使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS_第1页
使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS_第2页
使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

66使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS基原：CM-H2DCFDA在胞内水解成DCFH,被胞内的氧化剂氧化成高荧光强度DCF，用于检测ROS的成。Dichlorodihydrofluoresceindiacetate(DCFH-DA)是极性的化学物质能自由通透细胞膜。进入细胞后，被easterase去两个乙,形具有极性的2’,7-dichlorodihydrofluorescein(DCFH),保在细胞内。当细胞产生与DCFH反应,使DCFH形了’,7’dichlorodihydrofluorescein(DCF)通过流式细胞仪测定细胞内DCF的荧光强度，即可对单个细胞为基础的细胞内ROS行原位实时检测，从而根据荧光强度直接反映细胞内自由基的变化程度下图）主试：1.PC-12细株2.DCFH-DA粉sigma）mg解于721ul100%乙醇中（这时的浓度为10.0之后用DMEM培液释上述溶液10倍配置成mM的储存液-20°光保存。3.Aβ25-35（浓为）4.AP终浓度为10uM5其如培养细胞常用试剂DMEM高、胎牛血清、胰酶等MTT操作方法：（）集细胞：取对数生长期细胞收集细胞并调整细胞浓度至110）/mL（）别加入AβA（六孔板养24小（）载探针：加入终浓度为10uM的DCFH-DA37°5%CO培箱中静置h，2每隔3-5min混一下，使探针和细胞充分作用。（）用无血清的培养基或温暖的PBS洗涤细胞3次去除未进入细胞内的。

5656（）收各组细胞，上流失细胞仪检测。激发光，射光525nm（6）实验分四组：空白对照组)、PC-12+探针照组、PC-12+DA+Aβ25-35实验组PC-12+DCFH-DA+Aβ25-35+AP（给药组）结果分析：注意事项：（）理过程绝对避光（紫外灯能不能开？）（）料与细胞混合时间要充分（）针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高（）量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外少种可能的误差（）胞应保持良好的活性状态。贴壁细胞培养时不应超过瓶底面积的75%悬浮细胞培养时其数目不能超过/mL贴壁细胞在消化处理时要尽量温和、快速，避免产生过多的细胞碎片（）用流式细胞仪要确保侧面的细胞分散开（在与染料混合和处理时）（）流细胞仪对细胞数目有一定的要求，一般为10，以使用六孔板（）虽一般要求将阴性对照组细胞调节电压至阴性置信区如正对照

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论