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ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB05内蒙古自治区地方标准DB15/T2734—2022向日葵总DNA快速提取及检测技术规程TechnicalcodeofpracticeforrapidextractionanddetectionoftotalsunflowerDNA2022-07-292022-07-292022-08-29内蒙古自治区市场监督管理局发布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。本文件主要起草人：郭树春、李素萍、张艳芳、孙瑞芬、邵盈、于海峰、刘慧、李丽君、李二珍、段宇坤、聂惠、乔慧蕾、牟英男、张勇、张晓蒙、梁晨、张聪子、李有良、张立华、刘锦川。向日葵总DNA快速提取及检测技术规程范围DNADNA本文件没有规范性引用文件。本文件没有需要界定的术语和定义。DNADNA0.8µg～1.2µg，DNAA260/280值在1.8～2.0之间。5药品准备药品准备见附录A。6DNA提取样品准备取向日葵4～8叶期的叶片、根、茎80mg～120mg。样品研磨1.5mL离心管加入样品，液氮制冷，用磨砂尖头玻璃棒迅速研磨成粉末。DNA抽提DNA抽提方法：700µl2%CTAB（A）；651h10min700µl/（24∶1）10min。离心沉淀方法：410000rpm6min；700µl430min；10000rpm1min；1mL70%DNA2，10000rpm1min将6.4得到的沉淀物在超净工作台下风干，加入1×TE100µl（1µl10mg/mlRNase）溶解DNA，在37℃水浴中水浴1h去除RNA。DNA紫外分光光度计测定DNA浓度，并将其稀释到20ng/µl，取5µl稀释液，以DL2000marker为对照，1%琼脂糖凝胶电泳检测。具体检测方法见附录B。保存DNA质量检测合格后，-20℃储存备用。DNA提取过程中注意事项：DNA提取过程中注意事项：——加入CTAB后轻轻摇匀，防止基因链断裂；——操作过程中，全程佩戴医用口罩和专用手套。附录A（2%CTAB：CTAB4g，Nacl16.364g，1MTris-HCI20ml(PH8.0)，0.5MEDTA8ml，70mlddH20200ml1MTris-HCITris6.06g40mlddH202.1mlPH至8.0，定容至50ml。0.5MEDTA(pH8.0)50ml9.306gEDTA-Na2·2H2035ml1gNaOHpH8.050ml(EDTANaOHpH8.010×TE：5ml1MTris-HCI，1ml0.5MEDTA44ml1ml10×TE9ml1×TE。27.55420mL0.5mol·L-1ddH2O1L19ddH2O0.5×TBE。附录B（资料性）1%琼脂糖凝胶电泳检测1%琼脂糖凝胶电泳检测方法：1（70

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