单胞藻类的实验室培养课件

微藻的实验室培养微藻的实验室培养1藻类的概述培养的方式实验室培养藻类的概述2绿藻裸藻黄藻蓝藻门绿藻裸藻黄藻蓝藻门3一、藻类的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一类真核生物。藻类植物共约为2100属,27000种。根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。一、藻类的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一类4二、微藻的营养模式和生长模式二、微藻的营养模式和生长模式5（二）、微藻的生长模式

藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）（二）、微藻的生长模式藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，6三、培养方式按培养的场所分室内培养和室外培养按培养基的形态分固体培养和液体培养按培养的纯度分

纯种培养

和

单种培养按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养按气体交换情况分充气培养和不充气培养按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培养三、培养方式按培养的场所分室内培养和室外培养7（1）纯培养和单种培养纯培养（axenicculture）：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。单种培养（single-speciesculture）：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的）（1）纯培养和单种培养纯培养（axenicculture）8（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closedculture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。各种反应器等开放式培养：指把藻类培养在开敞容器中，如广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等。封闭式薄膜装置（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closedcul9单胞藻类的实验室培养课件10封闭式塑料薄膜袋培养，方法简单，成本低、培养的藻细胞密度大，不易污染且生产周期短，效果很好单胞藻类的实验室培养课件11（3）小型培养、中继培养和大量培养小型培养：一级培养，目的是培养和供应藻种，用于科研等。一般采用封闭式不充气一次性培养方式，培养容器一般采用100～3000ml的三角烧瓶。中继培养：又称二级培养，目的是藻种扩大培养，供应生产性大量培养的藻种。一般在室内大的玻璃容器或塑料大袋中进行。（3）小型培养、中继培养和大量培养小型培养：一级培养，目的是12大量培养：也叫三级培养，目的是为培养动物提供大量单胞藻饵料。有室内和室外两种。目前主要采取室内、开放式、通气、一次性或半连续培养法，培养容器有大型玻璃钢水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培养：也叫三级培养，目的是为培养动物提供大量单胞藻饵料。13单胞藻生产性扩大培养常用流程500mL藻种5000mL三角烧瓶细口玻璃瓶塑料桶封闭式塑料薄膜水泥池一级培养二级培养三级培养单胞藻生产性扩大培养常用流程500mL藻种5000mL三角烧14实验室培养过程消毒配制培养液接种培养管理收获实验室培养过程消毒151容器、工具和水消毒方法总结一级培养（实验室的培养）：金属器具和试管口、瓶口：直接灼烧玻璃器皿：洗液+烘箱纸、棉花、纱布：烘箱培养用水：砂滤水→脱脂棉→煮沸→冷却洗液：15g重铬酸钾+200mg浓硫酸混匀1容器、工具和水消毒方法总结一级培养（实验室的培养）：16

粒径厚度细砂0.1mm60～80cm

2～3层网目<0.1mm的筛绢网布粗砂3～4mm8～10cm

1层网目1mm的胶丝网布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1层网目1～2mm胶丝网布筛板筛孔2cm5cm粒径厚17培养用水海水沉淀砂滤脱脂棉烧开冷却过滤器水消毒池一级培养二、三级培养培养用水海水沉淀砂滤脱脂棉烧开冷却过滤器水消毒池一级培养二、18培养液的配制

配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这里介绍比较常用的几种：水生4号和克诺普（Knop）培养液，一般用于绿藻；蓝藻可用朱氏10号或水生105号无氮培养基（后者适于固氮蓝藻）；硅藻可用朱氏10号和水生硅1号培养基；另外还有海产绿藻、硅藻的培养基。常用培养基配方见下表。培养液的配制配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这19以上用水量都是加至1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可用淡水1000mL加30克食盐代替。如配制固体培养基，可在培养液内加入1.5％的琼脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可20藻种的获得1购买2自行分离藻种的获得21分离主要有以下几种方法离心法微吸管（毛细管）分离：将稀释适度藻液水样，置浅凹载玻片上，镜检。用微吸管挑选要分离的藻体，认真仔细地吸出，放入另一浅凹载片上，镜检这一滴水中是否达到纯分离的目的稀释分离法：把含有需要分离的藻类而又混杂有其他生物的水样，取其一定量，用培养液稀释。通过稀释到适宜程度的方法，达到把原混杂生物单个分离培养的目的。平板分离法：这个方法的培养基制备和分离方法，与菌类的平板分离法基本相同，只是培养基配方不同。分离主要有以下几种方法离心法22稀释分离法平板分离法稀释分离法平板分离法231．藻种的选择：特征：⑴生长迅速；⑵对极端的温度和辐射条件的耐性范围大；⑶蛋白质，脂类和糖类含量高，或有选择地积累一种特殊的代谢产物（如甘油）；⑷无毒性，且易于收获。根据系统的要求和特殊的方法，还可有其他要求。1．藻种的选择：242．接种：在分离到单纯藻群后，就可接种到培养液中进行培养，进而移养扩大培养。

