动物、矿物药分析课件

动物药分析概述动物药是中药的重要组成部分。我国应用动物药历史悠久。在4000年前甲骨文就记载有40余种药用动物，如麝、犀牛、蛇等。最早的本草《神农本草经》也收有僵蚕、犀角、地龙等67种动物药。《中国药用动物志》收载1500种。全世界已用的动物药超过了2000种。目前我国供药用的动物千余种。

80年代进行的全国药物资源调查表明：我国现有中药资源12,809种。

其中药用植物11,146种，占87.03%；药用动物1,581种，占12.34%；药用矿物80种，占0.63%。动物药中其中有不少为疗效显著的名贵中药，如牛黄、熊胆、麝香、羚羊角、海马、海龙、蛤蚧、阿胶、鹿茸等，常用动物药还有全蝎、蜈蚣、僵蚕、斑蝥、蟾酥、蛤蟆油、龟板、鳖甲、穿山甲、蕲蛇、乌骨鸡等。1.动物活性成分的特点（1）疗效确实熊胆中的熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸具有溶解胆石作用。蟾毒配基就具有升压、强心、兴奋呼吸等作用。从人尿中提取的尿激酶（现已能从组织培养人类肾细胞获得），可直接激活纤溶酶原使其变为纤溶酶。后者具有很强的溶解纤维蛋白的作用。临床上用于脑血栓形成、脑栓塞及心肌梗塞等。水蛭素是最强的凝血酶抑制剂等。箭毒蛙碱是最强的心脏毒之一。能使各种起电膜有选择性地增加对钠离子的通透性。沙海葵毒素是已知最强的冠脉收缩剂，作用与强心苷相似，但活性强100倍以上，具有抗癌、抗白血病的作用，其毒性比氰化钠高1250倍。（3）应用面广动物活性成分在医药方面具有独特的疗效外，近年来还发现他们是研究分子级产品的有力工具，也是有希望的检验试剂。有的活性成分如昆虫信息素还可无害地用于诱杀害虫，这对于农业生产具有重要的意义。（4）潜力大

动物药源丰富。现存动物已命名的有150万种，而植物仅50万种，但对动物药的研究较植物药则相形见绌。海洋药物资源也很可观。地球上的生物80%在海洋。海洋生物与陆地环境不同，它又具有独特的化学性质，活性成分的筛选命中率更高。如美国国家肿瘤研究所年筛选的3万个抗肿瘤样品中1500个来自海洋。其中具抗癌活性的占1%。其中发现某些软体动物、棘皮动物和海绵动物命中率高。2.动物药的化学成分分类（1）蛋白质及其水解产物（2）生物碱类（3）甾类化合物（4）酮类、酸类成分第二节常用动物类中药分析

一、含胆汁酸类中药（牛黄、熊胆、猪胆粉）分析

（一）胆汁酸的结构特征及其在动物界的分布天然胆汁酸是胆烷酸的衍生物，在动物胆汁中它们通常与甘氨酸或牛磺酸以肽键结合成甘氨胆汁酸或牛磺胆汁酸并以钠盐形式存在。胆汁酸的异构现象主要是由分子中碳环和环上取代基在空间排列不同而引起的，A／B环有顺反两种稠合方式，B／C环以反式稠合，C／D环也几乎都是以反式稠合（强心苷和蟾毒配基例外）。胆烷酸胆酸粪甾烷酸在高等动物胆汁中，通常发现的胆汁酸是含有24个碳原子的胆烷酸的衍生物，常见的有胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、α-猪去氧胆酸及石胆酸等。而在鱼类、两栖类和爬行类动物中发现的胆汁酸则含有27个碳原子或28个碳原子，这类胆汁酸是粪甾烷酸的羟基衍生物，而且通常是和牛磺酸相结合存在于动物胆汁中。主要胆汁酸见表16-1。（二）胆汁酸化学性质及鉴定方法

1．胆汁酸的化学性质一般是指胆汁酸中各功能基的反应，主要有以下几方面。（1）末端羧基反应成盐：游离的胆汁酸类在水中溶解度很小，形成盐后则易溶于水，如胆酸在20℃水中的溶解度为0.028％，而其钠盐为56％。还原反应：胆汁酸在乙醚中和氢化锂铝作用，或者在乙醇中与金属钠作用。羧基被还原，C24酸被还原成相应的C24醇。（2）环上羟基的乙酰化反应甾环上的羟基可按常法乙酰化，乙酰化物容易结晶，有一定的熔点，有利于胆汁酸的纯化和精制。（3）甾环上酮基的还原反应除胆酸易于得到外，其它胆汁酸由于资源限度，大量制备用于临床有困难，目前一般是采用胆酸作原料来加工制备，如除去C7位上的羟基，则变为去氧胆酸；除去C12位羧基，则变为鹅去氧胆酸；除去C7，C12位上的羟基，则变为石胆酸。（1）化学法Penkofer反应：原理是蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糖醛，后者可与胆汁酸结合成紫色物质。GregoryPascoe反应：加45％硫酸、0.3％糠醛；胆汁存在的溶液显蓝色。此方法也可用于胆酸的定量分析2．胆汁酸的鉴别方法

