NQO1蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

NQO1蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义〔〕:

摘要：目的观察并分析在结直肠癌组织中NQO1蛋白的表达和意义。方法选取本院2022年1月至2022年1月收治的结直肠癌患者100例，对NQO1在结直肠癌组织中的表达进展观察。结果siRNAi组与正常组在24h、48h、72h时相比细胞活性显著降低〔P

1资料和方法

1.1临床资料。以2022年1月至2022年1月收治的100例结直肠癌患者为研究对象，男性50例，女性50例，最小年龄27岁，最大年龄85岁，平均〔59.98.9〕岁，肿瘤直径为1.8-16.0cm，平均〔6.71.8〕cm；其中右半结肠癌、直肠癌、左半结肠癌分别为30例、35例、35例。

1.2方法。NQO1mRNA表达情况采取实时定量PCR进展检测，NQO1蛋白表达情况采取Westernblotting和免疫组化方法进展检测，采取siRNA技术来干扰结直肠癌细胞系思维8NQO1表达。所需设备：上海普迪生物技术消费的ABI7300荧光定量PCR仪；郑州南北仪器消费的EL204梅特勒电子天平；NQO1和GAPDH一抗来自CellSignalingTechnology公司；尔康来自碧天公司；选用南京建成生物工程研究所制定的免疫组化检测试剂。

1.3细胞和siRNA试验。从美国形式培养物保藏所选购人结直肠癌细胞SW480，正常培养，将HepG2，2x105cell在干扰前孔铺6孔板，改进培养基使用无血清，干扰时间为细胞聚集度为40%。S干扰W480细胞中NQO1表达使用siRNA技术，在siRNAduplex-LipofectamineTMRNAiMAX按照LipofectamineTM商品说明书参加培养基内。经过4h孵育后，更换为10%FBS培养基。测定细胞活力在干扰后，选购上海基因治疗有效公司的siRNA细胞和正常组Contactin1靶标。

1.4定量PCR检测。提取组织总RNA用Trizol法，测定RNA纯度和浓度采取紫外分光光度计，后取2g进展逆转录，生成cDNA。采取SYBRgreen染料法进展定量检测。

1.5Westernbiot检测。提取总蛋白，二奎琳甲酸测定蛋白质含量后进展凝胶电泳，样本为20g，电转至聚偏氟乙烯薄膜后，封闭2h使用3%的脱脂奶，孵育抗人NQO1和GAPDH一抗，4℃孵育过夜，TBST洗膜，孵育二抗后显影。对条带亮度分析。

1.6免疫组化。对5m石蜡切片染色，在10mmol/L柠檬盐缓冲液〔pH6.0〕的热激30min介导抗原复性，采取抗NQO1单克隆抗体孵育，4℃过夜，洗涤后孵育二抗，曝光使用显色液。

1.7统计学处理。数据应用SPSS18.0进展分析，其中计数进展chi;2〔%〕检验，计量进展t检测〔s〕检验，P

2.2新颖样本NQO1mRNA、NQO1蛋白。结直肠癌组与非肿瘤组织相比NQO1mRNA、NQO1蛋白的表达量比照有统计学意义〔P

2.3NQO1表达与结直肠癌患者临床病理学特征关系。结直肠癌患者样本为肿瘤组织NQO1阳性率为58.00%〔58/100〕明显高于临近肿瘤组织NQO1阳性率16.00%〔16/100〕〔P

3讨论

结直肠癌是临床常见恶性疾病，具有较高的发病率。一般情况下，通过外科手术就可治疗，但是当癌细胞出现转移时，手术治疗不可根治，且效果降低【3】。为尽早对疾病作出评估，找到结直肠癌预后生物标志物非常重要，既可进步治疗效果，也可改善生活质量【4】。

NQO1蛋白在很多癌症中出现高表达的情况，如肺癌、乳腺癌、甲状腺癌等，有关研究认为【5】NQO1可作为标志物在肿瘤的检测中。本次研究结果显示，siRNAi组与正常组在24h、48h、72h时相比细胞活性显著降低，说明NQO1会改变结直肠癌细胞的生长和增殖才能改变。结直肠癌组NQO1mRNA和蛋白的表达量较非肿瘤组织相比明显升高，结直肠癌患者临近非肿瘤组织NQO1阳性率显著低于肿瘤组织。NQO1表达与肿瘤直径、TNM、结直肠癌患者肿瘤转移关系亲密。从而说明NQO1可作为结直肠癌患者生物学标志物。

参考文献

【1】马跃,林黎娟,朴豪杰,等.结直肠癌中NQO1蛋白表达的临床病理及预后意义[J].临床与实验病理学杂志,2022(4):366-370.

【2】周娇娇.表观遗传学对调控转移的相关性研究miR-320a/b及ALDH1a3和NQO1甲基化对转移调控作用研究[D].浙江大学,2022.

【3】谢慧君,袁明明,王伟伟,等.结直肠癌患者NQO1蛋白检测的临床意义及疾病预后价值分析[J].医学理论与理论,2022,30(17):2513-2516.

【4】孙立园,赵杨,刘莎莎,等.结直肠癌组织中IGFBP-3、u-PA蛋白的表达变化及其意义[J].山东医药,2022,58(23):51-53.

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