液体接种：是将藻液直接加入培养液中进行搅拌，水温较低（10℃以内）时，多加；约占培养液总量的30～40％左右，水温适宜时（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接种：25按种后瓶口用灭菌纸包扎，放在适宜光、温条件下培养，每天轻轻摇动二次。大约二周后进行一次移植。藻种在培养过程中必须定期用显微镜检查，保持不受其他生物污染。按种后瓶口用灭菌纸包扎，放在适宜光、温条件下培养，每天轻轻摇263．藻种的保存：

一旦藻种分离得到，就要保存好以便在一定的时间内供接种用。为此，要将藻种消毒，避免其他来源的污染。给以适当的光照和温度。在液体培养中，为了快速增殖，可用5400lx。再得到良好生长后（1～2周），培养液移到更低的光照条件（540～1100lx），以求缓慢生长及储藏。3．藻种的保存：274.培养管理：主要是使已接种培养物在相对稳定适宜环境中大量繁殖生长。要注意以下因素：1）二氧化碳浓度在开放式不通气方法培养中，搅拌是十分必要的，可以增加水和空气的接触面，使空气中二氧化碳溶解到培养液中，而且帮助沉淀藻类细胞上浮获得光照。在通气培养中，培养液内应维持二氧化碳浓度在0.1～5％之间。

4.培养管理：主要是使已接种培养物在相对稳定适宜环境中大量繁282）光照强度利用太阳光源培养时，一般在室内培养可放在近窗口地方，防止强直射光照射。或利用人工光源（60～100瓦电灯或日光灯），需1500～3000勒克斯/厘米2。3）温度适温一般在10～30℃之间，最适温常为20～25℃。若在室外培养，夏季中午高温，冬季早晚低温，常造成不利影响，需设法调节。2）光照强度利用太阳光源培养时，一般在室内培养可放在近窗口294）无机营养应不断添加新鲜培养液，及时补充被藻吸收后减少了的某些元素。5）注意pH变化如变动过大，可用酸、碱调节。6）适当控制培养物中藻细胞浓度过高会引起光照和无机营养不足，并导致pH上升。一般控制在0.3g（干重）/L范围内。4）无机营养应不断添加新鲜培养液，及时补充被藻吸收后减少了30收获根据水色的由浅变深绿藻类：由嫩绿色变为深绿色硅藻类：由浅褐色变为深褐色金藻类：金黄色静止期后的老化藻对扩大培养或投喂都不利收获根据水色的由浅变深31thankyou！thankyou！32微藻的实验室培养微藻的实验室培养33藻类的概述培养的方式实验室培养藻类的概述34绿藻裸藻黄藻蓝藻门绿藻裸藻黄藻蓝藻门35一、藻类的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一类真核生物。藻类植物共约为2100属,27000种。根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。一、藻类的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一类36二、微藻的营养模式和生长模式二、微藻的营养模式和生长模式37（二）、微藻的生长模式

藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）（二）、微藻的生长模式藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，38三、培养方式按培养的场所分室内培养和室外培养按培养基的形态分固体培养和液体培养按培养的纯度分

