玉米小斑病抗性鉴定课件

一、实验目的学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。1、玉米小斑病的主要症状特征观察。2、玉米小斑病的接种方法。3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。一、实验目的学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。1

玉米小斑病（Helminthosporiummaydis）是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严重损失。选育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，后扩大成2~3mm的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不规则形。发病适温为25~30℃

。二、内容说明玉米小斑病（Helminthosporiummayd2玉米小斑病抗性鉴定课件3内容说明(续)

根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为O小种和T小种两个生理小种。T小种对T型细胞质有专化毒性，故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，孢子形成时间较长。二是由隐性单基因rhm控制，表现为小的褪绿病斑。鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为可靠。

内容说明(续)根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌4玉米小斑病抗性鉴定课件5玉米小斑病抗性鉴定课件6（一）所需用品1、材料：供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。玉米小斑病菌种，T小种的培养物；上一季感染O小种小斑病的玉米植株病叶。2、仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。3、药品试剂：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等。三、所需用品和操作方法

（一）所需用品三、所需用品和操作方法7用具用具8（二）操作方法

1.苗期接种鉴定（1）菌种的培养①病原菌的分离选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作。先将病斑剪成4~5mm2大小，约30~40块，然后分别将病组织小块置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次2~3min。最后以无菌操作方法，将病斑组织按正方形四点排列，栽种在PDA平板培养基（去皮马铃薯20g，葡萄糖10~20g，琼脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃

温箱中培养约7天。

（二）操作方法1.苗期接种鉴定9玉米小斑病抗性鉴定课件10②菌种的纯化

选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移3管），然后再放在25℃

恒温下培养。待产生孢子后，选取菌落较一致的斜面1~2管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、脐点特点。然后计测孢子大小。确认纯种后，再用斜面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中保存待用。

②菌种的纯化选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法11菌丝形态菌丝形态12（2）孢子悬浮液的制备

用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在100倍显微镜下每个视野有5个孢子浓度的悬浮液待用。

（2）孢子悬浮液的制备用少量无菌水倒入已产孢子的斜面13（3）接种病菌

接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左右。接种前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促进病菌孢子萌发。接种菌液量是每株1~2ml。用微型喷雾器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置25℃左右温度下保湿24小时。

（3）接种病菌接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左14（4）病情鉴定和分级标准

接种后7~10天即可进行病情鉴定。鉴定应在同一天内完成。鉴定项目和标准如下：①发病程度以叶片为单位进行鉴定。根据病斑占叶片面积的百分率，记载每片叶的感病程度。发病程度分为9级（表1）。鉴定接种部位的叶片，每株4片叶，每个供试材料10株共40片。以整株为单位，根据整株的发病情况，分为7个等级（表2）。而后，以叶片为单位，计算病叶率和病情指数。（4）病情鉴定和分级标准接种后7~10天即可进行病情鉴15病情计算公式

病情计算公式16表1玉米小斑病叶片发病程度分级标准

等

级病斑占叶片面积（%）012345678012—56—1011—2021—3031—5051—70>700级1级2级3级4级5级6级7级8级表1玉米小斑病叶片发病程度分级标准等级病斑占叶17表2玉米小斑病整株发病程度分级标准

级别全株叶片病斑占总叶面积（%）

0全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%~25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%~50%）3植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积51%以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积26%~50%），上部叶片有少量病斑（占叶面积10~25%）4植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积50%以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积26~50%）。5全株基本枯死。0.5级1级2级3级4级5级0级表2玉米小斑病整株发病程度分级标准级别全株叶片病斑占总18病情鉴定和分级标准（续）②病斑长度随机测量40个独立的病斑，每株4个，以mm为单位。③抗病性的反应型病斑反应型分为三级，分级标准见表3。病情鉴定和分级标准（续）②病斑长度19表3玉米小斑病抗性反应型分级标准

病斑型病斑症状坏死型

病斑中央的坏死部分为黄褐色，周围有深色的边缘，病斑周围和两端没有暗绿色的浸润区。萎蔫型病斑中央的坏死部分为灰褐色至近似灰白色，没有深色边缘，在坏死斑周围或两端有绿色的浸润区，在高温、潮湿、光照弱的条件下浸润区扩展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡。褪绿病斑型病斑小，病斑中央为白色坏死，没有绿色边缘，病斑周围有褪绿晕圈。

坏死型萎蔫型褪绿病斑型表3玉米小斑病抗性反应型分级标准病斑型病斑症状坏死型

202.成株期接种鉴定

①接种：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行。天气干燥时，接种后可在每株心叶喷水。②病情鉴定和分级标准：抽丝后15天左右进行病情鉴定，鉴定应在同一天内完成。发病程度以整株为单位，分7个等级。分级标准见表2。一般用于苗期和成株期抗病性鉴定。整株调查中，植株上、中、下叶片的划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下为下部叶，其上为上部叶。2.成株期接种鉴定①接种：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入21表2玉米小斑病整株发病程度分级标准

级别全株叶片病斑占总叶面积（%）

0全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%~25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%~50%）3植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积51%以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积26%~50%），上部叶片有少量病斑（占叶面积10~25%）4植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积50%以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积26~50%）。5全株基本枯死。0.5级1级2级3级4级5级0级表2玉米小斑病整株发病程度分级标准级别全株叶片病斑占总22③病株率和病情指数计算