硅胶薄层色谱广泛用于动物胆汁中胆汁酸分离和鉴定。①分离游离胆汁酸的展开剂②分离结合胆汁酸的展开剂③显色剂：30％硫酸试剂、10％磷钼酸乙醇试剂、苯甲酸试剂、茴香醛试剂、三氯化铁试剂、三氯化锑试剂、重铬酸钾饱和的80％硫酸试剂等。（2）薄层色谱法18（三）牛黄、熊胆、猪胆粉的来源及主要化学成分

1．牛黄牛黄为牛科动物牛BostaurusdomesticusGmelin的胆囊结石、少数为胆管、肝管结石。具清心、开窍、镇惊、豁痰、息风、解毒的功效。京牛黄：北京、天津、内蒙古东牛黄：东北西牛黄：西北、河南印度牛黄：印度金山牛黄：加拿大、阿根廷、乌拉圭澳洲牛黄：澳大利亚

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许多著名的中成药，如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸、牛黄消炎丸、牛黄清心丸、珠黄散、再造丸等中均含有牛黄。牛黄中含有较多的胆汁酸，其中主要为胆酸（5%~11%）、去氧胆酸（约2％）、鹅去氧胆酸（0.6%~1.7%）及其盐类，并含7%的SMC（Smoothmusclecontractor，水溶性肽类化合物，具收缩平滑肌及降低血压作用）、胆红素（bilirubin）及其钙盐、胆甾醇、多种氨基酸及多种无机元素。20212223

天然牛黄应用范围广，药源短缺，价格昂贵，故伪品甚多，多用动、植物组织伪造。如用黄连、黄柏、石松子、海金砂、大黄、姜黄等粉末为主要原料，加蛋清、蛋黄、牛胆汁等制造。由于牛胆结石发病率低，约为0.2%，所以天然牛黄药源紧张，寻找代用品成为必然趋势。有关人工牛黄我国卫生部颁布人工牛黄标准：胆酸含量限度应为标示量的90%~110%，总胆酸的含量应不得少于25%；胆红素含量应为标示量的90%以上。人工牛黄应为黄色疏松的粉末，味苦，微甘。24天然牛黄、人工牛黄成分对比1）天然牛黄：2）人工牛黄：胆红素胆红素去氧胆酸猪去氧胆酸胆酸胆酸去氧胆酸胆固醇结合型胆甾酸盐磷酸三钙牛黄酸硫酸镁胆固醇

硫酸亚铁粘蛋白淀粉氨基酸肽类、脂肪酸卵磷脂钙盐、无机盐252．熊胆熊胆为熊科动物黑熊SelenarctosthibetanusCuvier或棕熊UrsusarctosL.的干燥胆。有清热、解痉、平肝、明目的功效。熊胆的化学成分主要为胆汁酸，其中熊去氧胆酸（ursodeoxycholicacid）占大部分，并含有鹅去氧胆酸（chenodeoxycholicacid）、胆酸及去氧胆酸等。这些胆酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合，并形成钠或钙盐而存在。熊胆的解痉作用的主要有效成分就是熊去氧胆酸，它也是熊胆特有的成分.26272829303．猪胆粉猪胆粉为猪科动物猪SusscrofadommesticaBrisson.胆汁的干燥品。有清热、润燥、解毒、止咳平喘的功效。猪胆中亦含有多种胆汁酸类成分，主要成分为猪去氧胆酸，亦含有鹅去氧胆酸、胆酸等成分。32（四）牛黄的定性分析

1、化学法（1）取牛黄粉末少量，加氯仿1ml，摇匀，再加硫酸与30％过氧化氢溶液各2滴，振摇，即显绿色。（2）取牛黄粉末约0.2g，加盐酸1ml，再加乙醚20ml振摇提取，放置，分取乙醚液，滤过后置分液漏斗中，加氢氧化钡饱和溶液20ml，振摇，即发生黄色沉淀。分离除去水层及沉淀，醚层用氢氧化钡饱和溶液洗涤。分取醚层，滤过，蒸干，残渣加氯仿1m1溶解，加醋酐1m1与硫酸2滴，振摇，放置10min，即显绿色。（3）取牛黄粉末0.1g，加60％醋酸4m1，研磨，滤过，取滤液1m1，加新制的糠醛溶液（1→100）1m1与硫酸（取硫酸50m1，加水65m1，混合）10ml，置70℃水浴中加热10min，即显蓝紫色。342．薄层色谱法

