杭州免疫学会议发言

0静脉免疫球蛋白对早产儿脐血T淋巴细胞功能的影响1引言—研究目的静脉免疫球蛋白(IVIG)被广泛应用于感染性和免疫相关性疾病的治疗。IVIG在新生儿尤其早产儿感染预防与重症感染治疗中疗效确切，但其安全性也日益受到关注。近年研究发现足月新生儿应用大剂量IVIG后，T、B淋巴细胞增殖反应下降。而有关早产儿应用IVIG对其免疫功能影响的研究资料较少。本研究目的：采用体外实验，选择不同剂量IVIG作用于早产儿脐血单个核细胞，观察其对Th细胞和调节性T细胞功能的影响，从免疫学角度探讨IVIG早产儿用药安全性。2材料与方法—研究对象

选择2011年6月～2011年12月在青岛大学医学院附属医院母孕32～34周娩出的早产儿15例为研究对象，出生体重1300g～2450g，平均(1923±349)g。其母亲分娩前4周内无明显感染史，未使用免疫增强或抑制剂等药物。所有受试的早产儿母亲均知情同意。3材料与方法—研究方法标本采集CBMC制备CBMC培养(设置A组、B组、C组）CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞IFN-r、IL-4、IL-10、TGF-β14材料与方法—分

组IVIG的浓度选择

37℃、饱和湿度、5%CO2条件培养72hA组（近生理状态组）B组（低剂量组）C组（高剂量组）6mg/ml9mg/ml12mg/ml5材料与方法—统计学处理

采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。实验数据呈正态分布且方差齐，以x±s表示。采用单因素方差分析，LSD检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。6结果组别例数IFN-γIL-4A组15175.68±86.8229.04±8.27▲B组15124.51±56.0618.01±5.72C组1532.59±26.82＊14.44±5.18注：＊与B组和A组比较,P<0.01；▲与B组和C组比较，P<0.01表1不同浓度IVIG对早产儿脐血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影响1、不同浓度IVIG对早产儿脐血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影响7结果组别例数IFN-γ/IL-4A组155.61±2.38B组158.22±4.21☆

C组152.41±1.72△

表2不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化的影响注：△与B组和A组比较，P<0.01；☆与A组比较，P<0.05.2、不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化的影响8结果020406080100120140160180200IFN-γIL-4A组B组C组图1不同浓度IVIG对CBMC分泌细胞因子影响0123456789A组B组C组A组B组C组图2不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化影响9结

果3、IVIG对早产儿CBMC体外培养后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达的影响:

实验显示：早产儿CBMC在不同浓度IVIG干预下，各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达率比较均无显著性差异(P均>0.05)。10结

果4、IVIG对早产儿CBMC体外产生IL-10和TGF-β1水平的影响：

C组CBMC分泌IL-10水平明显低于B组(P<0.05)，显著低于A组(P<0.01)；B组CBMC分泌IL-10水平也明显低于A组(P<0.05)。

C组CBMC分泌TGF-β1水平显著低于A组(P<0.01)，但与B组比较无显著性差异(P>0.05)；B组CBMC分泌TGF-β1水平明显低于A组(P<0.05)。

11图3

IVIG对早产儿CBMC体外培养后CD4+CD25+Foxp3+Treg

细胞表达的影响结果图4IVIG对早产儿CBMC体外培养后IL-10和TGF-β1水平影响12讨论IVIG除免疫替代外可通过多种机制发挥免疫调节作用、用于治疗多种免疫相关性疾病

中和清除致病抗原，特别是超抗原

改变免疫复合物的特性，减少免疫复合物的沉积

免疫封闭巨噬细胞和B淋巴细胞，抑制巨噬细胞的吞噬功能和B淋巴细胞的活化

恢复独特型-抗独特型网络，抑制自身抗体的产生

抑制T淋巴细胞活化，减少各种细胞因子的产生等13新生儿（包括早产儿）Thl/Th2功能状态特点

足月儿T淋巴细胞功能呈生理性低下状态，且其Th细胞亚群功能发育不平衡，Th2类细胞功能相对占优势

早产儿IFN-γ、IL-4的水平明显低于足月儿，以IFN-γ更为突出，即仍然Th2亚群功能相对占优势

14IVIG对新生儿T细胞功能的影响：

体外实验显示：IVIG10mg/ml可以明显抑制PHA-P诱导的足月新生儿CBMC分泌IFN-γ，也可以抑制CBMC中IL-4mRNA的表达；同时抑制PHA诱导的足月新生儿CBMC分泌IL-10与TGF-β1。

IVIG能抑制脂多糖诱导的新生儿单核巨噬细胞的活化，从而抑制其分泌IL-6，而IL-6能促进T细胞的活化及向Thl、Th2分化，间接证明了IVIG对T细胞尤其是Thl、Th2细胞因子的抑制作用15

IVIG对新生儿肺炎似无明显疗效，大剂量使用IVIG可能因其至少短期内具有抑制T、B淋巴细胞功能作用而加重新生儿期暂时免疫缺陷。

对极低出生体重儿过大剂量或短期内反复使用IVIG预防感染无明显疗效，而且可能加重暂时免疫低应答反应，影响细胞免疫的自然发育过程。16本实验研究结果：

与近似生理状态组比较，低剂量IVIG组CBMC分泌IL-4显著降低，而IFN-γ变化轻微；较大剂量IVIG组IFN-γ和IL-4的水平皆明显降低，但以IFN-γ降低更为显著

结果提示：IVIG可抑制早产儿脐血Thl、Th2细胞功能，并且与其剂量相关。低剂量时主要抑制Th2细胞功能，较大剂量时Th1、Th2细胞均受抑，但以Th1细胞更为显著17本实验研究结果显示：

早产儿CBMC经不同剂量IVIG干预后，其CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率无显著差异。

较大剂量IVIG组CBMC分泌IL-10水平明显低于低剂量组和近生理状态组，低剂量组也明显低于近生理状态组；较大和低剂量组CBMC分泌TGF-β1水平均明显低于近生理状态组，但较大剂量组与低剂量组比较无显著性差异。

结果提示：IVIG对早产儿CBMC中天然Treg细胞的数量并无影响。但IVIG能抑制早产儿CBMCIL-10和TGF-β1的分泌。IVIG浓度越高，IL-10分泌越少；而TGF-β1当IVIG达到一定浓度后其抑制分泌程度无进一步加重。18正常过敏体质伴炎症反应过敏体质未伴炎症反应123TH1/TH17/TH2/Treg细胞19综合国内外文献和本研究结果：

早产儿应用较大剂量IVIG对其T细胞功能有明显影响，可进一步加重Th1/Th2失衡，抑制Treg细胞功能，加重暂时免疫低应答反应，影响细胞免疫的自然发育过程，可能增加日后变态反应性疾病的发生。提示早产儿应用IVIG需选择适宜剂量。20结论IVIG可抑制早产儿脐血Thl、Th2细胞功能，并且与其剂量相关。低剂量时主要抑制Th2细胞功能，较大剂量时Th1、Th2细胞均受抑，但以Th1细胞更为显著。IVIG不能直接影响早产儿脐血天然Treg细胞的数量，但可以通过调节细胞因子IL-10和TGF-β1的分泌抑制Treg细胞的功能且有剂量依赖效应。21树突细胞（DC）在机体免疫系统中处于中心地位作为一种专职抗原提