病株率和病情指数计算方法是以整株为单位进行。

③病株率和病情指数计算病株率和病情指数计算方法是以整231、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？2、玉米小斑病的典型特征为何？3、玉米小斑病鉴定的基本环节有哪些？4、玉米小斑病接种的要点是什么？5、玉米品种对小斑病抗性表现分几级？各级表现如何？四、作业1、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？四、作业24[1]玉米遗传育种学编写组，1979，玉米遗传育种学，230—260，科学出版社。[2]方中达，1998，植病研究方法，p373—376，中国农业出版社。参考文献[1]玉米遗传育种学编写组，1979，玉米遗传育种学，225一、实验目的学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。1、玉米小斑病的主要症状特征观察。2、玉米小斑病的接种方法。3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。一、实验目的学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。26

玉米小斑病（Helminthosporiummaydis）是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严重损失。选育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，后扩大成2~3mm的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不规则形。发病适温为25~30℃

。二、内容说明玉米小斑病（Helminthosporiummayd27玉米小斑病抗性鉴定课件28内容说明(续)

根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为O小种和T小种两个生理小种。T小种对T型细胞质有专化毒性，故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，孢子形成时间较长。二是由隐性单基因rhm控制，表现为小的褪绿病斑。鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为可靠。

内容说明(续)根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌29玉米小斑病抗性鉴定课件30玉米小斑病抗性鉴定课件31（一）所需用品1、材料：供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。玉米小斑病菌种，T小种的培养物；上一季感染O小种小斑病的玉米植株病叶。2、仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。3、药品试剂：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等。三、所需用品和操作方法

（一）所需用品三、所需用品和操作方法32用具用具33（二）操作方法

1.苗期接种鉴定（1）菌种的培养①病原菌的分离选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作。先将病斑剪成4~5mm2大小，约30~40块，然后分别将病组织小块置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次2~3min。最后以无菌操作方法，将病斑组织按正方形四点排列，栽种在PDA平板培养基（去皮马铃薯20g，葡萄糖10~20g，琼脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃

温箱中培养约7天。

（二）操作方法1.苗期接种鉴定34玉米小斑病抗性鉴定课件35②菌种的纯化

选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移3管），然后再放在25℃

恒温下培养。待产生孢子后，选取菌落较一致的斜面1~2管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、脐点特点。然后计测孢子大小。确认纯种后，再用斜面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中保存待用。

②菌种的纯化选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法36菌丝形态菌丝形态37（2）孢子悬浮液的制备

用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在100倍显微镜下每个视野有5个孢子浓度的悬浮液待用。

（2）孢子悬浮液的制备用少量无菌水倒入已产孢子的斜面38（3）接种病菌

接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左右。接种前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促进病菌孢子萌发。接种菌液量是每株1~2ml。用微型喷雾器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置25℃左右温度下保湿24小时。

（3）接种病菌接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左39（4）病情鉴定和分级标准

接种后7~10天即可进行病情鉴定。鉴定应在同一天内完成。鉴定项目和标准如下：①发病程度以叶片为单位进行鉴定。根据病斑占叶片面积的百分率，记载每片叶的感病程度。发病程度分为9级（表1）。鉴定接种部位的叶片，每株4片叶，每个供试材料10株共40片。以整株为单位，根据整株的发病情况，分为7个等级（表2）。而后，以叶片为单位，计算病叶率和病情指数。（4）病情鉴定和分级标准接种后7~10天即可进行病情鉴40病情计算公式

病情计算公式41表1玉米小斑病叶片发病程度分级标准

等

级病斑占叶片面积（%）012345678012—56—1011—2021—3031—5051—70>700级1级2级3级4级5级6级7级8级表1玉米小斑病叶片发病程度分级标准等级病斑占叶42表2玉米小斑病整株发病程度分级标准

级别全株叶片病斑占总叶面积（%）

0全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%~25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%~50%）3植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积51%以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积26%~50%），上部叶片有少量病斑（占叶面积10~25%）4植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积50%以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积26~50%）。5全株基本枯死。0.5级1级2级3级4级5级0级表2玉米小斑病整株发病程度分级标准级别全株叶片病斑占总43病情鉴定和分级标准（续）②病斑长度随机测量40个独立的病斑，每株4个，以mm为单位。③抗病性的反应型病斑反应型分为三级，分级标准见表3。病情鉴定和分级标准（续）②病斑长度44表3玉米小斑病抗性反应型分级标准

病斑型病斑症状坏死型

病斑中央的坏死部分为黄褐色，周围有深色的边缘，病斑周围和两端没有暗绿色的浸润区。萎蔫型病斑中央的坏死部分为灰褐色至近似灰白色，没有深色边缘，在坏死斑周围或两端有绿色的浸润区，在高温、潮湿、光照弱的条件下浸润区扩展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡。褪绿病斑型病斑小，病斑中央为白色坏死，没有绿色边缘，病斑周围有褪绿晕圈。

坏死型萎蔫型褪绿病斑型表3玉米小斑病抗性反应型分级标准病斑型病斑症状坏死型

452.成株期接种鉴定

①接种：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行。天气干燥时，接种后可在每株心叶喷水。②病情鉴定和分级标准：抽丝后15天左右进行病情鉴定，鉴定应在同一天内完成。发病程度以整株为单位，分7个等级。分级标准见表2。一般用于苗期和成株期抗病性鉴定。整株调查中，植