微生物的培养技术及应用基础知识-高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.1微生物的培养技术及应用【知识归纳】培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。培养基用途：培养基用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。培养基分类：划分标准培养基的种类特点主要用途按物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、保藏菌种等固体培养基微生物的分离、鉴定，活菌计数、保藏等按化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确微生物的分类、鉴定等按功能用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物的生长，促进所需要的微生物的生长如在加入青霉素的培养基中分离酵母菌、霉菌等；在加入高浓度食盐的培养基中分离金黄色葡萄球菌鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品如在伊红美蓝培养基上可以鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌培养基的营养物质：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等5、根据碳源和氮源种类判断微生物类别：项目定义自养型微生物异养型微生物碳源凡是提供碳元素的物质无机碳源：CO2、NaHCO3等有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸（脂肪酸）氮源凡是提供氮元素的物质无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等尿素、蛋白质等培养基添加氮源的原因：氮元素是合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物的重要组成元素。无菌技术的关键是防止外来杂菌的污染，主要包括消毒和灭菌两种。消毒和灭菌定义及常见的方法：内容种类主要方法应用范围消毒定义：用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。消毒煮沸消毒法100

℃煮沸5～6

min一般物品巴氏消毒法62～65

℃消毒30

min或80～90

℃处理30

s～1

min牛奶、啤酒、果酒等不宜进行高温灭菌的液体化学药物消毒法用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等用于皮肤、伤口、动植物组织表面、空气、手术器械等紫外线消毒法紫外灯照射30

min接种室、接种箱、超净工作台灭菌定义：使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌湿热灭菌法用高压蒸汽灭菌锅，一般在100

kPa、121

℃的条件下维持15～30

min培养基等干热灭菌法用干热灭菌箱在160～170

℃的热空气中维持2～3

h玻璃器皿、金属用具等灼烧灭菌直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧涂布器、接种环、接种针或其他金属用具，接种过程中试管口或瓶口等容易被污染的部位无菌技术图示：芽孢：细菌的休眠体；孢子：真菌的繁殖体紫外线照射消毒原理：能够使微生物细胞中遭到DNA破坏；酒精消毒原理：使蛋白质发生变性，（70%的酒精消毒效果最好，浓度过高，会使表面蛋白质变性过快，反而凝固形成一层保护膜，乙醇分子反而不能进入；浓度过低，杀菌能力变弱）杀菌≠灭菌；（杀菌包括消毒和灭菌）培养基灭菌前需要先调整PH值，培养基中常用缓冲剂进行调整，如KH2PO4和K2HPO4等。缓冲剂除可以调整培养基的PH值外，还可以为培养物提供营养物质微生物的纯培养步骤：①配制培养基；②灭菌；③接种；④分离和培养微生物纯培养过程图：对微生物进行分离的方法：①平板划线法；②稀释涂布平板法倒平板：等培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰旁进行操作原因：因为琼脂是一种多糖，在98℃融化，当温度低于44℃时开始凝固，温度过高，会将操作者手烫伤，温度过低琼脂会凝固15、倒平板注意事项：①皿盖不能完全打开，打开一个略大与瓶口的缝隙；②每次倒前和倒后都要将瓶口通过火焰；③培养基倒入培养基后，不能晃到；④等待5-10分钟后，将培养皿翻转过来（a、防止培养皿内的水分蒸发过快；b、防止冷凝水滴落，造成污染）菌落的概念：微生物在固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群里，这就是菌落酵母菌菌液通过平板划线法进行分离，待菌液被培养基完全吸收后，将一个接种的培养基和一个未接中的培养基同时放入28℃恒温培养箱中（目的：检测灭菌过程是否彻底）平板划线法共进行5次划线，6次灼烧，灼烧的时间和目的如下：灼烧时间灼烧目的第一次划线前杀死接种环上原有的微生物，防止外来微生物干扰每次划线前杀死上次划线结束后残留在接种环上的菌种，保证下一次划线的菌种直接来自上一次划线的末端，使每次划线菌种数目减少，达到分离菌体的目的划线结束后杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境或感染操作者平板划线法特点：三五条平行线，每次从尾巴划，划五次要六烧，收尾不相连纯化菌种保存：方法具体内容临时保藏法接种到试管的固体斜面培养基中，保存在4℃冰箱中长期保藏法与无菌甘油进行混合均匀，放入-20℃冷冻柜中生长因子的定义：微生物生命活动不可缺少，但是微生物自身又不能合成的微量有机物。有机碳源除可以提供碳元素外，还可以提供能量；而无机碳源只能提供碳元素高压蒸汽灭菌锅灭菌完成后，切断电源后，一定要等温度自然下降，压力表为零后再打开排气阀（避免被烫伤）25、对照组和