社区获得性肺炎不典型致病课件

社区获得性肺炎非典型致病原

流行病学调查

解放军总医院

王睿

对于社区获得性肺炎的致病原的研究是一个全世界比较关注的问题。近年来，随着对非典型致病原（肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌）分离鉴定水平的提高，其在下呼吸道感染中的地位逐渐被人们所认识。我国关于非典型致病原所致社区获得性肺炎的研究很少，为了解非典型致病原感染现状，我们参加了亚洲地区多中心社区获得性肺炎流行病学调查。

资料和方法

病例入选标准

住院或门诊病人，年龄大于18岁；X线胸片有新的浸润或实变，并且不能用其他原因解释；病人同时必须有下列症状或体征至少3项：

（1）咳嗽、咳嗽加重或无痰干咳；

（2）痰性质的突然改变；

（3）体温>38℃或<36.1℃或在近24小时内有明确的发热

或体温过低；

（4）肺部听诊有罗音或其他肺实变证据；

（5）白细胞增加；

（6）全身不适、肌肉痛或胃肠道症状

临床资料

病例收集：

收集2001年11月至2002年3月解放军总医院、北京大学第三医院、北京友谊医院、海军总医院社区获得性肺炎患者共52例。

年龄1886岁，平均年龄43.7521.5岁

男性29例，女性23例。

标本采集：

取患者急性期及恢复期静脉血标本、

急性期尿标本、

痰标本（无痰者留取咽拭子），共有痰标本49个，咽拭子标本3个。

标本采集方法与处理

1血清学标本：

抽取静脉血按常规方法分离血清，间隔2-4周再采血一次，与第一次标本同时进行血清学检测。

2PCR标本：

取患者痰标本200l加入含1ml10:1TE缓冲液（pH8.0）的小离心管中；咽拭子标本用1.0ml上述缓冲液浸泡棉签，经反复挤压后弃掉棉签。二者皆震荡30秒后，-20℃保存至DNA提取。

3尿液标本：

尿液用无菌容器留取，取1.5ml-20℃保存。

检测方法

1血清学方法

肺炎支原体：应用日本Fujirebio公司生产的SerodiaMycoⅡ诊断试剂盒检测血清抗体。

阳性标准：根据病期的变化，间隔2-4周采集的2次标本的血清抗体滴度呈现4倍或4倍以上升高或减低，或抗体滴度持续1:160。

嗜肺军团菌：应用美国MarDx公司生产的军团菌间接荧光抗体（IFA）试剂盒检测血清IgG抗体。

阳性标准：间隔2-4周采集的2次标本的血清IgG抗体滴度呈现4倍或4倍以上升高或减低，判断为阳性。

肺炎衣原体：应用美国Focus公司生产的衣原体微量免疫荧光（MIF）试剂盒检测血清IgG、IgA抗体。

阳性标准：根据病期的变化，间隔2-4周采集的2次标本的血清IgG或IgA抗体滴度呈现4倍或4倍以上升高或减低，或IgG抗体滴度持续1：512。

DNA模板的制备以及PCR扩增

取200l上述标本储存液，13，000rpm离心30分钟，收集标本，去上清后加50l裂解液55℃水浴1小时，煮沸15分钟，放于4℃，作为DNA模板备用。若PCR扩增中有抑制剂存在，则用酚-氯仿抽提DNA。

PCR扩增加用UNG预处理，消除既往DNA扩增所致污染；若应用内参照检测标本中有抑制剂存在，则应用标准的酚-氯仿方法抽提DNA，再次扩增。

结果

52例患者中有24例诊断为肺炎支原体感染，阳性率为46.2%，其中支原体血清抗体和PCR检测皆阳性20例，确诊阳性率为38.5%；3例患者PCR阳性而血清抗体阴性，1例患者血清抗体阳性而PCR阴性，可疑阳性率为7.7%，

2例患者诊断为嗜肺军团菌感染，阳性率为3.8%。3例患者诊断为肺炎衣原体感染，阳性率为5.8%。

3例患者存在合并感染，2例为肺炎支原体合并肺炎衣原体感染，1例为肺炎支原体合并嗜肺军团菌感染。

表152例患者感染分布情况表感染源感染病例数感染百分率可疑为单纯支原体2140.4确诊为单纯支原体1732.7单纯衣原体11.9单纯军团菌11.9支原体+衣原体23.8支原体+军团菌11.9图152例患者感染情况图表2：15例肺炎支原体PCR（+）,双份血清抗体滴度呈

4倍或4倍以上升高或减低的检测值

编号

急性期血清抗体

恢复期血清抗体1<1:401:801:6401:163840<1:401:801:801:6401:204801:51206<1:401:801:51201:8192081:3201:2560表2：15例肺炎支原体PCR（+）,双份血清抗体滴度呈

4倍或4倍以上升高或减低的检测值

编号

急性期血清抗体

恢复期血清抗体9<1:401:640101:3278601:40960111:401:10240121:12801:10240131:6401:2048014<1:401:256015<1:401:80

说明：15例患者占诊断为肺炎支原体感染的62.5%，占调查总人数的19%表3.5例肺炎支原体PCR（+），双份血清抗体滴度持续大于或等于1：160的检测值

编号

急性期血清抗体

恢复期血清抗体

161：3201：320171：25601：2560181：6401：640191：6401：640201：25601：1280

说明：5例患者占诊断为肺炎支原体感染的20.8%，占调查总人数的9.6%

表57例患者混合细菌感染情况

患者编号混合感染的致病原1肺炎链球菌+肺炎支原体+嗜肺军团菌2流感嗜血杆菌+肺炎支原体3肺炎链球菌+肺炎支原体+肺炎衣原体4流感嗜血杆菌+肺炎支原体5肺炎支原体+肺炎衣原体6肺炎链球菌+流感嗜血杆菌+肺炎支原体7肺炎链球菌+肺炎支原体图224例支原体CAP感染患者年龄分布图

讨论

近年来非典型致病原在社区获得性肺炎中的作用逐渐受到重视。国外报道在社区获得性肺炎中，由非典型致病原所致者大约占340%。大多数研究显示肺炎支原体感染在非典型致病原所致的社区获得性肺炎中发病率为首位，在成人CAP患者中占2-30%左右；军团菌属作