纯种培养

和

单种培养按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养按气体交换情况分充气培养和不充气培养按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培养三、培养方式按培养的场所分室内培养和室外培养39（1）纯培养和单种培养纯培养（axenicculture）：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。单种培养（single-speciesculture）：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的）（1）纯培养和单种培养纯培养（axenicculture）40（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closedculture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。各种反应器等开放式培养：指把藻类培养在开敞容器中，如广口玻璃瓶、水族箱、玻璃钢水槽、水泥池等。封闭式薄膜装置（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closedcul41单胞藻类的实验室培养课件42封闭式塑料薄膜袋培养，方法简单，成本低、培养的藻细胞密度大，不易污染且生产周期短，效果很好单胞藻类的实验室培养课件43（3）小型培养、中继培养和大量培养小型培养：一级培养，目的是培养和供应藻种，用于科研等。一般采用封闭式不充气一次性培养方式，培养容器一般采用100～3000ml的三角烧瓶。中继培养：又称二级培养，目的是藻种扩大培养，供应生产性大量培养的藻种。一般在室内大的玻璃容器或塑料大袋中进行。（3）小型培养、中继培养和大量培养小型培养：一级培养，目的是44大量培养：也叫三级培养，目的是为培养动物提供大量单胞藻饵料。有室内和室外两种。目前主要采取室内、开放式、通气、一次性或半连续培养法，培养容器有大型玻璃钢水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培养：也叫三级培养，目的是为培养动物提供大量单胞藻饵料。45单胞藻生产性扩大培养常用流程500mL藻种5000mL三角烧瓶细口玻璃瓶塑料桶封闭式塑料薄膜水泥池一级培养二级培养三级培养单胞藻生产性扩大培养常用流程500mL藻种5000mL三角烧46实验室培养过程消毒配制培养液接种培养管理收获实验室培养过程消毒471容器、工具和水消毒方法总结一级培养（实验室的培养）：金属器具和试管口、瓶口：直接灼烧玻璃器皿：洗液+烘箱纸、棉花、纱布：烘箱培养用水：砂滤水→脱脂棉→煮沸→冷却洗液：15g重铬酸钾+200mg浓硫酸混匀1容器、工具和水消毒方法总结一级培养（实验室的培养）：48

粒径厚度细砂0.1mm60～80cm

2～3层网目<0.1mm的筛绢网布粗砂3～4mm8～10cm

1层网目1mm的胶丝网布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1层网目1～2mm胶丝网布筛板筛孔2cm5cm粒径厚49培养用水海水沉淀砂滤脱脂棉烧开冷却过滤器水消毒池一级培养二、三级培养培养用水海水沉淀砂滤脱脂棉烧开冷却过滤器水消毒池一级培养二、50培养液的配制

配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这里介绍比较常用的几种：水生4号和克诺普（Knop）培养液，一般用于绿藻；蓝藻可用朱氏10号或水生105号无氮培养基（后者适于固氮蓝藻）；硅藻可用朱氏10号和水生硅1号培养基；另外还有海产绿藻、硅藻的培养基。常用培养基配方见下表。培养液的配制配方极多，每种配方主要适用于一定藻种，这51以上用水量都是加至1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可用淡水1000mL加30克食盐代替。如配制固体培养基，可在培养液内加入1.5％的琼脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培养液用海水，如无海水可52藻种的获得1购买2自行分离藻种的获得53分离主要有以下几种方法离心法微吸管（毛细管）分离：将稀释适度藻液水样，置浅凹载玻片上，镜检。用微吸管挑选要分离的藻体，认真仔细地吸出，放入另一浅凹载片上，镜检这一滴水中是否达到纯分离的目的稀释分离法：把含有需要分离的藻类而又混杂有其他生物的水样，取其一定量，用培养液稀释。通过稀释到适宜程度的方法，达到把原混杂生物单个分离培养的目的。平板分离法：这个方法的培养基制备和分离方法，与菌类的平板分离法基本相同，只是培养基配方不同。分离主要有以下几种方法离心法54稀释分离法平板分离法稀释分离法平板分离法551．藻种的选择：特征：⑴生长迅速；⑵对极端的温度和辐射条件的耐性范围大；⑶蛋白质，脂类和糖类含量高，或有选择地积累一种特殊的代谢产物（如甘油）；⑷无毒性，且易于收获。根据系统的要求和特殊的方法，还可有其他要求。1．藻种的选择：562．接种：在分离到单纯藻群后，就可接种到培养液中进行培养，进而移养扩大培养。

液体接种：是将藻液直接加入培养液中进行搅拌，水温较低（10℃以内）时，多加；约占培养液总量的30～40％左右，水温适宜时（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接种：57按种后瓶口用灭菌纸包扎，放在适宜光、温条件下培养，每天轻轻摇动二次。大约二周后进行一次移植。藻种在培养过程中必须定期用显微镜检查，保持不受其他生物污染。按种后瓶口用灭菌纸包扎，放在适宜光、温条件下培养，每天轻轻摇583．藻种的保存：

一旦藻