取本品粉末10mg，加氯仿20ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品液。另取胆酸、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品液。吸取上述溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15：7：5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。35游离胆汁酸的鉴别36结合胆汁酸的鉴别3738人工牛黄的定性鉴别：（1）取人工牛黄粉末适量，分为2份，1份加硫酸呈污绿色，另1份加硝酸显红色。（2）人工牛黄在可见光下λCHCl3max453nm处有最大吸收。（3）人工牛黄与天然牛黄的IR吸收光谱有明显差异。（4）胆红素化学反应：

VandenBergh反应（重氮化反应）：胆红素与重氮化试剂中的对氨基苯磺酸合成偶氮染料。此偶氮染料在强酸中呈蓝紫色；pH2.0~5.0呈红色；5.0以上则呈绿色（500~560nm）。39（五）牛黄的定量分析

1．薄层扫描法测定胆酸含量2．薄层扫描法测定六应丸中牛黄的有效成分3．薄层扫描法测定牛黄中胆汁酸的含量4．气相色谱法测定牛黄中胆汁酸的含量5．导数光谱法测定人工牛黄中胆酸的含量406．胆红素的含量测定

对照品溶液的制备：取胆红素对照品约10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆红素0.01mg）。标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，置具塞试管中，分别加乙醇至9ml，各精密加重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.1g，加盐酸1.5ml与水适量使成100ml；乙液：取亚硝酸钠0.5g，加水使溶解成100ml，置冰箱内保存。用时取甲液10ml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，于15~20℃暗处放置1h，以相应的试剂为空白，照分光光度法，在533nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。41

测定法：取牛黄细粉约10mg，精密称定，置锥形瓶中，加氯仿和乙醇（7：3）的混合溶液60ml、盐酸1滴，摇匀，置水浴上加热回流约30min，放冷，移至100ml棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗涤，并入量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加乙醇至9ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中胆红素的重量（mg），计算，即得。本品含胆红素（C33H36N4O6）不得少于35.0％。42（六）熊胆的定性分析

1．化学法取胆仁粉末在紫外光灯下应显黄白色荧光，而不应显棕黄色荧光；另取粉末约0.2g溶于7％冰醋酸溶液20ml中，溶液不应显浅蓝色乳浊荧光（与牛、羊胆区别）。2．薄层色谱法（1）取胆仁约100mg，加甲醇10m1，温热使溶，放冷滤过，滤液浓缩近干，加20％氢氧化钠溶液5ml。水浴水解5h，放冷，加盐酸至pH2~3，以乙酸乙酯萃取，浓缩至约5ml供试；另取胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸及去氧胆酸为对照品；分别点于同一硅胶G板上，用异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10：5：5：3：1，上层），取出晾干，喷以30％浓硫酸，105℃干燥10min，供试品应有与熊去氧胆酸相同的斑点。43（2）万应锭中熊胆的薄层鉴别供试品溶液制备：取本品6g，研碎，加甲醇20ml，置水浴上温浸1h，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液5ml，置水浴中加热水解8h，放冷，加水10ml，用醋酸乙酯提取两次(去杂)，每次20ml，水液加盐酸调节pH2-3，用乙醚提取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，使成1ml，作为供试品溶液。对照品溶液制备：取熊去氧胆酸，鹅去氧胆酸，胆酸，去氧胆酸，猪去氧胆酸对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液。展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸（15：7：5）显色剂：喷硫酸乙醇，加热，紫外灯下检视4445（七）熊胆的定量分析

1．紫外分光光度法2．气相色谱法3．高效液相色谱法464．薄层扫描法

薄层板为硅胶G，展开剂是异辛烷-正丁醚-冰醋酸（8：5：5），用30％硫酸乙醇液显色，120℃烘烤10min；反射法锯齿形扫描，λS380nm，λR800nm。对照品的回归方程为：熊去氧胆酸（UDCA）Y=1797X+98，r=0.9995；鹅去氧胆酸（CDCA）Y=1920X+8，r=0.9989。取引流熊胆和正品熊胆研细，干燥，取适量（约70mg）置10m1量瓶中，加适量甲醇，超声提取10min，定容后过滤，取溶液5ml挥干，于残渣中加10％氢氧化钠50m1，120℃水解5h；选用盐酸调显酸性（pH2以下），用乙酸乙酯抽提，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇定容至10m1，点样分析，计算样品中UDCA、CDCA含量，正品熊胆中UDCA含量为24.91%~41.10％，CDCAl7.65％~24.68％。47（八）猪胆粉的检查与定性、定量分析

