免反复冻融。2.

血清：标本(biāoběn)请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本(biāoběn)放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3.

血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本(biāoběn)采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本(biāoběn)放于-20℃保存，但应避免反复冻融。第二十页，共22页。