低分子量肝素改善急性胰腺炎微循环障碍课件

低分子量肝素改善急性胰腺炎微循环障碍的实验研究专业普通外科研究生王强*前言*实验方法和材料*实验结果*结论*讨论*参考文献一、前言

急性胰腺炎发病机制胰酶自身消化学说肠道细菌易位及二次打击论炎症因子的级联瀑布式反应胰腺微循环障碍

研究表明SAP早期即发生微循环障碍，并贯穿SAP的整个病程，是SAP的启动因子和持续损害因子，其中炎症因子和血管活性物质的过度释放更加重了SAP的微循环障碍[1，2]。所以改善胰腺微循环障碍有望成为治疗SAP的一种重要手段。胰腺微循环的影响因素胰腺小叶多由独支小叶内动脉供给血液，相邻小叶内动脉之间及其分支之间无吻合存在，属终末动脉，所以小叶内动脉的痉挛、栓塞或压迫会造成胰腺小叶的缺血、坏死

；急性胰腺炎时大量细胞因子和炎性介质释放（如：NO、ET、PAF、TXB2、TNF、IL、缓激肽）

，使血管收缩、痉挛、通透性增加，加重了微循环障碍；二、实验材料和方法实验材料TNF-αELISA试剂盒、BKELISA试剂盒均购自美国R&D公司。牛黄胆酸钠购自美国Sigma公司。低分子量肝素（LMWH）购自广东天普生化医药股份有限公司。

重症急性胰腺炎大鼠模型的制作

Wistar大鼠32只作为实验对象，采用胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液的方法复制SAP模型。术前禁食12h，饮水不限。1%戊巴比妥钠腹腔麻醉（3ml/kg）,固定大鼠。经上腹正中切口进腹，提起十二指肠以无损伤血管夹夹闭肝门部胰胆管。TB针经十二指肠穿刺胰胆管，加压注射5%牛黄胆酸钠(1ml/kg)，持续1min，助手捏紧十二指肠两端，保持3min，观察到胰腺迅速充血、间质水肿并有散在出血点，术毕关腹。实验动物及分组及处理

Wistar大鼠假手术组(S组，n=8)低分子量肝素钙组(L组，n=12)

急性胰腺炎模型组（SAP组，n=12)只麻醉开腹，关腹后给予生理盐水造模成功后给予低分子量肝素钙造模成功后给予生理盐水

分别于6h、12h采血，ELISA双抗夹心法测定数据，观察病理切片统计学方法所有数据应用SPSS13.0统计软件处理。计量资料用均数±标准差表示。TNF-α、BK比较采用重复测量资料的方差分析。病理评分比较用单因素方差分析的LSD-t检验。以α=0.05为检验水准。三、实验结果各组大鼠血清TNF-α、BK的浓度（ng/L）及病理评分

组别TNF-αBK病理评分6h12h6h12hS组SAP组L组75.7±3.5598.8±2.0690.8±2.0076.1±3.52107.9±1.7585.35±2.4216.97±1.5924.09±1.1221.43±0.8316.98±0.9829.34±1.1119.13±1.550.5±0.29.8±1.64.2±0.9病理切片S组(400×）SAP组（400×）L组（400×）统计图表TNF-α均数图（单位ng/L）BK均数图（单位ng/L）胰腺病理切片的病理评分四、讨论TNF-α是最重要的炎性介质之一，其参与IL-1、IL-6和IL-8等炎症因子的产生且诱导自身的基因表达，导致各种炎症因子的大量释放，引起“瀑布”效应；促使白细胞趋化、黏附，使血管内皮细胞通透性增加；刺激血管内皮细胞产生内皮素一氧化氮和氧自由基等介质,加剧微循环障碍，导致胰腺组织坏死[5,6]。缓激肽（BK）可以通过与血管紧张素、氧自由基、内皮素和血小板活化因子的相互作用来发挥其血管效应[3]。Bloechle［7］等的实验研究表明缓激肽可导致微循环瘀滞，广泛的白细胞粘附，提示BK加重了微循环障碍并加重胰腺组织损伤。但是Weidenbach[8]等实验发现缓激肽对AP胰腺微循环具有保护作用。

LMWH在改善SAP微循环障碍方面已经得到基本肯定，大量实验证明LMWH对AP有治疗作用，可以降低AP炎症因子及血管活性物质的大量释放。潘小季[9]等的实验研究证明LMWH可以降低SAP大鼠炎症因子TNF-α、IL-6的释放，降低胰腺组织的TXB2/6-keto-PGF1α比值，改善SAP的微循环障碍。李介秋［10］等经实验研究表明LMWH能降低兔子急性坏死性胰腺炎(AHNP)模型的TNF，NO，淀粉酶（AMS），TXB2水平,抑制丙二醛（MDA）产生,可改善AHNP兔微循环障碍,对AHNP有一定治疗作用。

五、结论

本实验的研究表明，SAP组大鼠TNF-α和BK的血清含量随时间增加明显升高，并明显高于S组大鼠且胰腺病损程度明显升高，经过LMWH干预后，TNF-α和BK的释放随时间增加明显减少，同时经过LMWH干预的大鼠各时间点TNF-α和BK的释放明显低于SAP组且胰腺病损程度明显降低。表明TNF-α和BK的大量释放加重了SAP胰腺微循环障碍，同时LMWH可以减少TNF-α和BK的释放，从而改善SAP胰腺微循环障碍，减轻SAP胰腺病损程度，对SAP起到治疗作用。

六、参考文献[1].BhatiaM，NeoptolemosJP，SlacinJ.InflammatoryMdiatorsastherapeutictargetsinacutepancreatitis[J].CurrOpininvestingDrugs,2001,2(4):496-501.[2].陈友岱，周总光，缓激肽在器官微循环损伤中的作用[J]。微循环学杂志,2001,11（1）:43-46[3].刘立涛,滑志娟,程树杰等,小剂量低分子肝素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺微循环的影响[J].陕西医学杂志2007,36(5):1289-1291[4].DoboszM,MionskowskaL,HaaeS.Heparinimprovesorganmicrocirculatorydisturbancesincaeruleininducedacutepancreatitisinrats.World[J]Gastroenterol2004;10(17):2553-2556[5].谭向龙，王世斌，姚咏明等，低分子量肝素联合乌司他丁治疗急性胰腺炎的疗效分析[J]。中国急救复苏与灾害医学杂志，2008,3(10):597-607[6].彭新刚，张顺，卢云等，大鼠重症急性胰腺炎时IL-6、TNF-α和微循环变化的实验研究[J]。陕西医学杂志，2007，36（10）：1275-1278[7].BloechleC,KustererK,KuehnRM,etal.Inhibitionofbradykininβ2receptorpreservesmicrocirculationinexperimentalpancreatitisinrats[J].AmPhysiol,1998,274(1):42-51[8].WeidenbachH,LerchMM,GressTM,etal.Vasoactivemediatorsandtheprogressionfromoedematoustonecrotisingexperimentalacutepancreatitis〔J〕.Gut,1995;37(3)