2．检查牛、羊胆：取牛、羊胆对照药材各0.1g，按供试品溶液制备方法，同法制成对照药材溶液。吸取供试品溶液及上述对照药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，显色。供试品色谱中，不得显与牛、羊胆对照药材相同的斑点。还原糖：取本品10mg，加水2ml使溶解，滴加α-萘酚乙醇溶液(1→50)数滴，摇匀，沿管壁缓缓加入硫酸约0.5ml，两液接界面不得显紫红色环。异性有机物：取本品10mg，加水2ml使溶解，离心或滤过，取不溶物，置显微镜下观察，不得有植物组织、动物组织或淀粉等。水分：取本品约0.3g，精密称定，照水分测定法测定，不得过10.0％。48二．麝香的质量分析

麝香（moschus）是鹿科动物林麝MoschusberezovskiiFlerov、马麝M.sifanicusPrzewalski、原麝M.moschiferusLinnaeus的雄体香囊中的分泌物。具有抗炎、强心、雄性激素样等作用。麝香的化学成分复杂，目前已知的有：（1）麝香酮（muscone）含量约0.9％~3％，是天然麝香的主要有效成分之一，也是麝香的香味成分，有特异强烈的香气。对冠心病有如同硝酸甘油同样的作用。49（2）麝香吡啶和羟基麝香吡啶A、B（3）甾族化合物含有11种雄甾烷（androstane）衍生物。如雄性酮（androsterone）、表雄酮（epiandrosterone）、胆甾醇等。麝香的雄性激素样作用是与麝香所含的雄甾烷衍生物有密切关系，质量较佳的麝香，甾体雄性激素含量在0.5％左右。（4）多肽

MP（muskpeptidefraction）是麝香中含有的一种分子量为1000的多肽，有很强的抗炎活性，至少是氢化可的松的40倍。另有一种分子量约为5000~6000的多肽，抗炎活性为氢化可的松的20倍（5）脂肪酸、胆甾醇酯人工麝香为人工制成品，其组分类同与天然麝香，已于1993年底批准使用。50

国家林业局、国家工商行政管理总局部2005年3号公告，自2005年7月报日起，凡生产、销售天然麝香、熊胆粉的中成药全部实行中国野生动物经营利用管理专用标识。标有天然麝香成分字样将只限于以下几种：北京同仁堂集团公司的安宫牛黄丸上海雷允上药业有限公司的六神丸江苏苏州雷允上药业有限公司的六神丸福建厦门中药有限公司的八宝丹福建漳州片仔癀药业有限公司的片仔癀51525354（一）定性分析

1．薄层色谱取麝香2g，加入硅藻土5g，研磨均匀，置索氏提取器内，用200m1无水乙醚提取8h，提取液回收乙醚，残渣用少量氯仿溶解，点于硅胶GF254制备薄层上，以苯展开至15cm，取出并挥去溶剂；在紫外灯（254nm）下检视。刮取Rf值在0.46~0.67的第三荧光区带（麝香酮）及接近原点的荧光区带（甾体雄性激素）。前者用无水乙醚提取后，再同上层析，喷磷酸香草醛溶液（1g香草醛溶于5m1浓磷酸及15m1乙醇），于105℃烤5min可检出麝香酮。后者的乙醚提取液在硅胶GF254薄层上用苯-乙醚（1：1）展开，同上法显色可检出5α-雄甾烷-3，17-二酮、5β-雄甾烷-3，17-二酮、△4-雄甾烯-3，17-二酮。5556（二）定量分析

1．气相色谱法（1）药典方法色谱条件与系统适用性试验：以苯基（50％）甲基硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为2％；柱温200℃±10℃。理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含1.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取麝香约1g，精密称定，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重。取所得干燥品0.2g，精密称定，精密加无水乙醇2ml,密塞，振摇，放置1h，滤过，取滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算，即得。本品含麝香酮（C16H30O）不得少于2.0％。57（2）50批麝香中麝香酮的含量

①标准曲线的制备：标准溶液的制备是精密称取合成麝香酮约0.1g于50m1量瓶中，以苯溶解并稀释至刻度。内标准溶液是称取正十九烷约0.15g于25ml量瓶中，同样用苯溶解，并稀释至刻度。分别精密量取标准溶液1、2、3、4及5ml于10m1量瓶中，并分别加入内标准溶液2ml，以苯稀释至刻度，进样分析。以麝香酮量／正十九烷量（Wi／Ws）与麝香酮峰面积／正十九烷峰面积作标准曲线，用积分仪计算积分面积，求出内标的校正因子为1.07。58

