植物化学成分分离法

关于植物化学成分分离法第1页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五对溶剂的要求：

a.对所需成分溶解度大，对杂质溶解度小，或反之；

b.不与所需成分起化学反应，即使反应也是可逆的；

c.经济易得，并具有一定安全性；

d.沸点适中，便于回收反复使用。第2页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五常用提取溶剂分二大类：惰性溶剂——水、乙醇、甲醇、苯、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等反应溶剂——稀酸、稀碱的水溶液或醇溶液第3页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五

二、提取方法

a.浸渍法

b.渗漉法

c.煎煮法

d.回流提取法

e.连续回流提取法第4页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五采用几种不同极性的溶剂分步提取

常用系统：己烷—乙醚—甲醇—水己烷—二氯甲烷—甲醇—水提供生物试验样品第5页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五单一溶剂提取水：

a.胺型生物碱、甙类、有机酸可直接用水提取；

b.杂质较多，分离困难——加戊醇、辛醇;薄膜浓缩；

c.易发霉发酵——加甲苯、甲醛、氯仿等防腐剂。有机溶剂（最常用乙醇）：

a.冷提杂质较少；

b.热提效率高，但杂质亦较多。第6页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五多种溶剂处理利用所含成分在某种溶剂中溶解度的差异而达到分离的目的。

例：苦楝皮磨粉苯液醇液油脂类川楝素

苯浓缩石油醚溶解结晶60%乙醇减压浓缩氯仿提取第7页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第二节两相溶剂萃取法混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中，由于分配系数不同而达到分离的目的。用于脂溶性成分和水溶性成分的分离。分离生物碱时常用pH梯度萃取。第8页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五

例：从蛔蒿中提取驱蛔有效成分山道年第9页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第三节吸附法吸附法的目的：吸附除去杂质（鞣质色素）吸附所需物质常用吸附剂：氧化铝、氧化镁、酸性白土、活性炭第10页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五例：羊角拗甙的提取羊角拗种子石油醚脱脂95%乙醇醇提液蒸馏至干水溶液热水溶解滤液粗强心甙粗甙乙酸铅除杂质脱铅硫酸铵滤液乙醚氧化镁拌匀乙醇丙酮回流总甙第11页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第四节沉淀法利用某些成分与某些试剂产生沉淀的性质而得到分离或除去杂质的方法。对所需成分来说，沉淀反应是可逆的。最常用的是铅盐法。脱铅方法可通硫化氢气体，也可用硫酸、磷酸、硫酸钠、磷酸钠等。第12页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五几种实验室常用的沉淀剂常用的沉淀剂化合物中性乙酸铅酸性，邻位酚羟基化合物，有机酸，蛋白质，黏液质，鞣质，树脂，酸性皂甙，部分黄酮甙碱式乙酸铅上述物质，某些甙类，生物碱等碱性物质明矾黄芩甙雷氏铵盐生物碱碘化钾季胺生物碱咖啡碱、明胶、蛋白鞣质胆固醇皂甙苦味酸、苦酮酸生物碱氯化钙、石灰有机酸第13页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第五节透析法利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，而大分子物质不能通过半透膜的性质达到分离的方法。

电透析示意图第14页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第六节升华法凡具有升华性质的化合物，均可用此法进行纯化。此法简单易行，但往往不完全，常伴有分解现象，产率低。例：樟木中的樟脑、茶叶中的咖啡碱、植物中的苯甲酸等成分的纯化。第15页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五

第七节结晶和重结晶

结晶的目的在于进一步分离纯化，便于进行化学鉴定及结构测定工作。纯化合物的结晶有一定的熔点和结晶学特征，有利于化合物性质的判断。初析出的结晶总带有一些杂质，需反复结晶，才能得到纯粹的单一晶体。第16页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五一、结晶的条件需要结晶的溶液往往呈过饱和状态。通常是在加热的情况下，使化合物溶解过滤除去不溶性杂质，浓缩，放冷，析出。一般放置对形成结晶来说是一个重要条件。浓度适中，逐渐降温，有可能析出纯度较高的结晶。第17页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五二、结晶溶剂的选择对所需成分的溶解度随温度的不同而有显著的差别；不发生化学反应；其沸点低于化合物的熔点。第18页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五三、制备结晶的方法结晶形成的二个步骤：晶核的形成结晶的增长化合物结晶溶解浓缩过滤静置第19页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五如无结晶析出，可采取：

a.松动瓶塞；

b.加入少量晶种；

c.用玻璃棒摩擦玻璃容器内壁；

d.用干冰降温；

e.加有机可溶性盐类盐析。第20页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五四、不易结晶或非结晶体的处理若是由于纯度不够，夹杂不纯物引起的，需要进一步分离纯化。若是本身的性质，往往需要制备结晶性的衍生物或盐，然后用化学方法处理回复到原来的化合物。第21页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五五、结晶纯度的判断结晶形状：针状、柱状、棱柱状、板状、片状、方晶、粒状、簇状、多边形棱柱状初步鉴定的依据：形状、色泽、熔点薄层层析气相层析高效液相层析波谱技术第22页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第八节层析分离方法一、基本原理

