脐带间充质干细胞

关于脐带间充质干细胞第1页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六什么是脐带间充质干细胞？脐带间充质干细胞（MesnchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。第2页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSC）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。第3页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六脐带——获取干细胞的另一来源我国科学家2006年首次从新生婴儿废弃的脐带组织中得到了一种多能干细胞，称作脐带间充质干细胞(UC-MSC)。UC-MSC具有胚胎干细胞类似的增殖能力和多向分化潜能，且来源丰富、取材方便、低病毒感染率、无伦理障碍，又没有胚胎干细胞产生畸胎瘤的问题，并且抗原性很低。不产生免疫排斥反应，异体使用无需HLA配型。第4页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞治疗疾病的原理替代和修复死亡和受损伤的细胞；激活休眠和处于抑制状态的细胞；旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）第5页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六涉及病症肝脏疾病神经系统疾病心血管疾病血液系统疾病骨关节疾病烧伤糖尿病MSCs可能用于治疗以下疾病间充质干细胞多向分化作为种子细胞，临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病是关键鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病第6页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六脐带间充质干细胞具有临床应用价值•

泌尿系统：肾实质的修复；•

消化系统：肝组织的修复；•

内分泌系统：胰岛细胞的修复；•

神经系统：脑、脊髓损伤的修复；•

血液系统：化疗、放疗后造血系统的修复；•

循环系统：心肌修复、血管修复；•

免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；•

衰竭器官的结构和功能的修复和再生：最终替代组织和器官移植。第7页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞治疗途径腰穿途径静脉途径局部种植介入途径第8页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六优势1、取材方便：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；3、免疫原性低：具有独特的免疫调节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。第9页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六前景干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓损伤、心力衰竭等疾病。第10页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞前景干细胞的魅力在于：一旦身体需要，这些细胞可按照发育途径通过分裂而产生分化成熟的体细胞。也许在某一天，人们突然发现，人体器官可以在实验室按需要、按流程生产，血细胞、脑细胞、骨骼、心肌细胞、肝脏、神经等的更换都不成问题，即使患上白血病、帕金森氏症和癌症这些不治之症也能绝处逢生。第11页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六供者筛选供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。第12页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六样本采集运输要求脐带采集标准：

1.脐带长度不得低于20cm2.脐带两端均在2-3cm处结扎

3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化

4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横

5.采集套装内容完整，无缺失

6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认

7.脐带运输时间在规定范围内

8.温度控制在适度范围内（0度-25度）第13页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六样本接收标准脐带的接收标准：

1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。2.母血采集量≥5ml脐血检测样本采集量≥5ml3.采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。4.无可能造成供者基因型异常的家族史。5.供者健康调查表登记信息无异常。第14页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六

间充质干细胞的制备方式间充质干细胞的制备原理：脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。组织块分离法免疫五项检测均为阴性第15页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六工艺流程简介供者筛选采集接收制备培养冻存复苏发放运输临床应用信息反馈第16页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞的制备方式华通氏胶的提取与培养华通氏胶提取：1.消毒2.清洗3.分离出两条动脉和一条静脉4.剥取华通氏胶5.剪碎华通氏胶（大小1mm3）6.接种至培养皿培养（密度2-3g/10cm皿）第17页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞原代培养细胞补液和换液（原代培养）

1.制备五天补液（观察是否有细胞爬出）2.八天换液第18页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞的冻存细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO）配制：DMSO10%冷冻方式深低温冰箱梯度降温第19页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六细胞治疗程序1、治疗前咨询：明确诊断，明确疾病处于哪一期；

2、治疗风险：分析利弊；可能的副作用；获益

3、知情同意：第20页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六治疗前准备1).安全检测:菌检；

2).个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定;

3).需要的细胞数量；4).细胞的使用方法；5).可能出现的不良反应及应对措施。第21页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六间充质干细胞质量要求细菌检测内毒素检测革兰氏检测支原体检测活性检测≥90%阴性第22页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六细胞发放1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保存液）2.运输要求：时间、温度3.病人信息填写完整4.样本检测合格第23页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六MSC治疗禁忌证：

1.怀孕。2.精神病。3.严重的心、肝、肾、肺功能不全。

3.不能控制的严重感染。

4.合并其他有致命危险的疾病。5.一般受者年龄不超过65岁（个别患者>65岁）。6.自体免疫性疾病晚期。7.恶性肿瘤。8.HIV阳性第24页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六第25页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六案例分析第26页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六干细胞临床应用

一、肝硬化细胞移植有可能成为肝硬化治疗的最佳备选方案。越来越多的体内外实验表明MSC可以横向分化为功能性肝细胞，动物研究表明脐带MSC可以抑制诱导型的肝硬化发生，并促进肝硬化的消退。

第27页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六临床资料本组男10例，女2例，年龄38-63岁。均为慢性乙型肝炎，肝硬化,Child-Pugh分级B级9例，C级3例。健康婴儿脐带提取间充质干细胞经实验室传代、扩增，取108制成40ml混悬液，第一次经肝动脉注入，第二次以后为静脉输注，每周一次，共4次。4周后复查生化指标。第28页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六结果食欲改善、体力好转11例（91.66%）；腹胀减轻11例（91.66%）；腹水减少、下肢浮肿减轻10例（83.33%）。12例患者术中均未发生严重并发症，术后无不良反应。第29页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六12例肝硬化患者脐带间充质干细胞移植前后实验室指标变化

ALB(g/L)ALT(U/L)TBIL(μmol/L)PT(s)移植前

30.69±4.32122.78±89.3235.32±21.6117.89±4.49移植后4周

36.28±5.8165.67±20.6333.75±19.7115.68±4.14P值

<0.01<0.05>0.05<0.05第30页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六MSC治疗肝硬化的机制

主要有以下几个方面：1)MSC分化形成正常肝细胞，补充肝细胞数量，改善肝功能；2)MSC分泌细胞因子/生长因子、抑制炎症反应；3)MSC抑制肝星形细胞，活化、阻止细胞外基质的生成；4)MSC激活卵原细胞，促进肝细胞再生；5)MSC降解肝内过量的细胞外基质。

第31页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六二、脊髓损伤临床资料本组男11例，女4例。年龄11-48岁，平均37岁。病程4个月-5年，平均1.2年。治疗前均有损伤平面以下肌力、肌张力减退，其中尿失禁9例，大便失禁7例。

第32页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六临床资料脐带间充质干细胞108，第一次、第三次制成混悬液20ml，其中5ml通过腰穿作椎管内注射，另外15ml经静脉输注。第二次、第四次制成混悬液40ml，作静脉输注。每次间隔一周，共4次为一疗程。第33页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六评价标准感觉平面恢复2个椎体节段以上，肌力恢复2级及以上，肌张力恢复2级及以上，大小便能控制，达到上述之一者，为显效。有改善但达不到上述标准，为有效。第34页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六结果15例患者，显效5例，有效9例，无效1例。第35页，共38页，2022年，5月20日，1点49分，星期六三、肌萎缩侧索硬化症

肌萎缩侧索硬化症(amyotrphiclateralsclerosis，ALS)是一种累及锥体束上、下运