②样品测定：精密称取研匀的麝香约0.2g，置三角瓶中，精密加入正十九烷的苯溶液10~20m1（内含正十九烷约7mg）冷浸1h，过滤，弃去初滤液，取续滤液，0.5~1µl进行气相层析。色谱柱为4%OV-17／GasChromZ（80~100目），载气为氢气，流速为45m1／min；柱温180℃；氢焰离子化检测器。测定结果表明50批麝香中麝香酮的含量呈正态分布：概率（％）麝香酮含量范围

50.01.98~3.0768.31.71~3.3495.00.93~4.1299.70.09~4.96

过去的文献报道麝香酮的含量为0.5％~2％，通过研究，认为文献报道值偏低。可能是由于测定方法不够准确，或测定批次较少的缘故。592．比色法

麝香制剂中麝香酮的测定：原理：

A.利用二硝基苯肼将麝香酮转变为相应的麝香酮苯腙

B.甲醇洗脱后加KOH，显色，使黄色的麝香酮苯腙变成葡萄酒红色，在480nm处有最大吸收。

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取人参再造丸45g，在乳钵中加适量的95％乙醇磨成粥状，抽滤，滤液置于分液漏斗中，加170m1石油醚和10m1蒸馏水提取4次，合并醚液，蒸去溶剂，残渣用苯2m1溶解，加入2，4-二硝基苯肼试液（2，4-二硝基苯肼1g与15m1无水乙醇、15m1乙酸乙酯及1ml浓盐酸混匀，加热溶解，放冷后使用）至4m1，摇匀后在60℃水浴中加热30min，取出冷却。点适当量在硅胶G薄层（110℃活化2h）上，用甲苯-乙酸乙酯（98：2）展开10cm，将麝香酮苯腙色点用5m1甲醇洗脱，加25％醇制氢氧化钾溶液（氢氧化钾25g溶于10m1蒸馏水，加95％甲醇至100m1）2m1，20min后在480nm处测定吸收度，并计算含量。614．高效液相色谱法

（1）麝香酮及激素衍生化后进行HPLC分析①衍生物制备：取2，4-二硝基苯肼1g，加无水乙醇15m1，乙酸乙酯15m1和浓盐酸1m1，加热至澄清。取麝香酮、△5-雄烯-3β-羟基-17酮及3α-羟基-5α-雄烷-17酮各100mg，分别加2，4-二硝基苯肼盐酸液5m1，于60℃水浴上加热30min，抽去溶剂，用乙醇重结晶，得麝香酮腙及激素的酮腙衍生物。（2）麝香甾体成分的高效液相法分析采用对硝基苯甲酰氯衍生法。正相硅胶柱YWG80，4.0×250mm。针对甾体化合物结构不同，采用了3种不同流动相和不同的检测波长。62三、蟾酥的质量分析

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufobufo

gargarizansCantor或黑眶蟾蜍B.melanostictusSchneider的耳下腺及皮肤腺的干燥分泌物，具解毒、止痛、开窍醒神之功效，是中成药六神丸、痧药丸、牛黄消炎丸等的组成药物之一。

蟾酥的化学成分复杂，主要成分有强心甾体类、吲哚碱类、甾醇类以及肾上腺素、多糖、蛋白质、氨基酸、有机酸等。63

1．强心甾体类

（1）六元内酯环型的强心甾类：基本结构为蟾酥二烯，具有24个碳原子，在C3位上有β-OH、C14位上有β-OH或14β、15β-环氧，A／B环为顺式，属粪甾烷型，B／C环和其它天然甾体化合物相同为反式，C／D环和强心甾烯相同为顺式。蟾酥的强心甾类化合物有游离型和结合型之分，游离型称蟾毒配基（bufogenin），已知有近20种，如华蟾毒配基（cinlbufogenin）、脂蟾毒配基（resibufogenin）、蟾毒灵（bufalin）等，大多为干燥加工过程中的分解产物。上述蟾毒配基在新鲜蟾酥浆中不是以苷的形式存在，而是在C3-羟基与辛二酰精氨酸等结合成酯。（2）五元强心甾烯蟾毒类：如沙门苷元-3-辛二酸精氨酸酯、沙门苷元-3-硫酸脂、沙门苷元-3-半辛二酸酯等。65

2．吲哚类生物碱

3．甾醇类

6667686970（一）定性分析

蟾酥甾体类成分的化学定性分析可分二类：（1）强心甾烯蟾毒类：普通的强心苷类试剂如Legal、Raymond、Kedde等试剂，可用于强心甾烯蟾毒类的鉴定。（2）蟾蜍甾二烯类：上述试剂对于蟾蜍甾二烯类没有显色反应，通常用浓硫酸使蟾蜍甾二烯类显色，也可用三氯化锑、磷钼酸试剂。蟾酥中蟾毒配基在进行硅胶TLC时可用的展开剂有环己烷-氯仿-丙酮（4：3：3）、环己烷-丙酮（7：3）、正己烷-乙酸乙酯（1：9）、乙醚-乙酸乙酯（6：4）等。鉴于蟾酥强心甾体类化合物多有紫外吸收，如强心甾烯的λmax为217土3nm，蟾蜍甾二烯的λmax约300nm，可用TLC和UV进行定性和定量分析721．化学法

