2022-2023学年浙科版（2019）选择必修三 1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 课件（19张）

选3.1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得一、如何分离得到微生物成分？二、如何测定微生物数量？1.平板划线法2.稀释涂布平板法由不同微生物个体繁殖后代组成的大片菌落单菌落：由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团?1.稀释涂布平板法2.显微镜计数法（需用到血细胞计数板）分离微生物——平板划线法分离微生物——平板划线法注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。思考：1.连续平行划线法，单菌落一般出现在划线的什么位置？2.扇形划线法，单菌落一般出现在划线的什么位置？分离微生物——平板划线法平板划线操作中三种灼烧的目的不同1.蘸取菌液前灼烧2.每次划线前灼烧3.划线操作结束后灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。分离、计数微生物——稀释涂布平板法无法计数1591720无法计数1411310无法计数15011319ml无菌水加入0.1ml稀释液例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g每次稀释都要换一支吸管活动：接种、培养并分离酵母菌活动：接种、培养并分离酵母菌讨论1.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味②接入面团中观察能否发面;③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染活动：接种、培养并分离酵母菌计数微生物——显微镜计数法血细胞计数板专用盖玻片计数微生物——显微镜计数法1.每个血细胞计数板的正中央有2个计数区。2.红细胞计数区共400个小方格。例：回答下列相关问题。（1）用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是_________________________________。（2）若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有________个。计数微生物——显微镜计数法使酵母菌分布均匀，计数准确稀释2×108使用血细胞计数板的注意事项：1.先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去。2.滴加菌液时避免菌液滴到盖玻片上，还要防止产生气泡。3.计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4.对压线细胞计数时，数上不数下，数左不数右。5.为减小误差，应对同一红细胞计数区中的细胞进行3次计数后取平均值。6.血球计数板使用完后，用自来水冲洗，洗后自行晾干或用吹风机吹干。7.血细胞计数板计数时不能区分死菌和活菌。计数微生物——显微镜计数法调整培养基配方和培养方式可有目的地培养某种微生物1.不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同。2.许多微生物的代谢方式并不唯一。3.培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长。如何从众多微生物中筛选出我们需要的微生物类型？在培养基中添加（或减去）某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其它微生物均不能生长，这样的培养基称为选择培养基。能分解尿素的微生物的分离与计数2.此选择培养基的成分如何调整？尿素在脲酶催化作用下分解：1.从哪里取样？4.如何鉴定该选择培养基上生长的是能分解尿素的微生物？3.尿素如何除菌？从有哺乳动物排泄物的地方取得土样尿素为唯一氮源。把琼脂换成琼脂糖G6玻璃砂漏斗过滤培养基中加入酚红指示剂，周围出现红色环带的菌落是能分解尿素的。（NH2）2C=O+H2O2NH3+CO2脲酶能分解尿素的微生物的分离与计数实验结果：LB培养基尿素培养基为什么同一稀释度下，LB培养基上的菌落数比尿素培养基上多？图1-20能分解尿素的微生物的分离与计数能分解尿素的微生物的分离与计数1.不按照稀释度由大到小的顺序依次操作会影响实验结果。如果先取用稀释度小的溶液，微生物浓度大，再用同一移液器吸取稀释度大的菌液，就会提高后者的细菌数目，从而导致较大的统计误差。2.应统计稀释度为10-3的3个培养皿中的菌落数后取平均值。因为这个浓度的培养皿中菌落数比较适中，计数的结果误差较小。3.这些微生物能够合成脲酶而将尿素分解成氨。氨可使培养基的碱性增强，培养基pH升高，含酚红指示剂的培养基变成红色。而且，红色环带与菌落面积之比越大，说明该菌落分解尿素的作用越强。讨论（P21）4.

意见①：合理，因为自生固氮微生物能在固氮酶的作用下，将N2转化为可利用的氮源，故可在没有氮源的培养基上生长。可以挑取培养基未变色区域的菌落，清洗除去细胞表面的培养基后接种在无氮源的培养基上