生物测定分析方法如何进行验证课件

生物测定分析方法如何进行验证验证验证就是证明采用的方法适合于相应检测要求，具有相当的准确性和可靠性，进而可以达到控制产品质量的目的。生物制品检测方法

生物制品质控中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法。生物制品的理化分析方法验证原则与化学药品相同.本课件仅对生物测定方法验证进行讨论

生物测定方法酶反应试验

是指在体外能促进酶分子的活化或本身具备酶的活性，通过底物的变化检测酶活性。这类方法的变异相对较小，结果比较准确。试验结果的变化范围一般在5~20%之间。生物测定方法结合试验

是基于产品与某种物质的结合特性而设计的试验，如免疫结合试验。目前主要用于生物制品的鉴别。这类方法的变异也相对较小。*结合试验中测定的分子不一定都具有生物活性一般讲结合试验结果的变化范围在5~20%之间。生物测定方法细胞测定试验是指产品可以诱导细胞产生可测定的应答，如细胞增殖、聚集、分化、死亡、迁移或产生特定的化学物质等。细胞测定试验一般能较好地反映制品的生物学活性，常用于各种生物制品的活性（效力）测定。相对而言,方法的变异较大。与使用传代细胞相比，使用原代细胞的方法变异更大。通常细胞测定的结果变化在50%以上。（30%）*精心操作以保证试验结果的一致性生物测定方法动物试验

是指以整体动物为试验材料检测制品生物学活性（或效力）的试验方法。由于动物实验的成本高、周期长和变异大，所以一般仅用于成品检定。更复杂并且包括动物的饲养、管理和维护。一般测定一个药物的生物活性是通过与已知的标准品或未处理（未免疫）的动物进行比较而得。方法的变异一般相对较大,通常动物试验的测定结果变化在50%以上。生物测定方法来源标准方法(法定方法)非标准方法(非法定方法,内控方法)原则上，对于各类方法均需进行验证，但依方法来源的不同对于验证的要求有所不同。生物测定法验证目前我们的成品分析方法均为法定方法.在被确定为法定方法前已经过了适当的验证。企业使用前需进行转移性验证,以证实在企业实验室条件与实际的使用条件下该方法也是适用的。专属性如何验证生物学测定方法的专属性与测定方法及产品组成密切相关，所以应首先从测试原理、测试用材料和供试品组成等方面分析方法的专属性。CHO细胞残留，采用ELISA法，确认抗体的特异性及目标蛋白的非干扰性。如何进行？采用CHO蛋白标准品作为样品测试。（标准品浓度应选择质量标准限度左右的浓度）阳性结果选用产品（目标蛋白）作为样品测试。（浓度应选择日常测试中的最大浓度，即范围的上限）阴性结果用产品加CHO蛋白标准品测试。应阳性结果。应有重现性，至少3个测试结果。专属性如何验证SDS电泳纯度检测目的，目标蛋白的纯度验证方法：采用37度或更高温度将产品降解，获得产品二聚体杂质与未降解的产品同时做实验，对照，降解后产品检测结果明显出现杂质带。此外，需考虑产品中可能存在的小分子蛋白杂质。应有重现性，至少3次检测结果中间精密度如何验证步骤：准备3个不同稀释度的样品（测量范围内的高、中、低浓度）在一组3次试验中对每个稀释度重复测定3次。测定不同工作日之间的变化测定不同批号的试验样品间的变化测定不同实验员间的变化等等计算每一试验每一浓度测定的平均值和标准偏差计算试验间每一浓度的变异系数检测限如何验证对于生物测定，LOD就是能产生比空白对照液强的反馈的最低试样浓度。通常认为反馈是空白对照标准偏差的2-3倍时为较为满意的测定限度。下述以免疫测定OD值为例：检测限如何验证-例子目的：确定比空白对照高3个标准偏差的值步骤：配制适宜浓度的标准样品配制空白对照液按照SOP进行至少3次测定，并至少做两个平行测定样品和空白的OD值计算空白对照间的标准偏差LOD=3*空白的标准