（1）取蟾酥粉末约0.1g，加甲醇5m1，浸泡1h，滤过，滤液中加对二甲氨基苯甲醛固体少量，滴加硫酸数滴，即显蓝紫色.（2）取蟾酥粉末0.1g，加氯仿5m1，浸泡1h，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。（3）取0.5g样品置磁点滴板上，加3d浓硫酸脂蟾毒配基柠檬黄-绿–黄绿华蟾毒配基黄-桔黄-紫红-蓝蟾毒灵灰棕-棕-灰-灰绿732．薄层色谱法

（1）药典法取蟾酥粉末0.2g，加乙醇10ml，加热回流30min，滤过，滤液置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，作为供试品溶液。另取蟾酥对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取脂蟾毒配基及华蟾酥毒基对照品，加乙醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷-氯仿-丙酮（4：3：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个绿色及一个红色斑点。74薄层板高效硅胶60F254预制板；厚度：200μm75（2）麝香保心丸中蟾酥的TLC76（二）定量分析

1．高效液相色谱法（1）药典法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈（50：50）（用磷酸调节pH值为3.2）为流动相；检测波长为296nm；柱温40℃。理论板数按华蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰计算应分别不低于4000。对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品各10mg，分别置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取5ml，各置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含华蟾酥毒基、脂蟾毒配基各50μg）。77

供试品溶液的制备：取蟾酥细粉约25mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总量不得少于6.0％。782．紫外分光光度法3．气相色谱法4．薄层扫描法79四．斑蝥的质量分析

斑蝥为芫青科昆虫南方大斑蝥MylabrisphalerataPallas、黄黑小斑蝥M.cichoriiLinnaeus的干燥虫体。具破血消癥、攻毒蚀疮之功效。含斑蝥素（cantharidin）、羟基斑蝥素，另含挥发油、甲壳质、甲酸等80818283（一）定性分析-薄层色谱法

取斑蝥粉末3g，加氯仿20ml，振摇，浸泡2h，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚（30~60℃）洗3次，每次5ml，小心倾去上清液，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取斑蝥素对照品，加氯仿制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。取上述溶液各5µl分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮（98：2）展开，晾干，喷以0.1%溴甲酚绿乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的斑点。84（二）定量分析1．气相色谱法色谱条件与系统适应性试验：以甲基硅橡胶（SE-30）为固定液，涂布浓度为3.5%；柱温为175℃±10℃。理论塔板数按斑蝥素峰计算应不低于2600。对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，即得（必要时可稀释）。供试品溶液的制备：取本品粗品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿30ml，振摇15min，放置6h，滤过，滤液置50ml量瓶中，用氯仿洗涤残渣与滤纸，洗涤液入同一量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2µl，注入气相色谱仪，计算，即得。本品含斑蝥素（C10H12O4）不得少于0.35%。86第三节海洋药物分析

一．海洋动物药主要化学成分及药理作用研究进展

（一）海洋天然产物主要化学类型1．多糖

2．大环内酯类

3.萜类

4．非肽含氮类化合物5．甾醇

6.皂甙

87（二）海洋天然产物的主要生理活性

1．抗癌海洋天然产物

2．抗心脑血管疾病海洋活性物质

3．海洋抗病毒活性物质

4．海洋抗菌抗炎活性物质

5．抗衰老海洋药物

88二．海洋动物药成分含量测定方法研究

1．分光光度法测定粗吻海龙中总甾体的含量2．毛细管气相色谱法测定海龙、海马类药材中甾体类成分3．薄层色谱扫描法测定海康胶囊中海参多糖含量4．琼脂糖凝胶电泳法测定扇贝糖胺聚糖含量5．反相高效液相色谱法-蒸发光散射检测器检测河豚毒素89矿物药分析

90第一节概述

现在较常用的矿物药约有50余种。矿物药的品种虽比动、植物药少，但其在医疗上的价值却很重要。矿物药中有毒性的药材也较多，如《中国药典》2005年版收载矿物药22种，约占收载药材的4％，但属于毒性中药的就有7种，约占1/4，而且一类剧毒中药均为矿物药。从目前常用的矿物药中发现品种混乱现象也较严重，如自然铜、寒水石、阳起石、花蕊石、赭石等。有些矿物药如芒硝、玄明粉、石膏等也存在一定的质量问题。911988年国务院颁布《医疗用毒性药品管理办法》列出有毒中药:砒石（红砒、白砒）、砒霜、水银、生马钱子、生川乌、生草乌、生白附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蟊、红娘子、生甘遂、生狼毒、生藤黄、生千金子、生天仙子、闹羊花、雪山一枝蒿、蟾酥、洋金花、红粉、轻粉、雄黄、红升丹、白降丹92一．矿物药的特点