利用不同的物质在两相（固定相和移动相）中不同的平衡分配系数来进行分离。

k=CsCm固定相中的浓度移动相中的浓度第23页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五二、层析法的分类根据两相所处的状态来划分：液相层析——液-固层析、液-液层析气相层析——气-固层析、气-液层析

根据层析过程的机理来划分：吸附层析——液固吸附层析、气固吸附层析分配层析——液液分配层析、气液分配层析排阻层析——液固排阻层析、气固排阻层析离子交换层析——有机离子交换树脂、纤维素及无机高分子交换剂第24页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五三、常用的层析方法

层析填料是决定柱效的主要因素。填料应具有的性能是不溶于所使用的流动相中，不使欲分离的物质破坏或分解，惰性大，可逆性强，吸附容量大，同时颗粒直径范围要窄。1.硅胶层析

层析硅胶为多孔性物质，可用通式SiO2.xH2O表示。其表面有很多游离(Ⅰ)、键合(Ⅱ)和键合—活性(Ⅲ)状态的硅醇基，通过氢键与极性或不饱和分子相互作用，同时能吸附多量的水分。第25页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五硅胶含水量与活性的比较

活性加入水量（%）

Ⅰ0Ⅱ5Ⅲ15Ⅳ25Ⅴ38

硅胶的吸附性能取决于硅胶中硅醇基的数目，其次是含水量，它随着水分的增加而降低。第26页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五层析柱的制备与加样

湿法装柱；干法装柱。样品溶于移动相，柱顶加入；样品溶于适当溶剂，拌硅胶，待溶剂挥发，加移动相上柱。应用范围广，适用于非极性和极性化合物。层析溶剂的选择

根据物质的极性采用相应的极性溶剂来洗脱。硅胶的再生

乙醇或甲醇洗涤，除去溶剂，烘干活化处理。第27页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五2、氧化铝层析最常用吸附剂之一，微碱性。氧化铝含水量与活性的关系

活性加入水量（%）

Ⅰ0Ⅱ3Ⅲ6Ⅳ10Ⅴ15第28页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五洗脱用溶剂

极性溶剂洗脱能力大。氧化铝再生

甲醇、稀乙酸、稀氢氧化钠、水依次洗涤，200℃活化。第29页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五3、活性炭层析分离水溶性物质的主要方法之一。吸附作用在水溶液中最强，在有机溶剂中较弱。对物质的吸附力：芳香族化合物＞脂肪族化合物大分子化合物＞小分子化合物极性基团多的化合物＞极性基团少的化合物第30页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五4、离子交换层析影响离子交换的有关因素

a.

溶液的酸碱度

b.对交换离子的选择性

c.被交换物质在溶液中的浓度

d.温度的影响

e.溶剂的影响第31页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五第32页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五5、大孔吸附树脂层析不含交换基团的具有大孔结构的高分子吸附剂，也是一种亲脂性物质。吸附力主要依靠分子中的亲脂键、偶极离子及氢键作用。解吸容易，吸附容量大。第33页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五6、凝胶层析

固定相——凝胶，具有许多孔隙的网状结构的固体，有分子筛的作用。亲水性凝胶——葡聚糖凝胶。

疏水性凝胶——在交联葡聚糖分子上引如一个基团增大其亲脂性

第34页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五7、聚酰胺层析分子中含丰富的酰胺基，可与酚、酸、醌、硝基化合物等形成氢键结合而被吸附，与不能形成氢键的化合物分离。化合物分子中酚羟基数目越多，吸附力越强；芳香核、共轭双键多的吸附力也大。易形成分子内氢键的化合物，会使化合物的吸附力减弱。第35页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五8、快速层析(加压柱层析)硅胶颗粒400—230筛目干法装柱第36页，共43页，2022年，5月20日，1点58分，星期五9、离心液相层析优点:a.分离周期短

b.操作简便

离心液相层析分离程序第37页，共43页，2022年，5月20日，1