矿物药包括可供药用的天然矿物、岩石、古化石、矿物加工品及化学制品等。其中多数为矿物和岩石。矿物是自然界由于地质作用所形成的天然单质或化合物，他们具有:（1）相对固定的化学组成，大多数为无机化合物;（2）以固态为主，具有确定的晶体结构;（3）岩石是同种固态矿物组成的集合体。在一定的物理、化学条件下相对稳定，当外界条件变化到一定程度时，它也随之改变。组成在新的条件下稳定的化合物。93二．矿物药的分类矿物药一般按矿物药中的主要某类化合物作为分类依据，如氧化物类：磁石、赭石、铅丹硫化物类：雄黄、朱砂硫酸盐类：石膏、白矾、芒硝另外，还可以按阳离子分类，如钙化物：石膏汞化物类：朱砂、轻粉、红粉砷化物类：信石、雄黄9495三．矿物药的鉴别方法

矿物药的常用分析鉴定方法有性状鉴定、显微鉴定、理化分析三大类。目前常用的法定检验法中，定性多用离子反应、火焰反应和沉淀反应；含量测定多用容量法和重量法。由于仪器分析的发展，红外分光光度法、热分析法、放射活化法、原子吸收分光光度法、激发光谱法、电化学分析等亦已应用于矿物药的分析。显微鉴定是鉴定矿物药光学性质的重要方法。中成药中矿物药成分的定量分析进展较快，特别是含汞、砷化合物的中成药96第二节矿物药的

常用理化分析方法

矿物药分析的一般程序是：取样-试样分解-定性分析-定量分析。其中试样的分解是将待测组分转入溶液中的重要步骤。一般要求：①试样分解必须完全；②试样分解过程中待测组分不应有损失；③试样分解过程中不应引入被测组分或干扰组分。97常用的分解方法有：溶解法（湿法）和熔融法（干法）两种。（1）溶解法：最简便的分解方法，就是将试样溶解在水、酸或其他溶剂中的分解方法，通常采用水、稀酸、浓酸、混合酸的顺序进行处理。当溶解法不能将试样完全溶解时，可采用熔融法。（2）熔融法：将试样与固体熔剂混合，然后在高温下加热至全熔或半熔，使欲测组分转变为可溶与水或酸中的化合物。熔剂可分为碱性熔剂（如碳酸钠、氢氧化钠）、酸性熔剂（如硫酸氢钾、焦硫酸钾）、氧化性熔剂（如过氧化钠、碳酸钠加硝酸钾）和还原性熔剂（碳酸钠加硫）等。可根据不同矿物药的性质加以选用。98一．容量法

在矿物药法定的分析方法中以容量法最为常见。主要是利用容量法中配位滴定、酸碱滴定、氧化还原滴定等。（一）配位滴定法的应用1．应用原理及注意事项（1）应用原理以形成配位化合物反应为基础的滴定法称为配位滴定法（或称配合物滴定法）。

99

而现在应用最广的是有机氨酸配位剂中的乙二胺四乙酸（EDTA），在此重点介绍EDTA法。

EDTA与金属离子形成的配合物的配位比较简单，一般情况下为1：1，EDTA分子中含有2个氨基与4个羧基，共6个配位原子，大多数金属离子的配位数都不超过6，所以无论二价、三价、四价均按1：1配位，仅有少数高价金属离子与EDTA形成2：1配合物，如Mo5+、Zr4+。配位滴定法多用于测定含钙、铝等的矿物药，有用标准溶液乙二胺四醋酸二钠液直接滴定，如石膏、钟乳石、紫石英。也有加过量乙二胺四醋酸二钠溶液，用锌液回滴，如白矾。100（2）pH值的控制在EDTA滴定中，pH值非常重要，各种金属离子有不同的最低pH值要求，低于此pH值的配合物即不稳定。在一定pH值范围内各种离子间相互干扰，但我们可以利用控制pH值的方法在同一溶剂中连续滴定几种离子

EDTA滴定常用的指示剂，在pH小于7时可用二甲基橙，pH大于7时可用铬黑T、铬黑蓝R或紫脲酸胺。101（3）掩蔽剂的使用消除各离子间的干扰，除上述控制pH的方法外，还常用掩蔽剂。掩蔽剂的使用可分为以下两种形式：①利用配位反应降低干扰离子的浓度来消除干扰的方法称为配位掩蔽法。②利用产生沉淀掩蔽的方法称为沉淀掩蔽法。102（二）配位滴定法的应用实例

1．石膏中钙离子的测定石膏用稀盐酸溶解后，以甲基红为指示剂，加KOH试剂调节到浅黄色，再加5m1KOH试剂，用钙黄绿为指示剂，用EDTA二钠滴定钙。

2．白矾中铝离子的测定白矾用水溶解后，加pH4.8的醋酸—醋酸铵缓冲液，准确加入过量的EDTA二钠溶液，微沸10min（使之与铝离子配合），冷却后，加乙醇，用二苯二硫代偕肼腙为指示剂，用锌标准液滴定过剩的EDTA。103（三）酸碱滴定法的应用

一般的酸、碱及能与酸、碱发生中和反应的物质均可用酸碱滴定法测定。中和反应通常不发生外观变化，因此，需用指示剂的变化来显示终点。不同的指示剂变化的pH值不同，不同程度的酸碱中和需采用不同的指示剂，亦可用电位法指示终点，电位法结果准确，尤适用于有色物质的测定。矿物药中的碳酸盐常采用酸碱滴定法。104（四）氧化还原滴定法的应用

以氧化还原反应为基础的滴定反应称为氧化还原滴定法。在氧化还原反应中发生电子转移，给出电子的物质为还原剂，接受电子的物质为氧化剂，反应物质的化学计量是以反应过程中电子的数目来决定的，即：化学计量=分子量／电子得失数氧化还原法多用于含汞、砷、铁等矿物药。药典采用的方法有碘量法（直接、间接）、高锰酸钾法。105二．重量法

重量法是一种经典分析方法，它是用分析天平称取沉淀的重量，来确定所测组分中被检离子的含量。要获得准确的结果，减少误差，对沉淀有如下要求：（1）被测组分要沉淀完全，而形成的沉淀其溶解度要很小，即沉淀剂要选择恰当，而且要过量，使产生同离子效应，促使沉淀完全，一般以超过20％~50％为宜。过多时可能产生配合反应，而使沉淀溶解度加大。106（2）沉淀要纯净，主要是避免“共沉淀”。其沉淀的来源是：①表面吸附，沉淀颗粒越小，表面吸附越多；②吸留，是由于沉淀速度过快，杂质包入其中；③后沉淀，是指在放置过程中其它物质沉淀。

为了提高沉淀的纯度，应使易吸附物质的浓度降低，反复洗涤沉淀，使沉淀的粒子加大。107（3）要求沉淀的颗粒大，使之易于洗涤与过滤。加大颗粒的办法有：①减少沉淀物质的浓度，即在稀溶液中，慢慢加入沉淀剂，并不断搅拌，防止局部浓度过大。②增加沉淀过程中沉淀的溶解度，在热溶液中进行沉淀。③陈化，可放一段时间。108三．红外分光光度法

矿物的红外吸收主要是由阴离子的晶格振动所引起，其吸收位置与受分子中阳离子的影响较小，一般阳离子质量的增加，仅使吸收位置向低波数方向稍作位移。红外分光光度法用于矿物药分析时，一般是先将样品粉碎，过200目筛，然后用石蜡糊或KBr压片法测定。在解析图谱时，应注意吸水的干扰，另外由于杂质的存在、样品晶体在光路中方向的不同、多晶异构水合类型的不同、离子交换现象，常使测得的光谱与标淮图谱不一致。红外分光光度法通常用于定性分析，109四．热分析法

1．热重法（Thermogravimetry，TG）2．差热分析（DifferentialThermolAnalysis，DTA）

3．差示扫描量热法（DifferentialScanningCalorimetry，DSC）110五．其它理化分析方法

现代分析方法如原子吸收分光光度法、放射活化分析法、X射线衍射法、荧光光谱法、电化学分析法等在矿物药的未知成分及微量元素分析方面已得到较广泛的应用。发射光谱半定量分析应用最广，用于微量元素分析（包括植物药、动物药均可）。111第三节常用矿物药质量分析

一.朱砂的质量分析朱砂为硫化物类矿物辰砂族辰砂，主含硫化汞（HgS），具清心镇惊,安神解毒之功效。不少著名的中成药中都含有朱砂，如六神丸、牛黄清心丸、再造丸、冰硼散、一捻金、安宫牛黄丸等。1．定性分析（1）取朱砂粉末，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面显银白色光泽，加热烘烤后，银白色即消失。（2）取朱砂粉末2g，加盐酸-硝酸（3：1）的混合溶液2ml使溶解，蒸干，加水2ml使溶解，滤过，滤液显汞盐与硫酸盐的鉴别反应。1121132．定量分析

（1）容量法取朱砂粉末约0.3g，精密称定，置锥形瓶中，加硫酸10ml与硝酸钾1.5g，加热使溶